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大腸桿菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)原理轉(zhuǎn)化(Transgormation)是將外源DNA分子引入受體細(xì)胞,使受體細(xì)胞獲得新的遺傳性狀的過(guò)程。感受態(tài)細(xì)胞在0℃,CaClz的低滲溶液中,菌細(xì)胞膨脹成球形,而轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNase(DNA酶)的羥基-鈣磷酸復(fù)合物,并黏附于細(xì)胞表面,經(jīng)42℃短時(shí)間熱沖擊處理,可促使細(xì)胞迅速收縮,吸收DNA復(fù)合物,完成轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)流程1、在無(wú)菌工作臺(tái)內(nèi),向各管含質(zhì)粒的感受態(tài)中,加入500微升新鮮的LB培養(yǎng)液(無(wú)抗性);
2、放置于搖床中,在37℃的條件下,培養(yǎng)一個(gè)小時(shí);
3、在等待培養(yǎng)的時(shí)候,我們可以對(duì)涂布器進(jìn)行滅菌處理;
4、一小時(shí)后,培養(yǎng)完成,取出感受態(tài),對(duì)其進(jìn)行一個(gè)短暫的離心;(從搖床中取出感受態(tài))(對(duì)感受態(tài)進(jìn)行離心)
5、將前面準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿進(jìn)行標(biāo)記,用移液器吸取100μl菌液,相應(yīng)抗性(kana30-50μg/ml,amp50-100μg/ml)的固體培養(yǎng)基上,用涂布器旋轉(zhuǎn)涂抹均勻,在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行風(fēng)干;
(給培養(yǎng)皿做好標(biāo)記)
(吸取100μl菌液)
(借助涂布器涂抹均勻)
6、用酒精棉對(duì)涂抹器進(jìn)行擦拭,再次進(jìn)行高溫滅菌;
7、密封培養(yǎng)皿后,將培養(yǎng)皿倒置,在37℃的恒溫孵育箱中,進(jìn)行培養(yǎng)12-16小時(shí);8、次日,對(duì)菌落的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察。
注意事項(xiàng)1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)穿著專用工作服和使用一次性手套;2、用酒精棉對(duì)涂布器進(jìn)行擦拭時(shí),要注意,涂布器上的酒精熄滅后要稍等
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