德都紅花-7味散降酶保肝作用及其急性毒性研究

德都紅花-7味散降酶保肝作用及其急性毒性研究

德都紅花-7味散具有清熱解毒、清肝熱、調(diào)節(jié)身體素、黃藥等功效。臨床研究表明在改善慢性肝炎癥見、體征、降酶保肝、HBV標(biāo)記物轉(zhuǎn)換等方面有顯著療效。本研究通過降低和減少CCl4導(dǎo)致的小鼠肝損害引起的ALT、AST、LDH升高和肝組織形態(tài)學(xué)改變,探討德都紅花-7味散的降酶保肝作用。并通過近似LD50試驗(yàn),觀察德都紅花-7味散急性毒性反應(yīng)。為臨床應(yīng)用提供安全性、有效性依據(jù)。1以肝為體、肝為肝的肝毒性研究1.1材料①實(shí)驗(yàn)動物:昆明種小鼠,體重19～22g,均用雄性。購于中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,小鼠合格證號SCXK(遼)2003-0009。②實(shí)驗(yàn)藥品及儀器:德都紅花-7味散,內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供,批號:哲衛(wèi)準(zhǔn)字9802-25。護(hù)肝片,黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字:Z20003336。四氯化碳(CCl4),沈陽市東興試劑廠生產(chǎn),批號:20030728。橄欖油,中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司生產(chǎn),批號:F20020819。ALT試劑盒:OLYMPUS國藥管械(進(jìn))2002第3400185號,批號:2003-06-21。AST試劑盒:OLYMPUS國藥管械(進(jìn))2002第3400185號,批號:2003-04-29。LDH試劑盒:OLYMPUS國藥管械(進(jìn))2002第3400185號,批號:2003-05-01。顯微鏡成像系統(tǒng)(ECLIPSEE200型),南京濟(jì)南光電股份有限公司。全自動生化分析儀(PRONTO-E),意大利產(chǎn)。臺式調(diào)速冷凍離心機(jī)(TGL-18R),珠海黑馬醫(yī)療器械有限公司。精密電子天平(BS210S型),北京賽多利斯天平有限公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法①德都紅花-7味散對CCl4引起的小鼠急性肝損害的保肝降酶實(shí)驗(yàn):取小鼠60只,隨機(jī)等分為6組,即正常對照組、護(hù)肝片組、德都紅花-7味散高、中、低劑量組、模型組。正常對照組和模型組給予0.9%生理鹽水20mL/kg灌胃;護(hù)肝片組給予0.9%生理鹽水護(hù)肝片混懸液(0.9g/kg)灌胃;德都紅花-7味散高、中、低組分別給予12.5%、37.5%、187.5%的生理鹽水德都紅花-7味散混懸液(0.25g/kg、0.75g/kg、3.75g/kg)灌胃,均為每日1次,連續(xù)1周。于末次灌胃給藥后2h,除正常對照組外,每鼠ip0.1%CCl4橄欖油懸液0.2mL/只,禁食水16h,于次日晨斷頭取血,分離血清,用生化分析儀檢測ALT、AST、LDH含量。上述小鼠采血后,取肝大葉相同部位組織,用10%福爾馬林固定,切片,HE染色,光鏡觀察組織變化。②德都紅花-7味散急性毒性試驗(yàn):采用近似LD50試驗(yàn)方法,測出德都紅花-7味散LD50或最大耐受劑量(MTD)。取小鼠30只,分為2組,即正常對照組10只、試驗(yàn)組20只。試驗(yàn)組每只小鼠給藥劑量按60g/kg體重(臨床成人日服用量3g/人),分6次灌胃,每次0.6mL(每次每只200mg)。給藥前禁食12h,不禁水,末次給藥后禁食1h。正常對照組同上方法灌胃生理鹽水。給藥結(jié)束置于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng),密切觀察24h,記錄小鼠出現(xiàn)死亡或中毒反應(yīng)的數(shù)量及發(fā)生時間、持續(xù)時間、恢復(fù)時間。24h后如小鼠無死亡,對正常對照組5只小鼠、試驗(yàn)組10只小鼠采取斷頭采血,分離血清,用生化分析儀檢測ALT、AST含量。小鼠采血后,取肝大葉相同部位組織,切片,HE染色,光鏡對照觀察組織變化。其余小鼠連續(xù)觀察7天,記錄反應(yīng)情況,采血,檢測血清ALT、AST含量。采血后,取肝大葉相同部位組織,切片,HE染色,光鏡對照觀察肝組織學(xué)變化。1.3統(tǒng)計學(xué)處理各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS10.0統(tǒng)計軟件做統(tǒng)計學(xué)處理,結(jié)果以Xˉˉˉ±sXˉ±s表示,各組間進(jìn)行方差分析。2結(jié)果2.1德都紅豆-7味散對alt、ast、ldh的降酶作用由表1結(jié)果可見,護(hù)肝片和德都紅花-7味散不同劑量均有不同程度的降酶作用,尤其以德都紅花-7味散中、低劑降酶作用更明顯,與對照組比較無顯著差異,P>0.05。德都紅花-7味散中劑量對ALT、AST、LDH的降低作用優(yōu)于護(hù)肝片,P<0.05。德都紅花-7味散低劑量對ALT、LDH的降低作用優(yōu)于護(hù)肝片,P<0.05。德都紅花-7味散高劑量的降酶作用與護(hù)肝片比較無明顯差異,P>0.05。認(rèn)為德都紅花-7味散對CCl4引起的小鼠急性肝損害血清酶升高有明顯的降酶作用。2.2德都麻黃-7味散對肝組織損傷的組織形態(tài)表現(xiàn)由表2及肝組織學(xué)可見,模型組普遍存在肝組織碎片狀壞死灶,并伴有大量淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤,壞死區(qū)周圍可見肝細(xì)胞脂肪變性和嗜酸性變;護(hù)肝片組可見散在點(diǎn)狀及小碎片狀壞死,以被膜下及小葉中央?yún)^(qū)為著,伴有淋巴細(xì)胞和少量再生肝細(xì)胞,輕度肝細(xì)胞脂肪變性和嗜酸性變。德都紅花-7味散高劑組可見散在點(diǎn)狀及小碎片狀壞死,內(nèi)有炎細(xì)胞浸潤,以肝細(xì)胞脂肪變性和水腫為主,少數(shù)肝細(xì)胞呈再生狀態(tài),總體肝組織損傷狀況較護(hù)肝片組輕。德都紅花-7味散中、低劑組肝組織損傷狀況較相似,只見散在少數(shù)點(diǎn)狀壞死,內(nèi)有少量淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤,主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性和水腫。表明德都紅花-7味散對CCl4所致肝組織病理損傷具有一定的保護(hù)作用。2.3德都麻黃-7味散的急性毒性檢測血清酶和肝組織變化情況觀察24h小鼠無死亡,無明顯中毒反應(yīng),活動、皮毛、行為等未見異常。隨機(jī)取正常組5只,試驗(yàn)組10只,采血檢測ALT、AST含量和觀察肝組織變化情況。其余小鼠繼續(xù)觀察7天,小鼠無死亡,無明顯中毒反應(yīng),活動、皮毛、行為等未見異常,測得德都紅花-7味散最大耐受量(MTD)>60g/kg。采血檢測ALT、AST含量和觀察肝組織變化情況。見表3。24h后肝組織光鏡觀察:正常對照組有兩只小鼠肝細(xì)胞輕度水腫;德都紅花-7味散組可見雙核或多核肝細(xì)胞,其余無明顯改變。7天后肝組織光鏡觀察:正常對照組肝組織無明顯改變;德都紅花-7味散組與24h肝組織改變基本相同。3德都發(fā)育散對ccl4所致急性肝損傷的降酶作用慢性肝炎可歸屬到蒙醫(yī)“寶日病(包如病)”范疇。從疾病發(fā)展來看,慢性肝炎遷延期和活動期,多歸屬于蒙醫(yī)“肝包如——寒熱兼雜證”期表現(xiàn),其病機(jī)為“體內(nèi)三根、七素等體素之間相對平衡關(guān)系遭破壞而產(chǎn)生惡血及黃水,流入肝臟,使肝血不能生成正精,巴達(dá)干、齊素(血)、希拉、赫依進(jìn)一步聚合,尤其以赫依及惡血熱勢強(qiáng)盛而互相交搏,阻礙了調(diào)火赫依運(yùn)行之道,使其傳入六腑脈道,因而齊素受赫依之追逐,流竄不定”。故表現(xiàn)為胃肝區(qū)疼痛,口苦泛酸,惡心厭食,大便不爽,胃脹不消,腹脹腸鳴,肢體疲乏癥狀。臨床以調(diào)理體素、祛肝包如熱邪為主要治則?！暗露技t花七味丸”具有解毒清肝熱、調(diào)理體素、祛黃之功效,聯(lián)合消食養(yǎng)肝之功效的蒙成藥,針對慢性肝炎蒙醫(yī)主要病機(jī),療效肯定。為進(jìn)一步觀察德都紅花-7味散的保肝降酶作用,筆者采用CCl4所致小鼠急性肝損傷模型,探討蒙藥德都紅花-7味散對血清ALT、AST、LDH含量肝組織形態(tài)學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,德都紅花-7味散中、低劑有明顯的降酶作用,與對照組比較無顯著差異,P>0.05。德都紅花-7味散中劑量對ALT、AST、LDH的降低作用優(yōu)于護(hù)肝片,P<0.05。德都紅花-7味散高劑量的降酶作用與護(hù)肝片比較無明顯差異,P>0.05。認(rèn)為德都紅花-7味散對CCl4所致急性肝損害血清酶升高有明顯的降酶作用。德都紅花-7味散中、低劑量對肝組織損傷壞死、變性有明顯的改善作用,總體肝組織損傷狀況好于護(hù)肝片。表明德都紅花-7味散對CCl4所致肝組織病理損傷具有一定的保護(hù)作用。急性毒性試驗(yàn)表