ELISA法檢測血清抗結(jié)核抗體

免疫標(biāo)記技術(shù)定義：

將抗原-抗體反應(yīng)與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，用放射性同位素、酶或熒光素標(biāo)記的已知抗體或抗原，通過檢測標(biāo)記物，間接測定未知的抗原或抗體。分類：放射免疫測定法：131I，32P免疫熒光技術(shù)：FITC，PE免疫酶測定法：HRP，AP用標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)借以提高免疫學(xué)診斷的敏感性熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA）免疫標(biāo)記技術(shù)液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）酶免疫測定法

(EnzymeImmunoAssay,EIA)用酶標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。

辣根過氧化物酶(HRP)，堿性磷酸酶(AP)特點：高度特異性：保持抗原抗體反應(yīng)的特異性高靈敏度：酶催化底物顯色的高效性，可定性定量檢測：反應(yīng)液顏色深淺或光密度值分類：酶聯(lián)免疫吸附試驗：可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：組織中或細(xì)胞表面的抗原。酶聯(lián)免疫吸附試驗

(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶標(biāo)記抗原或抗體檢測液體（血液、細(xì)胞液）中未知抗體或抗原的方法。1.定義2.分類直接法（directELISA）：間接法（IndirectELISA）：將已知抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記二抗檢測液相中未知抗體雙抗體夾心法（SandwichELISA)：競爭法（CompetitiveELISA)：

將特異性抗原與固相載體相連,加入合適的抗體（待測標(biāo)本）,使之與抗原結(jié)合,漂洗時不被沖走。結(jié)合的抗體用酶標(biāo)抗人IgG進(jìn)行檢測。ELISA間接法--主要用于檢測抗體間接ELISA原理（以間接ELISA為例）：顯色1、已知抗原吸2、加待檢物3、加酶標(biāo)抗Ig4、加酶作用的底物1、已知抗體吸2、加待檢物3、加酶標(biāo)的抗Ig4、加酶作用的底物洗滌洗滌洗滌洗滌間接法測抗體-YEYYYEYEYYYEYYEYYEYYEYYEYEY+實驗步驟：顯色封閉包被Ag洗滌加待測血清Ab洗滌加酶標(biāo)抗抗體洗滌終止酶標(biāo)儀測OD值(在492nm波長下)固相聚苯乙烯Ag或Ab吸附到固相上的過程,稱為包被

常用酶及其底物常用底物：鄰苯二胺(OPD)：反應(yīng)顯橙黃色，應(yīng)避光，致癌性。四甲基聯(lián)苯胺(TMB)：反應(yīng)后呈藍(lán)色，無需避光，無致癌性,但水溶性差。常用底物：對硝基苯磷酸酯(p-NPP)：產(chǎn)物為黃色。AP靈敏性高于HRP，但不易獲得純品，且穩(wěn)定性低于HRP、價高，故應(yīng)用不如HRP普及。1.辣根過氧化物酶(HRP)2.堿性磷酸酶(AP)HRP的底物系統(tǒng)

DH2+H2O2→→→D+2H2O

HRP鄰苯二胺(OPD),反應(yīng)中作為供氫體H2O2為受氫體，HRP對受氫