乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠病理組織er和pr表達(dá)的影響

乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠病理組織er和pr表達(dá)的影響

乳房增生是老年人常見的疾病，也是乳房疾病的第一位。據(jù)報(bào)道,其國(guó)內(nèi)發(fā)病率為10%左右,其中2%~4%可發(fā)生癌變,嚴(yán)重威脅著婦女的身心健康。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,乳腺增生與神經(jīng)內(nèi)分泌特別是雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)及孕酮(P)的分泌失調(diào)密切相關(guān)。而中醫(yī)認(rèn)為該病為“乳癖”范圍,是沖任失調(diào)、肝氣郁滯血瘀所致,治療上主要以調(diào)理沖任、疏肝理氣、化瘀散結(jié)、活血止痛等法為主。為了探討其作用機(jī)制,本研究觀察了乳結(jié)平膠囊對(duì)雌激素(E)造成的乳腺增生大鼠性激素和乳腺組織的影響,為臨床治療乳腺增生提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。1材料表面1.1生物顯微鏡檢測(cè)XH-6010型γ放射免疫計(jì)數(shù)器(上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠);XSZ-D型倒置生物顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠);熒光顯微鏡(日本奧林巴斯公司);BIO-RAD-450型酶標(biāo)定量測(cè)試儀、FACSCalibur型流式細(xì)胞儀(美國(guó)BectonDickinson公司);低溫高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)。1.2試劑與實(shí)驗(yàn)材料苯甲酸雌二醇注射液、黃體酮注射液(天津金耀氨基酸有限公司,批號(hào)分別為H20020529、H200205534);三苯氧胺(沈陽(yáng)福寧制藥廠,批號(hào):00634);乳結(jié)平膠囊(廣東彼迪藥業(yè)有限公司,批號(hào):H44025162);多聚甲醛(天津津美化學(xué)試劑廠,批號(hào):20040219);放射免疫試劑盒(南京建成生物工程研究所);新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司,批號(hào):060704);胰蛋白酶(美國(guó)DIFICO公司分裝,批號(hào):060512);細(xì)胞裂解液(碧云天生物技術(shù)公司,批號(hào):060511);其它試劑均為分析純。1.3醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供SPF級(jí)SD大鼠,♀,體重150~180g,未孕,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào):SYXK(粵)2003-0002,粵監(jiān)證字2006A015)。于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng),室溫23~25℃,相對(duì)濕度40%~70%,每1h換新風(fēng)15次。2方法和結(jié)果2.1動(dòng)物im鹽水1.2.d-1大鼠50只,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,按體重隨機(jī)分為生理鹽水、模型、三苯氯胺(20mg·kg-1·d-1)及乳結(jié)平膠囊高、低劑量(3.3、1.65g·kg-1·d-1)組,每組10只。按照參考文獻(xiàn),生理鹽水組動(dòng)物im生理鹽水(1mL·kg-1·d-1);其它各組動(dòng)物im苯甲酸雌二醇注射液(0.5mL·kg-1·d-1),連續(xù)25d,后im黃體酮注射液(0.4mL·kg-1·d-1),連續(xù)5d。于第31天開始,生理鹽水組和模型組動(dòng)物開始ig蒸餾水,乳結(jié)平膠囊高、低劑量組分別ig相應(yīng)劑量的藥物,連續(xù)給藥30d。2.2乳結(jié)平膠囊對(duì)大鼠血清水腫的影響實(shí)驗(yàn)開始后,每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量大鼠左側(cè)腋窩下第3對(duì)乳頭的直徑和高度1次。在注射苯甲酸雌二醇后,大鼠乳頭出現(xiàn)紅腫或增大;以三苯氧胺為陽(yáng)性對(duì)照藥,經(jīng)乳結(jié)平膠囊處理1月后,乳結(jié)平膠囊高、低劑量組與模型組比較,乳頭紅腫或增生癥狀均顯著減輕(P<0.01)。乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠乳頭形態(tài)的影響見表1。2.3乳結(jié)平膠囊對(duì)精子指數(shù)的影響取出大鼠子宮稱重,計(jì)算子宮指數(shù)(子宮指數(shù)=子宮重量/體重)。與生理鹽水組比較,模型組子宮指數(shù)明顯升高(P<0.01);經(jīng)乳結(jié)平膠囊處理1月后,乳結(jié)平膠囊高、低劑量組子宮指數(shù)均顯著低于模型組(P<0.01)。乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠子宮指數(shù)的影響見表2。2.4對(duì)血清激素水平的影響經(jīng)乳結(jié)平膠囊處理1月后,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,分離血清,用放免法測(cè)定血清PRL、E2和P等性激素水平。結(jié)果表明,模型組性激素水平顯著高于生理鹽水組(P<0.01);乳結(jié)平膠囊高、低劑量組性激素水平顯著低于模型組(P<0.05,P<0.01)。乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠性激素的影響見表3。2.5產(chǎn)膠囊對(duì)乳房增生大鼠病理組織變化的影響2.5.1樣品采集和測(cè)試項(xiàng)目2.6乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺癌增殖大鼠er、pr的影響ER、PR陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為乳腺導(dǎo)管和小葉上皮細(xì)胞核著色時(shí)為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞率<20%者為(-);陽(yáng)性細(xì)胞率不足20%,但局部區(qū)域有少量較強(qiáng)著色的陽(yáng)性細(xì)胞者為(±);陽(yáng)性細(xì)胞率>20%者且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)由少至多、著色由淺至深為+、++、+++、++++;并分別計(jì)1、2、3、4、5、6分。對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞率取積分,計(jì)算各組ER、PR積分,分值愈高表明ER、PR含量愈高。乳結(jié)平膠囊對(duì)乳腺增生大鼠ER和PR的影響見表5。由表5可知,乳結(jié)平膠囊高、低劑量組能降低乳腺病理組織ER、PR積分,與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),提示乳結(jié)平膠囊能減少乳腺組織ER、PR的含量。其作用主要是通過(guò)減少ER和PR的數(shù)量,減少E對(duì)受體的感受性,抑制乳腺組織的增生。3乳結(jié)平膠囊對(duì)大鼠乳腺癌增生率的作用目前,對(duì)乳腺增生的發(fā)病機(jī)制尚不明確,多主張與內(nèi)分泌紊亂及精神因素有關(guān),并在臨床和實(shí)驗(yàn)研究中得到證實(shí)。黃體素分泌減少、E相對(duì)增多是本病的重要原因?，F(xiàn)代研究將肝郁氣滯脾虛血瘀的機(jī)制闡釋為情志異常,令高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)紊亂,機(jī)體調(diào)控功能失常,體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失恒。消極情緒,如抑郁、煩躁對(duì)乳腺疾病有較大的影響。大量資料證明,下丘腦、丘腦邊緣系統(tǒng)與情緒的發(fā)生和變化有密切關(guān)系,同時(shí)痛覺(jué)信息與這些部位也有十分密切的相關(guān)性,所以消極情緒會(huì)使下丘腦、垂體、卵巢分泌的E絕對(duì)或相對(duì)過(guò)剩,導(dǎo)致乳腺增生及乳腺其他疾病的發(fā)生,出現(xiàn)乳房脹痛、結(jié)節(jié)現(xiàn)象。本研究選用苯甲酸雌二醇作為工具藥,在一定時(shí)期內(nèi)維持實(shí)驗(yàn)大鼠血中E2的高濃度,造成血中E比例失調(diào),成功復(fù)制出大鼠乳腺增生模型。組織學(xué)觀察結(jié)果表明,模型組大鼠乳腺小葉和腺泡顯著增多,腺泡腔和導(dǎo)管顯著擴(kuò)張,呈現(xiàn)出典型的乳腺增生性改變;同時(shí),模型組大鼠血清中性激素水平呈紊亂壯態(tài),與正常組大鼠比較,表現(xiàn)為E與PRL水平升高,孕激素降低,E/孕激素比值高于正常。乳結(jié)平膠囊具有活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)等功效,臨床用于治療乳腺增生取得良好的療效。本研究表明,乳結(jié)平膠囊能不同程度地抑制乳腺增生,減少乳腺小葉和腺泡的數(shù)量,并能顯著降低模型組大鼠血清E與PRL水平,降低E/孕激素比值,具有抑制乳腺增生、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用,其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)性激素水平,間接作用于靶器官乳房,改善因乳腺增生復(fù)舊不全而致的病變過(guò)程,達(dá)到治療乳腺增生的最佳目的。實(shí)驗(yàn)中乳結(jié)平膠囊組ER、PR含量顯著低于模型組,因而可以推測(cè)乳結(jié)平膠囊是通過(guò)降低大鼠乳腺組織ER、PR含量使乳腺組織對(duì)E的敏感性下降,減弱E在靶細(xì)胞上的生物學(xué)效應(yīng),從而產(chǎn)生抑制和治療乳腺增生的作用,但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究取胸部第3對(duì)乳房乳腺,固定、包埋、切片、染色,光鏡下觀察乳腺組織病理形態(tài)學(xué)變化。2.5.2乳結(jié)平膠囊對(duì)大鼠乳腺癌組織病理變化的影響理鹽水組大鼠的乳腺未發(fā)現(xiàn)有乳腺增生癥狀:乳腺小葉體積小,分葉少,乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞排列規(guī)則,處于靜止期狀態(tài);模型組大鼠的乳腺可見乳腺小葉明顯增生,小葉腺泡數(shù)目明顯增多,導(dǎo)管上皮細(xì)胞層數(shù)增多,細(xì)胞排列紊亂,有典型的乳腺增生癥狀。模型組與生理鹽水組比較,導(dǎo)管上皮層數(shù)、腺泡數(shù)明顯增多,有顯著性差異(P<0.01)。與模型組比較