血型鑒定的操作流程

ABO血型鑒定正定型原理：用已知特異性抗體（原則血清）檢查紅細胞上的未知抗原。試管法的操作過程取2支干凈小試管，編號分別為抗A和抗B 分別加入抗A和抗B原則血清各1滴取1支干凈試管，用標簽紙注明病人姓名，科室、床號.配成5%的紅細胞懸液。將配好的紅細胞懸液分別加入抗A和抗B的兩個試管中各1滴?；靹?，將試管以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15秒。將試管從離心機中取出，再以推拉旋轉(zhuǎn)的對的手法輕輕搖動試管，使細胞懸浮觀察有無凝集現(xiàn)象。登記成果、簽名。ABO血型鑒定正定型原理：用已知血型的原則紅細胞，檢查血清中的未知抗體。試管法的操作過程：取3支干凈的小試管，分別標明A細胞，B細胞、O細胞；分別加入受檢者的血清各2滴；分別在3個試管中加入反定細胞A、B、O（既5%的A、B、O型原則紅細胞鹽水懸液）各1滴；混勻，將試管以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15秒；將試管從離心機中取出，在光照下觀查與否有溶血、脂血等，再以推拉旋轉(zhuǎn)的對的手法輕輕搖動試管，使細胞懸浮觀察有無凝集現(xiàn)象并統(tǒng)計。ABO血型正反定型成果判斷正向定型（原則血型+初檢查紅細胞）抗A抗B反向定型（原則紅細胞+被檢查血清）A型紅細胞B型紅細胞O型紅細胞成果斷讀+——+—A型—++——B型++———AB型——++—O型Rh（D）血型鑒定試管法（鹽水法）操作過程：取干凈小試管3支，分別標明陰、陽對照管和實驗管；在3支試管中各加入RhD定型血清1滴；在實驗管中加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液1滴，在陰、陽對照管中各加入Rh陰性和陽性5%紅細胞鹽水懸液1滴；混勻，以3400轉(zhuǎn)/分秒離心15秒；觀查成果:實驗管凝集，即表達受檢紅細胞上有對應(yīng)抗原；實驗管不凝集，即表達受檢紅細胞上沒有對應(yīng)抗原。不規(guī)則抗體篩檢實驗?zāi)郯贩ú僮鬟^程：取3支干凈的小試管，分別標上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；分別在3支試管中加入兩滴受檢者血清2滴；分別在3支試管中加入3~5%的篩選Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細胞試劑各1滴，混勻以3400轉(zhuǎn)/分鐘，離心15S，看與否凝集；分別在3支試管中心0.65ml的Baso低離子溶液，放置室溫1分鐘；再分別在3支試管中心加入凝聚胺溶液兩滴搖勻，以3400轉(zhuǎn)/分鐘，離心15秒，倒去上清液，不要瀝干，讓管底留0.1ml液體；輕輕搖動試管，且測紅細胞有無凝集，（必須凝集，不凝集要重新做實驗）；分別在3支試管中加入2滴“懸浮液”輕輕轉(zhuǎn)動試管混合并同時觀察成果，30S肉眼看與否凝聚。1分內(nèi)、涂片，顯微鏡下看與否凝集。如果30S內(nèi)肉眼看凝集散開，1分內(nèi)、涂片，顯微鏡下無凝集，抗體篩檢為陰性；如果凝集不散開，顯微鏡1分內(nèi)可看到凝集，抗體篩檢為陽性。產(chǎn)前篩查實驗操作過程：先將妻子和丈夫的血液標本，配成5%的紅細胞懸液，做ABO血型鑒定正定型，RhD血型鑒定；把血標本放入37°水浴箱中，水浴至血清能夠離出，做ABO血液鑒定反定型；當(dāng)妻子血型為O型，丈夫血型為A或B或AB型時做效價；如果丈夫為A型或B型時，用丈夫的紅細胞作為抗原；如果丈夫為AB型時，用買的A型和B型紅細胞做為抗原。效價的操作過程：用已配的丈夫的紅細胞懸液，洗3次細胞，制成2%濃度的紅細胞懸液。取1支干凈小試管加入妻子的血清2滴，在加入2滴2-Me試劑，快速用棉球堵住試管口，放37°C水浴箱中水浴2個小時。取10支干凈小試管分別編號1~10，各放入2滴生理鹽水。在1號試管中加入水浴2h的被2-Me破壞的血清2滴。從1號試管到10號試管，逐加2滴倍比稀釋（均勻的用吸管在試管內(nèi)吸放3~4下）最后兩滴棄去。10支試管各加2滴2%的丈夫紅細胞懸液，混勻，放入37°C水浴箱30分鐘、離心試管，細胞扣朝向自己，以推拉旋轉(zhuǎn)的對的手法，輕搖試管，看哪幾管凝集。從沒有凝集的那管開始到10號管洗3遍，要把上清液甩干。各加1滴“抗人球試劑”離心，看第幾管凝集，以“士”凝集的那1管為效價成果。第一管1:4第二管1:8第三管1:16第四管1:32第五管1:64第六管1:128第七管1：256第八管1:512第九管1:1024第十管1:2048新生兒溶血新生兒溶血?。ê喎QHDN）是指母嬰血型不合，胎兒和新生兒的紅細胞被母親的IgG血型抗體包被，并在嬰兒的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)受到破壞的免疫性溶血性疾病。一、發(fā)病機制本病的病原是母嬰血型不合，胎兒的血型基因二分之一來自母親，另二分之一來自父親，來自父親的基因敲好是母親所缺少的，胎兒在紅細胞就有可能刺激母親產(chǎn)生抗體，這種抗體的性質(zhì)為免疫性抗體，并且能夠通過胎盤，一旦這種抗體通過胎盤進入血液循環(huán)，就可能與胎兒紅細胞向結(jié)合并破壞紅細胞而發(fā)生溶血現(xiàn)象，嚴重者可能引發(fā)胎兒貧血。水腫。流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)及HDN。二、新生兒溶血病血型血清學(xué)檢查（一）標本的留取采集新生兒血液4~5ml，分為大概相等的兩份，一份不抗凝，另一份用 ACD保存液或EDTA抗凝。必要時采集母親的血液4~5ml，其中分出0.5ml加抗凝劑。必要時采集父親的血液0.5ml加抗凝劑保有備用。（二）母嬰標本的ABO血型檢測取母嬰的洗滌紅細胞按常規(guī)辦法測定ABO血型，如母親是O型，新生兒是A型或B型，則可能是母嬰ABO血型不合引發(fā)的新生兒溶血病。（三）新生兒溶血病檢查的三項實驗1、直接抗球蛋白實驗用以擬定嬰兒紅細胞與否被IgG抗體包被。ABO新生兒溶血病時直接抗球蛋白實驗反映經(jīng)常較弱或陽性需要用顯微鏡觀察成果。在ABO新生兒溶血病檢查中，直接抗球蛋白實驗的成果只起參考作用。改良直接人球蛋白實驗辦法（1）將患兒紅lell用鹽水洗滌3~4次，配成2%紅lell鹽水懸液。（2）取小試管2只，各加患兒紅lell懸液1滴，然后1管加入 IgG（或廣譜）最適稀釋度抗球蛋白血清1滴，另1管加鹽水1滴混合后即以1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘或以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15s.（3）輕輕轉(zhuǎn)動試管，將混懸液倒在玻璃片上，在顯微鏡下觀察成果，凡在3~4個細胞的凝集，均勻分布在游離紅lell之間為陽性，無凝者為陰性。2、游離 IgG抗體測定用間接抗球蛋白實驗或其它辦法檢測嬰兒血清中與否有游離的IgG血型抗體；辦法：（1）取小試管3只，每管加患兒血清2滴。(2)分別加入洗滌過三次配備好的5%，A、B、O型紅細胞，鹽水懸液1滴，37°C致敏60分鐘，取出觀查若已發(fā)生凝集，證明存在對應(yīng)的抗體，則不必繼續(xù)往下做。（3）若不凝集，用鹽水洗3次后加入抗IgG（或廣譜）最適稀釋度抗體球蛋白血清1滴，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘或3400轉(zhuǎn)/15秒，肉眼觀察（或在顯微鏡下觀察）成果。3放散實驗ABO血型不合的新生兒溶血病時用熱放散法好，RH系統(tǒng)及其系統(tǒng)的用乙醇放散法為好，放散夜用抗人球蛋白法或其它檢測IgG抗體的辦法檢測。患兒紅細胞抗體釋放實驗（熱放散法）?；純杭t細胞用鹽水洗滌3次，取壓積紅細胞1ml左右，加等量或半量鹽水，置試管中；將試管放在56°C水浴箱中不停振搖10分鐘，取出后置于預(yù)先準備盛有56°