色譜分析-果汁中糖精鈉含量測定

項(xiàng)目2.3果汁中糖精鈉含量測定模塊2：色譜分析任務(wù)引入市質(zhì)量局術(shù)監(jiān)督局，為保證食品安全，對部分超市出售的果汁進(jìn)行抽查，欲檢測其中糖精鈉含量是否超標(biāo)，設(shè)計(jì)一可行的分析方案。分析檢測人員按照檢測標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范化操作要求，完成糖精鈉含量測定并提交檢測報(bào)告?！锔咝б合嗌V儀的基本構(gòu)造及使用方法；★樣品預(yù)處理技術(shù)；★定性定量方法任務(wù)分析完成果汁中糖精鈉含量的測定，需要具備的基本知識和基本技能任務(wù)資訊

制定檢測方案

決策計(jì)劃

實(shí)施樣品檢測任務(wù)實(shí)施

任務(wù)檢查評價(jià)

檢查評價(jià)獲取相關(guān)知識糖精鈉含量測定

高效液相色譜儀的主要構(gòu)造有哪些？任務(wù)資訊液相色譜定義以氣體為流動(dòng)相氣相色譜法(GC)氣固色譜法(GSC)氣液色譜法(GLC)以固體為固定相以液體為固定相？以液體為流動(dòng)相液相色譜法(LC)液固色譜法(LSC)液液色譜法(LLC)以固體為固定相以液體為固定相？液相色譜法分析流程高壓輸液泵將貯液器中的流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速（或壓力）輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入，流動(dòng)相將樣品依次帶入預(yù)柱、色譜柱，在色譜柱中各組分被分離，并依次隨流動(dòng)相流至檢測器，檢測到的信號送至工作站記錄、處理和保存。任務(wù)資訊高壓輸液系統(tǒng)貯液器材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料聚醚醚酮（PEEK）容積：0.5～2.0L放置位置：高于泵體，保持一定的輸液靜壓差注意：密封、過濾任務(wù)資訊高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液泵要求：泵體材料能耐化學(xué)腐蝕；能在高壓（30～60MPa）下連續(xù)工作；輸出流量穩(wěn)定（±1%），無脈沖，重復(fù)性高（±0.5%），而且輸出流量范圍寬；適用于梯度洗脫。類型：一般可分為恒壓泵和恒流泵兩大類任務(wù)資訊高壓輸液系統(tǒng)流動(dòng)相過濾與脫氣裝置流動(dòng)相過濾裝置分為在線過濾和真空過濾流動(dòng)相脫氣裝置分為在線真空脫氣和超聲波脫氣任務(wù)資訊六通閥進(jìn)樣器：用于固定體積進(jìn)樣進(jìn)樣系統(tǒng)六通閥進(jìn)樣示意圖任務(wù)資訊任務(wù)資訊進(jìn)樣系統(tǒng)液相色譜進(jìn)樣針：類似于氣相色譜進(jìn)樣針，只是其針頭為平頭，以免扎破六通閥管路。用于可變體積進(jìn)樣自動(dòng)進(jìn)樣器任務(wù)資訊分離系統(tǒng)色譜柱分離系統(tǒng)的主要部件是色譜柱，柱效高、選擇性好、分析速度快是對色譜柱的一般要求。安裝和更換色譜柱時(shí)一定要使流動(dòng)相能按箭頭所指方向流動(dòng)。一般在色譜柱前要求安裝保護(hù)柱，起到保護(hù)延長分析柱壽命的作用。有些物質(zhì)的分離條件要求有一定的溫度，因此，給色譜柱配一個(gè)柱溫箱是非常有必要的。任務(wù)資訊檢測系統(tǒng)解：分類通用型：示差折光檢測器（RID）、電導(dǎo)檢測器（ECD）和蒸發(fā)光檢測器（ELSD）,它們檢測物質(zhì)總體物理性質(zhì)的變化情況專用型：紫外檢測器（UV-Vis）、熒光檢測器（FD)，它們檢測某一物理或化學(xué)性質(zhì)的變化任務(wù)資訊紫外-可見光檢測器任務(wù)資訊熒光檢測器任務(wù)資訊示差折光檢測器任務(wù)資訊電導(dǎo)檢測器任務(wù)資訊數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（工作站）打開工作站，選擇工作通道編輯方法文件，設(shè)置方法名稱、運(yùn)行時(shí)間及定量方法輸入路徑名、樣品名、操作者等樣品分離完成后，記錄譜圖文件名和色譜峰峰高、峰面積和保留值等任務(wù)資訊高效液相色譜儀如何操作？如何維護(hù)？任務(wù)資訊操作過程演示1配制流動(dòng)相把二次蒸餾水和色譜純級甲醇以15：85的比例混合取混合均勻的溶液，經(jīng)0.45μm的有機(jī)膜過濾，再脫氣15分鐘即可任務(wù)資訊操作過程演示2更換色譜柱把流動(dòng)相貯液器放置在略高于高壓泵的位置，插入帶有不銹鋼濾芯的輸液管開啟高壓泵電源開關(guān)，打開排放閥設(shè)置流動(dòng)相比例和流速等參數(shù)任務(wù)資訊撳下高壓泵啟動(dòng)鍵“ON/OFF”，再按“Purge”鍵，儀器開始清洗高壓泵和排除管路中的氣泡。觀察廢液出口，若沒有氣泡，按“Purge”鍵，停止排放，關(guān)閉排放閥。打開檢測器電源開關(guān)，設(shè)置檢測波長操作過程演示3任務(wù)資訊待儀器運(yùn)行平衡后，用液相進(jìn)樣針進(jìn)樣，一般為定量管的3~5倍的體積。工作站對所注射樣品進(jìn)行分析測試，并繪制分離色譜圖。色譜工作站對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，并將結(jié)果在屏幕上顯示出來操作過程演示4任務(wù)資訊儀器維護(hù)儀器的性能影響到分析的結(jié)果，因此，我們要及時(shí)維護(hù)儀器。貯液器流動(dòng)相在使用前都應(yīng)用0.45μm的濾膜過濾，以保持貯液器的清潔；要定期清洗貯液器，以防滋長微生物。高壓輸液泵所用流動(dòng)相或溶劑均過濾和脫氣；開泵時(shí)應(yīng)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中進(jìn)樣器進(jìn)樣前應(yīng)使樣品混合均勻，無可溶解的污染物，以免堵塞六通閥；液相進(jìn)樣針應(yīng)為平頭針；每次工作結(jié)束后應(yīng)沖洗整個(gè)系統(tǒng)；以防止緩沖鹽和其它殘留物留在進(jìn)樣系統(tǒng)中。任務(wù)資訊色譜柱①在進(jìn)樣閥后加流路過濾器（0.5μm燒結(jié)不銹鋼片），擋住來源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒。②在流路過濾器和分析柱之間加上“保護(hù)柱”，收集阻塞柱進(jìn)口的來自樣品的降低柱效能的化學(xué)“垃圾”。③色譜柱應(yīng)在要求的pH值范圍和柱溫范圍下使用，應(yīng)使用不損壞柱的流動(dòng)相。④進(jìn)樣前應(yīng)將樣品進(jìn)行必要的凈化，以免進(jìn)樣后對色譜柱造成損傷。⑤每次工作結(jié)束后，如果流動(dòng)相是水和有機(jī)溶劑系列，則用流動(dòng)相沖洗30分鐘左右；如果流動(dòng)相中含有鹽溶液，則先用水-甲醇（90∶10）然后再用純甲醇沖洗20分鐘并保存。儀器維護(hù)任務(wù)資訊分析中的污染一般檢測的環(huán)境、容器、試劑都是影響測定結(jié)果的因素。容器實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等，在進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)按照待測樣品的要求來選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測結(jié)果的基本保證。試劑在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純，如果用含量有雜質(zhì)的試劑，則會(huì)出現(xiàn)雜峰而影響測定結(jié)果。環(huán)境污染儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測結(jié)果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離，保持清潔，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，注意防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應(yīng)小于70%為宜任務(wù)資訊如何對樣品進(jìn)行預(yù)處理？任務(wù)資訊樣品的預(yù)處理技術(shù)樣品預(yù)處理的目的是消除基質(zhì)干擾，保護(hù)儀器，提高方法的準(zhǔn)確度、精密度、選擇性和靈敏度。預(yù)處理的過程一般包括：提取經(jīng)典的方法有均質(zhì)提取法、振蕩提取法、索氏提取法等。凈化比較傳統(tǒng)的凈化手段有液液萃取和固相萃取等，目前比較先進(jìn)、實(shí)用的處理技術(shù)凝膠滲透色譜、基質(zhì)固相分散技術(shù)、分子印記技術(shù)等也得到了比較廣泛的應(yīng)用。濃縮常見減壓蒸餾和氣流吹蒸兩種方式任務(wù)資訊樣品的預(yù)處理技術(shù)(續(xù)）衍生化所謂衍生化，就是將用通常檢測方法不能直接檢測或檢測靈敏度比較低的物質(zhì)與某種試劑（即衍生化試劑）反應(yīng)，使之生成易于檢測的化合物。按衍生化的方法可以分為柱前衍生化和柱后衍生化。按生成衍生物的類型又可分為紫外-可見光衍生化、熒光衍生化、拉曼衍生化和電化學(xué)衍化。衍生化技術(shù)不僅使高效液相色譜分析體系復(fù)雜化，而且需要消耗時(shí)間，增加分析成本，有的衍生化反應(yīng)還需要控制嚴(yán)格的反應(yīng)條件。因此，只有在找不到方便而靈敏的檢測方法，或?yàn)榱颂岣叻蛛x和檢測的選擇性時(shí)才考慮用衍生化技術(shù)。

任務(wù)資訊如何進(jìn)行定性定量分析？任務(wù)資訊定性方法問題：如何對樣品進(jìn)行定性分析？利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性聯(lián)系氣相色譜法的定性利用檢測器的選擇性定性當(dāng)某一被測化合物同時(shí)被兩種或兩種以上檢測器檢測時(shí)，兩檢測器或幾個(gè)檢測器對被測化合物檢測靈敏度比值是與被測化合物的性質(zhì)密切相關(guān)的。

利用紫外檢測器全波長掃描功能定性全波長掃描紫外檢測器檢測化合物的紫外光譜圖。再通過對照標(biāo)準(zhǔn)譜圖的方法來識別化合物。任務(wù)資訊定量方法問題：如何對樣品進(jìn)行定量分析？面積歸一化法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法任務(wù)資訊歸一化法定量練習(xí)用高效液相色譜法測定吲哚二羧酸中主成分的含量，已知在分析條件下所有組分都出峰，且分離完全，根據(jù)測定數(shù)據(jù)計(jì)算吲哚羧酸中主成分（出峰時(shí)間在5.7min左右）的含量。序號12345保留時(shí)間/min3.543.964.825.727.15峰面積/mV?min762011694460553251064372解：任務(wù)資訊外標(biāo)法定量外標(biāo)法的特點(diǎn)：操作、計(jì)算簡單，是一種常用的定量方法。它無需各組分都被檢出、洗脫。但需要標(biāo)樣，標(biāo)樣及未知樣品的測定條件要一致，進(jìn)樣體積要準(zhǔn)確。任務(wù)資訊外標(biāo)法實(shí)例用液相色譜法測定葉酸片（5mg/片）中葉酸含量。稱取對照品5mg，加30ml0.5%氨水溶解，用水定容至50mL，20uL進(jìn)樣得葉酸峰面積為92800；另取已研成粉末的葉酸片劑91.5mg，同法測定得葉酸峰面積為91750，求葉酸片劑的百分含量。（已知平均片重為92.2mg）解：查閱資料◆GB/T5009.28-2003食品中糖精鈉的測定◆GB2760-2011食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)◆GB/T603化學(xué)試劑◆GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法決策計(jì)劃果汁中糖精鈉含量的測定步驟決策計(jì)劃1.流動(dòng)相的預(yù)處理2.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.樣品處理4.色譜柱的安裝和流動(dòng)相的更換色譜參考條件①柱：YWG-C184.6mm×250mm10μm不銹鋼柱。②流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液(0.02mol·L-1)(5+95).③流速：1mL/min。④檢測器：紫外檢測器，230nm波長，0.2AUFS。5測定取處理液和標(biāo)準(zhǔn)使用液各10μL(或相同體積)注入高效液相色譜儀進(jìn)行分離，以其標(biāo)準(zhǔn)溶液峰的保留時(shí)間為依據(jù)進(jìn)行定性，以其峰面積求出樣液中被測物質(zhì)的含量，供計(jì)算。6、測定記錄與結(jié)果質(zhì)檢員準(zhǔn)備檢測用儀器任務(wù)實(shí)施高效液相色譜儀（紫外檢測器）；C18不銹鋼填充柱（柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm）；色譜工作站；抽濾裝置（0.45μm濾膜）分類名稱規(guī)格數(shù)量名稱規(guī)格數(shù)量小組共用分析天平1臺(tái)微量注射器10μL1支容量瓶3只移液管10mL1支質(zhì)檢員準(zhǔn)備檢測用試劑任務(wù)實(shí)施名稱甲醇乙酸銨氨水糖精鈉果汁規(guī)格GRARARGR樣品數(shù)據(jù)處理計(jì)算公式任務(wù)實(shí)施測定標(biāo)準(zhǔn)樣的保留時(shí)間（進(jìn)樣標(biāo)記至色譜峰頂尖的時(shí)間），以此為依據(jù)進(jìn)行定性分析。根據(jù)樣品中糖精鈉色譜峰的峰面積，計(jì)算各飲料種中糖精鈉的含量?！鰞x器規(guī)范使用方面■數(shù)據(jù)記錄、計(jì)算方面■結(jié)果準(zhǔn)確度、精密度方面■誤差原因分析檢查與評價(jià)

液相色譜是如何完成混合物的分離？

混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相之間會(huì)發(fā)生吸附、溶解或其他親和作用，這種作用存在差異，從而使各組分在色譜柱中的遷移速度不同得到分離石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

固定相將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面而形成的有機(jī)鍵合層如C18（十八烷基硅烷）、C8（辛烷基）、氨基鍵合硅膠固定相類型極性固定相：正相色譜(固定相極性>

流動(dòng)相極性)以極性有機(jī)基團(tuán)如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等鍵合在硅膠表面制成的非極性固定相：反相色譜(固定相極性<流動(dòng)相極性)反相色譜法最常用的固定相是C18、C8和苯基鍵合相的填料，在分離極性很大的化合物時(shí)，也可以采用氨基、氰基等極性基團(tuán)鍵合固定相。液液分配色譜任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

使用條件為控制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動(dòng)相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5（2~8）。太高的pH值會(huì)使硅膠溶解，太低的pH值會(huì)使鍵合的烷基脫落。鍵合相色譜—固定相特點(diǎn)使用過程中不流失均一性和化學(xué)穩(wěn)定性好重現(xiàn)性好分離效率高適于梯度洗脫傳質(zhì)阻抗小任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

反相色譜常見流動(dòng)相流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度順序：水<甲醇<乙腈<乙醇<四氫呋喃<丙醇<二氯甲烷（與水不混溶）若采用含一定比例的甲醇或乙腈的水溶液作流動(dòng)相，可用于分離極性化合物若采用水和無機(jī)鹽的緩沖液為流動(dòng)相，則可分離一些易離解的樣品，如有機(jī)酸、有機(jī)堿、酚類等常見固定相反相色譜法最常用的固定相是C18、C8和苯基鍵合相的填料，在分離極性很大的化合物時(shí)，也可以采用氨基、氰基等極性基團(tuán)鍵合固定相。任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

疏溶劑理論：當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入極性流動(dòng)相后,即占據(jù)流動(dòng)相中相應(yīng)的空間，而排擠一部分溶劑分子；當(dāng)溶質(zhì)分子被流動(dòng)相推動(dòng)和固定相接觸時(shí)，溶質(zhì)分子的非極性部分或非極性分子）會(huì)將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開，直接和非極性固定相上的烷基官能團(tuán)相結(jié)合（吸附）形成締合物，構(gòu)成單分子吸附層；當(dāng)流動(dòng)相極性減小時(shí)，這種疏溶劑斥力下降，會(huì)發(fā)生解締，并把溶質(zhì)分子釋放而被洗脫下來反相色譜法的分離機(jī)理1任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

影響溶質(zhì)保留的三個(gè)主要因素：溶質(zhì)分子中非極性部分的總表面積溶質(zhì)和固定相接觸的總表面積愈大，保留值愈大，所以溶質(zhì)的極性愈弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。鍵合相上的烷基總面積烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性的作用表面。隨著碳鏈的加長，烷基的疏水特性增強(qiáng)，溶質(zhì)的保留值也隨烷基碳鏈長度的增加而增大。流動(dòng)相的表面張力流動(dòng)相的表面張力愈大，介電常數(shù)愈大，極性亦愈強(qiáng)；溶質(zhì)和烷基鍵合相的締合作用愈強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度弱，導(dǎo)致溶質(zhì)的保留值大。反相鍵合相色譜法的分離機(jī)理2任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

時(shí)間，min固定相：C1固定相：C8固定相：C181-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯例：反相鍵合色譜中，鍵合相碳鏈越長，分離效果越好。分離機(jī)理實(shí)例任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

正相色譜法反相色譜法1.極性固定相

聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相2.相對非極性流動(dòng)相

正已烷、環(huán)已烷

3.極性調(diào)節(jié)劑

乙醇、四氫呋喃、三氯甲烷4.分離中等極性和極性較強(qiáng)化合物.

酚類、胺類、羰基類及氨基酸類

5.組分流出順序

極性小先洗出1.非極性固定相

C18（簡稱ODS）、C82.極性流動(dòng)相

水或緩沖液3.極性調(diào)節(jié)劑

甲醇、乙腈、四氫呋喃4.分離非極性和極性較弱化合物

占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右5.組分流出順序

極性大先洗出液液分配色譜任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

其他類型色譜法按分離機(jī)制分類：液固吸附色譜法離子色譜法凝膠色譜法（分子排阻色譜法）

（空間排阻色譜法）其他類型色譜法任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

液固吸附色譜法固定相：吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5-10μm流動(dòng)相：有機(jī)溶劑適用于分離分子量200-1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物的分離，常用于分離同分異構(gòu)體。液固吸附色譜各組分的出峰順序極性較小組分，吸附力較弱，容易解吸，先流出。極性較大組分滯留作用大，后流出。飽和烴<烯<芳烴<醚<醛酮<酸任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

吸附脫附再吸附再脫附…分離過程是一個(gè)吸附－脫附的平衡過程。液固吸附色譜分離機(jī)理任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

氯化噻吩嗪四種異構(gòu)體的分離色譜圖氯化噻吩嗪四種異構(gòu)體的分離異構(gòu)體具有不同的空間排列方式，因此吸附劑對它們的吸附能力有所不同，從而得到了分離。液固吸附色譜實(shí)例任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

固定相:離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基陽離子交換樹脂在表面未端芳環(huán)上接上季胺基陰離子交換樹脂流動(dòng)相：電解質(zhì)溶液、有機(jī)弱酸或有機(jī)弱酸鹽溶液離子交換色譜法ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

油田水質(zhì)中的陰離子分析固定相：薄殼型陰離子交換樹脂(3×250mm)流動(dòng)相：0.003mol·L-1NaHCO3/0.0024mol·L-1

Na2CO3離子色譜法實(shí)例任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

分離原理樹脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進(jìn)行可逆交換而分離。應(yīng)用離子交換色譜法主要用于分析陰，陽離子，凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來進(jìn)行分離。分析物質(zhì)有機(jī)酸、氨基酸、多肽及核酸。

離子交換色譜法任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

以凝膠(gel)為固定相。它類似于分子篩，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多。小分子量的化合物可以進(jìn)入孔中，滯留時(shí)間長；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動(dòng)相流出。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。凝膠色譜分離示意圖

凝膠色譜：（分子排阻色譜法）分離機(jī)理凝膠色譜分離機(jī)理任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

凝膠色譜（分子排阻色譜法）油田用驅(qū)油劑聚丙烯酰胺損失量的測定色譜柱：150mm×46mm固定相：二醇基鍵合相，孔徑200A，粒徑5um流動(dòng)相:甲醇/0.05mol/LNaH2PO4凝膠色譜法實(shí)例1-聚丙烯酰胺2-原油+石油磺酸鹽+氯化鈉任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

建立一個(gè)HPLC方法了解樣品的基本情況主要包括樣品所含化合物的數(shù)目、種類（官能團(tuán)）、分子量、pKa值、UV光譜圖以及樣品基體的性質(zhì)（溶劑、填充物等）、化合物在有關(guān)樣品中的濃度范圍、樣品的溶解度等。明確分離目的明確分離是為了定性還是定量；是單組分還是多組分分析；定量的精密度要求有多高；本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件是什么等等。任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

了解樣品的性質(zhì)和需要的預(yù)處理高效液相色譜分離前均需進(jìn)行某種形式的預(yù)處理。檢測器的選擇不同的分離目的對檢測的要求不同，應(yīng)盡量使用紫外檢測器（UV），因?yàn)槟壳耙话愕腍PLC都配有這類檢測器，它方便且受外界影響小。如被測化合物沒有足夠的UV生色團(tuán)，則應(yīng)考慮使用其他檢測手段。建立一個(gè)HPLC方法（續(xù)）任務(wù)引領(lǐng)下的知識拓展與深化

在高效液相色譜法作為分離方法中，有80%的物質(zhì)的分離依靠反相色譜來完成。在反相色譜中，水是常用的流動(dòng)相弱組分，C18是常用的填充載體，重要的是選擇流動(dòng)相的強(qiáng)組分，常用的強(qiáng)組分有甲醇、乙腈與四氫呋喃。分離模式的選擇建立一