風(fēng)害損傷對(duì)檀香藥材質(zhì)量的影響

風(fēng)害損傷對(duì)檀香藥材質(zhì)量的影響

中藥檀香樹是檀香樹科的植物，屬于印度、印度尼西亞和其他國(guó)家。自然生長(zhǎng)的檀香需10a以上開始形成心材(即結(jié)香),30～40a才可供藥用;我國(guó)自1962年首次引種,迄今為止,各引種區(qū)均未形成商品藥材。有文獻(xiàn)報(bào)道,檀香受機(jī)械損傷或激素刺激可提早結(jié)香,但未深入研究。筆者在廣東省湛江南藥場(chǎng)進(jìn)行了檀香結(jié)香試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)風(fēng)害損傷亦可促進(jìn)檀香結(jié)香,故對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量和藥效學(xué)研究,現(xiàn)報(bào)道如下。1實(shí)驗(yàn)材料1.1樣品與藥效學(xué)印尼樣品(對(duì)照藥材),為廣東省藥材公司提供的檀香心材,樹齡不詳。風(fēng)害A樣品,為湛江南藥場(chǎng)被臺(tái)風(fēng)斷梢2a后形成的檀香樹干心材,樹齡為10年生。風(fēng)害B樣品,為湛江南藥場(chǎng)被臺(tái)風(fēng)斷梢2.5a后形成的檀香樹干心材,樹齡為10年生。25年生樣品,為湛江南藥場(chǎng)自然生長(zhǎng)25a的檀香樹干心材。以上湛江南藥場(chǎng)檀香樣品均為從印尼引種的檀香樹苗所繁殖,經(jīng)廣東省中藥研究所邱金裕主任中藥師鑒定,原植物均為檀香SantalumalbumL.。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)在檀香水提液中按比例加入揮發(fā)油。檀香油對(duì)照品,購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)789-9001。1.2揮發(fā)油提取器島津GCMS-QP-5000型氣質(zhì)聯(lián)用儀,揮發(fā)油提取器(浙江蕭山),定量毛細(xì)管(DrummondUSA),Bl-301智能型生物信號(hào)。1.3試劑及儀器阿托品(杭州第一制藥廠分裝,批號(hào)960385),乙酰膽堿(上海試劑三廠,批號(hào)952804),硅膠G(青島海洋化工廠),醋酸乙酯、乙醇、無(wú)水乙醇、甲苯、丙酮、甲酸、鹽酸、三氯化鐵、鐵氰化鉀、無(wú)水硫酸鈉等試劑均為分析純。1.4動(dòng)物NIH小鼠,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):98A029;家兔,由廣州市白云區(qū)新市石馬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)提供。2實(shí)驗(yàn)方法2.1有效領(lǐng)域研究2.1.1油含量測(cè)定按《中國(guó)藥典》揮發(fā)油提取甲法進(jìn)行,分出揮發(fā)油后加無(wú)水硫酸鈉脫水,密閉保存。2.1.2msie70evGCDB-1石英毛細(xì)管色譜柱(30mm×0.25mm);進(jìn)樣口溫度250℃,接口溫度230℃;載氣為氦氣,流速1.3ml·min-1;柱壓80kPa,分流比30∶1,進(jìn)樣量1.0μl;升溫程序柱溫60℃,5℃·min-1程升至160℃,再1℃·min-1程升至170℃,再8℃·min-1程升至230℃。MSEI源(70eV),雙燈絲;掃描范圍,質(zhì)荷比40～400,掃描間歇1.0s。2.1.3層析樣品溶液的制備提取揮發(fā)油后的水液濃縮至1/3后以醋酸乙酯萃取,萃取液濃縮后作酯提部位;水層濃縮至干,以無(wú)水乙醇回流提取,作為醇提部位。2.1.4氯化鐵乙醇溶液的制備酯提部位以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲酸(40∶30∶2∶5)上行展開,取出,干后噴以2%三氯化鐵乙醇溶液(加少量鹽酸),于105℃烘10min顯色。醇提部位以甲苯-醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(30∶40∶20∶5∶3)上行展開,取出,干后噴以三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑顯色。2.2關(guān)于藥物效率的研究2.2.1小鼠炭末推進(jìn)試驗(yàn)選用18～22gNIH小鼠80只,雌雄各半,隨機(jī)分為8組,灌胃給藥,每天1次,連續(xù)4d,對(duì)照組灌服等量蒸餾水,藥后3d,小鼠禁食不禁水24h,然后按炭末推進(jìn)試驗(yàn)法實(shí)驗(yàn),給小鼠灌服含5%炭末的藥液20ml·kg-1,對(duì)照組灌服等量的5%生理鹽水炭末溶液,藥后15min按炭末推進(jìn)試驗(yàn)法測(cè)量小鼠小腸炭末推進(jìn)率,試驗(yàn)結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.2.2小段的活性成分測(cè)定選用2.0～2.5kg家兔,雌雄兼用,按離體豚鼠回腸實(shí)驗(yàn)法取出回腸一段,置于盛有冰凍臺(tái)氏液的培養(yǎng)皿中,并剪成2cm左右的小段備用。實(shí)驗(yàn)時(shí),將一段小腸置于恒溫的麥?zhǔn)显〔壑?用生物信號(hào)采集與處理系統(tǒng)記錄腸段平滑肌的肌力與蠕動(dòng)頻率,待肌力與蠕動(dòng)頻率恒定后立即開始給藥,對(duì)照組給等量的臺(tái)氏液;另取腸段以乙酰膽堿致腸平滑肌處于痙攣狀態(tài)再給藥物,觀察藥物對(duì)正常及痙攣狀態(tài)離體兔腸平滑肌的影響,以給藥前后差值為指標(biāo),實(shí)驗(yàn)結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。3結(jié)果與分析3.1心材揮發(fā)油含量各樣品揮發(fā)油含量見(jiàn)表1。表1顯示,受風(fēng)害損傷的10年生檀香心材揮發(fā)油含量約為25年生檀香的1/2,損傷2a后半年內(nèi)揮發(fā)油含量可增加30%左右。而同環(huán)境下未受風(fēng)害損傷的同齡檀香未見(jiàn)心材形成,未能提出揮發(fā)油。3.2香蕉皮提取物香香料酯類各樣品揮發(fā)油中的主要化學(xué)成分見(jiàn)表2。結(jié)果顯示,各樣品與對(duì)照品主要成分均為α-檀香醇、β-檀香醇等檀香醇類成分,其總含量均高于65%。目前,進(jìn)口檀香商品藥材有印度產(chǎn)及印尼產(chǎn)2種,前者檀香醇含量高于80%,而后者則低于75%。本試驗(yàn)所用檀香油對(duì)照品檀香醇含量為83.10%,且不含荷葉醇,推測(cè)為印度進(jìn)口檀香商品藥材提得的揮發(fā)油。湛江南藥場(chǎng)引種的檀香源于印尼,故各樣品檀香醇含量均低于75%,與印尼商品藥材相似;且均含較高量的荷葉醇。3.3色度圖的色度分析由圖1可見(jiàn),受風(fēng)害損傷檀香的酯提及醇提部位的薄層行為均與自然生長(zhǎng)25a植株及對(duì)照藥材相似。3.4香精及印0對(duì)小鼠小鼠炭末推進(jìn)率的影響結(jié)果提示,高、低劑量的風(fēng)害損傷檀香、25年生檀香及印尼檀香對(duì)小鼠小腸炭末的推進(jìn)率均有顯著抑制作用,與對(duì)照組比較P<0.05～0.01,各劑量組的抑制作用無(wú)顯著差異,P>0.05,見(jiàn)表3。3.5離體兔腸平滑的振動(dòng)頻率和收縮力結(jié)果顯示,風(fēng)害損傷檀香水提液可顯著抑制正常離體兔腸平滑肌的收縮力,與對(duì)照組比較P<0.05;而對(duì)正常離體兔腸平滑肌的蠕動(dòng)頻率及痙攣狀態(tài)下的離體兔腸平滑肌的蠕動(dòng)頻率和收縮力均無(wú)顯著影響,P>0.05。25年生檀香和印尼檀香水提液均可顯著抑制痙攣狀態(tài)下的離體兔腸平滑肌的收縮力,與模型組比較P<0.05;但對(duì)正常和痙攣狀態(tài)下的離體兔腸平滑肌的蠕動(dòng)頻率及正常離體兔腸平滑肌的收縮力均無(wú)顯著影響,與對(duì)照組比較P>0.05;見(jiàn)表4,表5。4風(fēng)害損傷對(duì)芳香結(jié)香的影響印尼進(jìn)口的檀香商品藥材揮發(fā)油含量達(dá)3.36%,高于藥典3%的限定值。由于湛江南藥場(chǎng)引種的樣品均未達(dá)到采收年限,揮發(fā)油含量均低于對(duì)照藥材。對(duì)南藥場(chǎng)10年生檀香取樣結(jié)果顯示,自然生長(zhǎng)者均未見(jiàn)有心材形成,其木部也未能提出揮發(fā)油,而經(jīng)風(fēng)害損傷的同齡檀香均有心材生成,損傷2.5a后,所形成的心材揮發(fā)油含量可達(dá)1.44%,油中有效成分檀香醇含量接近于對(duì)照藥材,油中成分組成與對(duì)照藥材相同,各提取部位薄層行為也與對(duì)照藥材相似,表明風(fēng)害損傷能刺激檀香結(jié)香。檀香心材多含揮發(fā)油等次生代謝產(chǎn)物,已有報(bào)道證實(shí)蟲害等外界刺激能顯著影響巴戟天等植物營(yíng)養(yǎng)器官顯微構(gòu)造及次生代謝產(chǎn)物的含量,產(chǎn)生一系列抗逆生理反應(yīng)。因此,風(fēng)害刺激檀香結(jié)香的現(xiàn)象,亦可能是植物受風(fēng)害損傷后抗逆生理的一種反應(yīng)。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí),風(fēng)害損傷形成的檀香心材、同產(chǎn)地25年生檀香心材及對(duì)照藥材對(duì)胃腸平滑肌均有抑制作用,可抑制小鼠小腸炭末推進(jìn)率及痙攣狀態(tài)下的離體兔腸平滑肌的收縮力(P<0.