液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定米粉中氯蟲苯甲酰胺殘留量

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定米粉中氯蟲苯甲酰胺殘留量

氯甲基苯甲醛胺（c18h14brcl2n5kg）是杜邦公司開發(fā)的一種新型農(nóng)藥，其名稱為康寬。其作用于魚尼丁受體(RyRs),通過破壞昆蟲細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Ca2+環(huán)境穩(wěn)定來殺蟲,對(duì)鱗翅目害蟲高效,對(duì)哺乳動(dòng)物低毒,耐雨水沖刷,滲透性強(qiáng)。200g/L氯蟲苯甲酰胺懸浮劑登記在水稻上,主要用于防治稻縱卷葉螟、二化螟、三化螟、大螟等鱗翅目害蟲,對(duì)稻癭蚊、稻象甲、稻水象甲也有較好的防治效果。目前國(guó)內(nèi)尚無該農(nóng)藥殘留分析報(bào)道,最近國(guó)外PierluigiCaboni報(bào)道了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜正負(fù)離子切換掃描分析茄子、番茄、辣椒、蘋果、梨和葡萄中氯蟲苯甲酰胺和氟蟲雙酰胺,內(nèi)標(biāo)法定量。本研究采用乙腈高速勻漿提取,分散固相萃取凈化,無明顯基質(zhì)效應(yīng),使用溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)行定量分析,避免空白基質(zhì)的篩選和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制,本研究通過優(yōu)化質(zhì)譜條件,實(shí)現(xiàn)了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜正離子掃描快速分析氯蟲苯甲酰胺在稻米中殘留,易于操作,國(guó)內(nèi)外未見相應(yīng)報(bào)道。1實(shí)驗(yàn)部分1.1實(shí)驗(yàn)用氯蟲苯甲酰胺pahs液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜:TSQQuantumDiscovery+Survey液相(美國(guó)ThermoFisherScientific公司);LunaC18色譜柱(150mm×2.0mm,3μm,美國(guó)Phenomenex公司);IKAT18basic均質(zhì)器(美國(guó)VWR公司);SorvallPrimoR高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)ThermoFisherScientific公司)。乙腈和甲醇(色譜純,美國(guó)Merck公司);甲酸(色譜純,美國(guó)Tedia公司);實(shí)驗(yàn)用水為去離子水;有機(jī)濾膜,0.22μm;氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.5%,德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH公司);標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品0.01000g,用甲醇溶解定容于100mL容量瓶(100mg/L),0~4℃保存,實(shí)驗(yàn)中按需稀釋。1.2無水硫酸鎂的提取稱取10g(精確到0.01g)粉碎的樣品于50mL離心管中,加入15mL水,浸泡15min,用移液管準(zhǔn)確加入10mL乙腈,在勻漿器上高速勻漿提取2min,加入1.5g氯化鈉和6g無水硫酸鎂,渦旋振蕩,在4000r/min離心5min。取上清液1mL到盛有150mg無水硫酸鎂,50mgPSA和50mgC18的2mL離心管中,4000r/min離心5min。取0.5mL上清液,加入0.5mL水,混勻,過0.22μm有機(jī)濾膜,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。1.3液體積比33色譜柱:LunaC18(2)(150mm×2.0mm,3μm);柱溫:25℃;進(jìn)樣量:5μL;流動(dòng)相:甲醇-0.1%甲酸水溶液(體積比7∶3);流速:0.25mL/min。質(zhì)譜條件:掃描方式為電噴霧正離子掃描;檢測(cè)方式選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè);噴霧電壓4200V;毛細(xì)管溫度350℃;霧化氣0.7L/h;氣簾氣0.2L/h;碰撞氣氬氣1.5×10-3torr。定量離子對(duì)與定性離子對(duì)分別為484/453和484/286,碰撞能量分別為17、23V。在此條件下,氯蟲苯甲酰胺保留時(shí)間均為4.9min,色譜圖見圖1。2結(jié)果與討論2.1反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式的選擇采用“T”三通方式,對(duì)氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化時(shí)化合物質(zhì)量濃度為5mg/L。負(fù)離子掃描時(shí),以甲醇-水(體積比50∶50)為流動(dòng)相,氯蟲苯甲酰胺含有2個(gè)氯原子和1個(gè)溴原子,在全掃描模式下,其同位素峰[M+2-H]-為基峰,反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式下,優(yōu)化碰撞條件后,以m/z204、147為定性離子,定量離子m/z204的峰強(qiáng)約為8×104。正離子掃描時(shí),分別以甲醇-0.1%甲酸水溶液(體積比50∶50)和甲醇-含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液(體積比50∶50)為流動(dòng)相,對(duì)于氯蟲苯甲酰胺,正離子掃描,在以上2種流動(dòng)相條件下,[M+2+H]+均是基峰,且強(qiáng)度相當(dāng),選擇的定量離子m/z453的峰強(qiáng)約為3×106,定性離子m/z286的峰強(qiáng)約為2×106。由于氯蟲苯甲酰胺在正離子模式下的反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)靈敏度大大優(yōu)于負(fù)離子模式。以甲醇-0.1%甲酸水溶液(體積比70∶30)為流動(dòng)相,正離子掃描反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)氯蟲苯甲酰胺。碎片斷裂方式推斷為:2.2lehotay和quehens近年來,農(nóng)藥殘留分析逐漸向快速、高效方法發(fā)展,特別是2005年以來,QuEChERS方法在全球逐漸得到廣泛應(yīng)用,它由美國(guó)農(nóng)業(yè)部ARS化學(xué)家StevenJ.Lehotay和德國(guó)斯圖加特CVUA實(shí)驗(yàn)室MichelangeloAnastassiades2003年共同開發(fā)。QuEChERS是“快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、有效、耐用和安全(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged和Safe)”的首字母縮寫。該方法采用乙腈渦旋提取,無水硫酸鎂去水,氯化鈉鹽析,PSA等作分散萃取填料進(jìn)行凈化。該方法主要應(yīng)用于蔬菜、水果等樣品,近年來也開始在飼料等基質(zhì)應(yīng)用,本研究為使殘留在稻米中農(nóng)藥得到充分提取,采用勻漿提取代替渦旋提取。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用流動(dòng)相稀釋一系列標(biāo)樣,氯蟲苯甲酰胺的質(zhì)量濃度分別為0.2、1、5、25、50、100、200μg/L。同時(shí),以凈化的精米和糙米提取液與水體積比1∶1混合后溶液為溶劑,分別稀釋配制質(zhì)量濃度分別為0.2、1、5、25、50、100、200μg/L的氯蟲苯甲酰胺溶液,混勻,過0.22μm有機(jī)濾膜,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo),分別對(duì)上述標(biāo)準(zhǔn)溶液、基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行線形回歸,結(jié)果見表1。由表1計(jì)算可得:精米和糙米基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比值分別為0.978和0.937,可見所測(cè)精米和糙米基質(zhì)對(duì)氯蟲苯甲酰胺的電離抑制很小,因此,經(jīng)過分散固相萃取凈化后可直接根據(jù)溶劑標(biāo)樣計(jì)算樣品中農(nóng)藥含量,減少了空白基質(zhì)的篩選和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。2.4加標(biāo)回收率和方法的確定我國(guó)還未規(guī)定大米中氯蟲苯甲酰胺殘留限量。歐盟規(guī)定大米中氯蟲苯甲酰胺的殘留限量為0.01mg/kg,美國(guó)規(guī)定大米中氯蟲苯甲酰胺的殘留限量為0.10mg/kg,日本規(guī)定稻米(糙米)中氯蟲苯甲酰胺的殘留限量為0.05mg/kg。在未檢出的精米和糙米樣品中分別添加不同含量水平的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液,渦旋混合2min,靜置30min。添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.01、0.05、0.1、0.2mg/kg,每個(gè)水平做6次平行實(shí)驗(yàn),按照1.2所述步驟處理后進(jìn)樣,計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見表2。平均回收率范圍為89.3%~93.6%,RSD范圍為3.6%~7.5%,與文獻(xiàn)中報(bào)道的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定蔬菜中農(nóng)藥的方法回收率范圍82%~107%相當(dāng)。2.5檢測(cè)限和定量限在實(shí)驗(yàn)色譜-質(zhì)譜條件下,分析添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01mg/kg、進(jìn)樣質(zhì)量濃度為5μg/L樣品中氯蟲苯甲酰胺的分子離子峰圖譜,對(duì)所選擇的定性定量離子對(duì),以響應(yīng)最小的離子對(duì)噪音信號(hào)的3倍和10倍計(jì)算方法的檢測(cè)限和定量限。氯蟲苯甲酰胺的方法檢出限(LOD)為0.0003mg/kg,定量限(LOQ)為