波棱甲素納米混懸劑的制備及其膠囊體外溶出度的測定

波棱甲素納米混懸劑的制備及其膠囊體外溶出度的測定

波洛瓜是遼寧省植物的波洛瓜。《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥標(biāo)準(zhǔn)》1995年版波棱瓜子藥材項(xiàng)下記載,其味苦,性寒,能清腑熱、膽熱,具有清熱解毒、去火降熱、助消化的作用,用于治療肝熱、黃疸性傳染型肝炎等癥。波棱瓜子現(xiàn)已收錄進(jìn)《中國藥典》2010年版一部附錄。波棱甲素(波棱瓜酮,herpetrione,結(jié)構(gòu)見圖1,分子式為C30H32O10,相對分子質(zhì)量552.579)是本課題組從波棱瓜子的有效部位總木脂素中分離得到的單體化合物。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,波棱甲素的量高而且抗病毒活性強(qiáng),但波棱甲素在水中幾乎不溶,屬于難溶性藥物,而難溶性藥物口服生物利用度往往偏低,極大地限制了藥物的應(yīng)用。納米混懸劑是近年來針對難溶性藥物開發(fā)的一種新劑型,系采用少量表面活性劑穩(wěn)定純藥物粒子所形成的一種亞微米膠體分散體系。與傳統(tǒng)意義上的基質(zhì)骨架型納米體系不同,納米混懸劑無需載體材料,它是通過表面活性劑的穩(wěn)定作用,將納米尺度的藥物粒子分散在水中形成的穩(wěn)定體系。口服使用的納米混懸劑藥物粒徑小,對黏膜具有一定的黏附性,可使藥物在胃腸道內(nèi)的滯留時(shí)間延長,增加在胃腸道中的吸收,提高藥物的口服生物利用度。為了改善波棱甲素的難溶性,提高其生物利用度,本實(shí)驗(yàn)采用高壓均質(zhì)法制備了波棱甲素納米混懸劑,并對其膠囊的體外溶出行為進(jìn)行了考察,以期為其臨床應(yīng)用提供參考。1儀器、試劑與儀器GYB40—10S高壓均質(zhì)機(jī)(上海東華高壓均質(zhì)機(jī)廠);NanoZS90粒徑測定儀(英國Malvern公司);ZRS—6智能溶出儀(天津大學(xué)無線電廠);Agilent1100型高效液相色譜儀(AgilentTechnologies);MettlerAE163微量分析天平(瑞士Mettler公司)。波棱甲素原料藥(自制,含波棱甲素90%以上,批號101211);波棱甲素對照品(自制,質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過98%);十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚維酮K30(PVPK30)、羧甲基淀粉鈉(CMS-Na)均購于北京鳳禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司;乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1波洛伊木蘇納米懸懸劑的制備和試驗(yàn)2.1.1波棱甲素納米混懸液的制備工藝采用高壓均質(zhì)法制備波棱甲素納米混懸劑。分別稱取波棱甲素原料藥2g(1%)、SDS0.4g(0.2%)、PVPK300.6g(0.3%),加入200mL蒸餾水,充分?jǐn)嚢杌靹?4000r/min探頭超聲后,在壓力為100MPa條件下高壓乳勻10圈,得波棱甲素納米混懸液。2.1.2測定粒徑和電位取波棱甲素納米混懸液適量,加適量蒸餾水稀釋后,采用粒徑測定儀測定粒徑和電位。粒徑及電位測定結(jié)果顯示,波棱甲素納米混懸劑的平均粒徑為(279.4±1.8)nm,多分散度指數(shù)為0.192±0.013,Zeta電位為(-38.44±2.05)mV。2.2波洛伊木馬混合懸劑膠囊的制備和物理混合物膠囊的物理結(jié)合2.2.1納米混懸劑膠囊的制備波棱甲素納米混懸液真空干燥后,加入適量CMS-Na、微晶纖維素,過80目篩,70%乙醇制粒,60℃下干燥,加入硬脂酸鎂適量,混勻后分裝膠囊,制成每粒含100mg波棱甲素的納米混懸劑膠囊。2.2.2物理混合物膠囊的制備按波棱甲素納米混懸劑的制備項(xiàng)下處方比例稱取原料藥及輔料,加入200mL蒸餾水,充分?jǐn)嚢杌靹蚝?未經(jīng)探頭超聲和高壓乳勻工藝,混懸液直接真空干燥,加入適量CMS-Na、微晶纖維素,過80目篩,70%乙醇制粒,60℃下干燥,加入硬脂酸鎂適量,混勻后分裝膠囊,制成每粒含100mg波棱甲素的物理混合物膠囊。2.3hplc波極測量方法的建立2.3.1流動相0.1%磷酸色譜柱為AlltimaC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(25∶75),體積流量1.0mL/min,檢測波長240nm,柱溫30℃。2.3.2對照品儲備液的制備精密稱取波棱甲素對照品36.0mg,置100mL量瓶中,用適量甲醇溶解,并用pH7.5的磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度,得360μg/mL的波棱甲素對照品儲備液。2.3.3供試品溶液的制備取波棱甲素納米混懸劑膠囊6粒,按照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版附錄XC第二法),以pH7.5的磷酸鹽緩沖液900mL為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為100r/min,依法操作,45min時(shí),取樣2mL,立即濾過,取續(xù)濾液即得供試品溶液。2.3.4試樣測定結(jié)果按處方比例配制輔料,按其工藝制成空白制劑,再按供試品溶液的制備方法制備并測定,結(jié)果空白溶液在與波棱甲素對照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰,故認(rèn)為輔料對波棱甲素的測定無干擾,其色譜圖見圖2。2.3.5線性關(guān)系考察精密移取質(zhì)量濃度為360μg/mL的波棱甲素對照品儲備液適量,用pH7.5的磷酸鹽緩沖液稀釋成3.0、15.0、30.0、60.0、90.0、120.0μg/mL的系列波棱甲素對照品溶液,各取20μL注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),波棱甲素的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:Y=27.36X+6.6816,r=0.9998,結(jié)果表明波棱甲素在3.00~120.0μg/mL線性關(guān)系良好。2.3.6方法的精密度精密吸取質(zhì)量濃度為60.0μg/mL的波棱甲素對照品溶液20μL注入液相色譜儀,測定峰面積,于同日內(nèi)重復(fù)測定5次,計(jì)算日內(nèi)精密度;連續(xù)測定5d,計(jì)算日間精密度,結(jié)果日內(nèi)RSD為0.41%,日間RSD為0.63%。2.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液,分別于0、2、4、6、8h取樣20μL注入液相色譜儀,測定峰面積,結(jié)果RSD為0.74%,表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.4溶解度的測量2.4.1累積溶出率測定根據(jù)人體胃腸道環(huán)境的特點(diǎn),選用4種不同的溶出介質(zhì):pH1.0的鹽酸溶液、pH4.5的磷酸鹽緩沖液、pH6.8的磷酸鹽緩沖液和pH7.5的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行試驗(yàn),按溶出度的測定項(xiàng)下方法操作,經(jīng)不同時(shí)間取樣(并同時(shí)補(bǔ)液)測定溶出量,計(jì)算累積溶出率。結(jié)果顯示以pH7.5的磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)時(shí),溶出最好(圖3),故確定以pH7.5的磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。2.4.3力學(xué)性能測定取波棱甲素納米混懸劑膠囊及波棱甲素物理混合物膠囊,按溶出度測定項(xiàng)下方法進(jìn)行測定,并對數(shù)據(jù)進(jìn)行One-wayANOVA。結(jié)果見圖4,可見波棱甲素納米混懸劑膠囊的溶出速率及溶出量明顯優(yōu)于波棱甲素物理混合物膠囊(P<0.01)。3體外溶出度測定溶出度是指藥物在規(guī)定溶劑中于一定條件下,從片劑或膠囊劑等固體制劑中溶出的速度和程度,是一種控制藥物制劑質(zhì)量的體外檢測方法。溶出度試驗(yàn)可部分反映固體制劑中主藥的某些理化性質(zhì)、處方組成、輔料品種及性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等方面的差異。目前,體外溶出試驗(yàn)已作為化學(xué)藥固體制劑的質(zhì)控手段之一,傳統(tǒng)的中藥制劑多以煎劑為主,不存在溶出度問題,而經(jīng)過工藝技術(shù)制成的現(xiàn)代中藥多以片劑、膠囊劑、丸劑等固體制劑為主,其有效成分的溶出是體內(nèi)吸收的必要前提,也必將影響其藥效的發(fā)揮。為了改善波棱甲素的難溶性,本實(shí)驗(yàn)采用高壓均質(zhì)法制備了波棱甲素納米混懸劑,并建立了其膠囊的體外溶出度測定方法,對其體外溶出性能進(jìn)行了考察。以往難溶性藥物的溶出度試驗(yàn)中,溶出介質(zhì)經(jīng)常會選用部分有機(jī)溶劑或含有增溶劑的水溶液,而人體內(nèi)并不含有有機(jī)溶劑或增溶劑,此方法不能很好預(yù)測其體內(nèi)的生物利用度,體內(nèi)外相關(guān)性較差。在本實(shí)驗(yàn)中,根據(jù)人體胃腸道環(huán)境的特點(diǎn),選用了pH1.0的鹽酸溶液(模擬胃液)、pH4.5的磷酸鹽緩沖液(模擬十二指腸液)、pH6.8的磷酸鹽緩沖液(模擬小腸液)和pH7.5的磷酸鹽緩沖液(模擬結(jié)腸液)4種溶出介質(zhì),并對這4種溶出介質(zhì)進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示以pH7.5的磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)時(shí),溶出最好,因此最終確定以pH7.5的磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。從樣品測定結(jié)果得知,波棱甲素的物理混合物最大累積溶出率只有39.85%,無法達(dá)到溶出度要求,而制備成納米混懸劑后,波棱甲素的累積溶出率20min時(shí)就能達(dá)到84.31%,可見波棱甲素納米混懸劑膠囊的體外累積溶出率明顯優(yōu)于波棱甲素物理混合物膠囊(P<0.01)。分析原因可能如下:(1)納米混懸劑使藥物的粒徑減小,表面積增大,藥物的滲透性強(qiáng),從而使藥物的飽和溶解度和溶出率都得到了提高。(2)納米混懸劑可改變藥物的晶型,增加藥物中無定型態(tài)晶型的比例或完全轉(zhuǎn)換成無定型態(tài),提高藥物的溶解度。(3)當(dāng)藥物粒子小于1μm時(shí),其內(nèi)在溶出速率會發(fā)生突然增大的現(xiàn)象。因此,將難溶性藥物波棱甲素制成納米混懸劑后,其體外溶出速度和程度可得到明顯改善。本實(shí)驗(yàn)對波棱甲素納米混懸劑的研究結(jié)果表明,納米混懸劑可以顯著改善難溶性藥物的體外溶出速度和程度,適合作為難溶性藥物波棱甲素的給藥系統(tǒng)。2.3.8加標(biāo)回收率試驗(yàn)精密稱取處方量80%、100%、120%的波棱甲素原料藥各3份,按處方比例加入其他輔料,配成低、中、高(64、80、96μg/mL)3種質(zhì)量濃度的溶液,按溶出度測定項(xiàng)下方法測定,計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率分別為99.18%、99.32%、98.59%,RSD分別為0.96%、0.82%、1.03%。2.4.2供試品溶液的制備取波棱甲素納米混懸劑膠囊6粒,按《中國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定法第二法,以pH7.5的磷酸鹽緩沖溶液(0.05mol/L磷酸二