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文檔簡介

大腸桿菌轉化實驗報告實驗原理轉化（Transgormation）是將外源DNA分子引入受體細胞，使受體細胞獲得新的遺傳性狀的過程。感受態(tài)細胞在0℃，CaClz的低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，而轉化混合物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羥基-鈣磷酸復合物，并黏附于細胞表面，經(jīng)42℃短時間熱沖擊處理，可促使細胞迅速收縮，吸收DNA復合物，完成轉化。實驗流程1、在無菌工作臺內，向各管含質粒的感受態(tài)中，加入500微升新鮮的LB培養(yǎng)液（無抗性）；

2、放置于搖床中，在37℃的條件下，培養(yǎng)一個小時；

3、在等待培養(yǎng)的時候，我們可以對涂布器進行滅菌處理；

4、一小時后，培養(yǎng)完成，取出感受態(tài)，對其進行一個短暫的離心；（從搖床中取出感受態(tài)）（對感受態(tài)進行離心）

5、將前面準備好的培養(yǎng)皿進行標記，用移液器吸取100μl菌液，相應抗性（kana30-50μg/ml，amp50-100μg/ml）的固體培養(yǎng)基上，用涂布器旋轉涂抹均勻，在超凈工作臺中進行風干；

（給培養(yǎng)皿做好標記）

（吸取100μl菌液）

（借助涂布器涂抹均勻）

6、用酒精棉對涂抹器進行擦拭，再次進行高溫滅菌；

7、密封培養(yǎng)皿后，將培養(yǎng)皿倒置，在37℃的恒溫孵育箱中，進行培養(yǎng)12-16小時；8、次日，對菌落的生長情況進行觀察。

注意事項1、實驗過程中應穿著專用工作服和使用一次性手套；2、用酒精棉對涂布器進行擦拭時，要注意，涂布器上的酒精熄滅后要稍等

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