家禽用飼料品質(zhì)檢驗(yàn)-營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

項(xiàng)目三：家禽用飼料品質(zhì)檢驗(yàn)液相色譜的檢測(cè)器液相色譜的檢測(cè)器對(duì)色譜柱溶出的成分進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)得出的數(shù)據(jù)則被轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。應(yīng)選擇適合樣品的檢測(cè)器。紫外檢測(cè)器光源為D2燈。該類型檢測(cè)器主要用于檢測(cè)波長(zhǎng)小于等于400納米紫外區(qū)內(nèi)具有紫外吸收的成分。紫外?可見光用檢測(cè)器采用D2燈和鎢燈作為光源。該類型檢測(cè)器由于可以檢測(cè)可見光區(qū)域，所以對(duì)于檢測(cè)色素和著色劑等有色成分十分有效。二極管陣列檢測(cè)器（DAD）該類型檢測(cè)器可收集從紫外區(qū)到可見光區(qū)的光譜數(shù)據(jù)。熒光（FL）檢測(cè)器該類型檢測(cè)器可專門用于檢測(cè)熒光物質(zhì)，靈敏度高。示差折光（RI）檢測(cè)器用于檢測(cè)折光率變化。對(duì)于紫外區(qū)無吸收的成分，使用該類型檢測(cè)器，但靈敏度較低。電導(dǎo)檢測(cè)器該類型檢測(cè)器主要通過監(jiān)控樣品電導(dǎo)特性檢測(cè)無機(jī)離子。表1

檢測(cè)器的主要類型也采用電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）、Corona?電霧式檢測(cè)器以及其它檢測(cè)器。另外，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析系統(tǒng)通過質(zhì)譜儀對(duì)由高效液相色譜儀分離出來的成分做進(jìn)行進(jìn)一步分析，具有較高的靈敏度并可以進(jìn)行特定檢測(cè)，逐漸獲得廣泛應(yīng)用。紫外/紫外?可見光用檢測(cè)器是檢測(cè)在紫外區(qū)或可見光區(qū)具有吸收成分的最常用儀器。

紫外/紫外?可見光用探測(cè)器采用氘燈（D2燈）作為光源，檢測(cè)波長(zhǎng)范圍從190納米至380納米。

如檢測(cè)成分波長(zhǎng)超過這個(gè)范圍，則采用加裝有鎢燈的紫外?可見光用檢測(cè)器。紫外?可見光用檢測(cè)器許多種成分在紫外區(qū)或可見光區(qū)具有吸收。但應(yīng)注意不同的成分有不同的吸收光譜。摩爾消光系數(shù)大的成分，即使量少，其色譜峰也很大。因此不可根據(jù)色譜峰尺寸確定物質(zhì)成分的濃度。比較典型的是以某一固定波長(zhǎng)檢測(cè)。

如需對(duì)樣品所有成分進(jìn)行高靈敏度檢測(cè)，則可使用時(shí)間程序功能檢測(cè)各種成分及其在分析過程中的最大吸收波長(zhǎng)。該檢測(cè)器部件中使用了光電二極管陣列（半異體設(shè)備）。二極管陣列檢測(cè)器可檢測(cè)紫外光至可見光區(qū)的吸收光譜。紫外?可見光用檢測(cè)器只有一個(gè)樣品側(cè)光接收段，而二極管陣列檢測(cè)器擁有多個(gè)（L-2455/2455U有1024個(gè)陣列）光電陣列，可在較寬波長(zhǎng)范圍內(nèi)獲取信息，這也是二極管陣列檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)之一。二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA）檢測(cè)器的原理為連續(xù)送液進(jìn)行高效液相色譜法分離過程中，每隔1秒鐘或少于1秒鐘檢測(cè)一次光譜。如以一個(gè)固定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，則物質(zhì)的成分可根據(jù)其保留時(shí)間識(shí)別出來；然而，保留時(shí)間的微波偏差可能造成成分識(shí)別困難。在這種情況下，可使用二極管陣列檢測(cè)器通過比較光譜來識(shí)別物質(zhì)成分。

二極管陣列檢測(cè)器與紫外?可見檢測(cè)器不同的是，光線直接照射到流動(dòng)池。光線通過流動(dòng)池后被衍射光柵散射，并且散射光的數(shù)量在光電二極管陣列中分別按每個(gè)波長(zhǎng)估算。二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA）特點(diǎn)：用光電二極管陣列同時(shí)接受來自流通池的全光譜透過光例：山梨酸和苯甲酸部分分離的色譜峰a.山梨酸b.苯甲酸c.混合物紫外/紫外?可見檢測(cè)器可監(jiān)控特定波長(zhǎng)的光吸收。然而，一些物質(zhì)吸收一種波長(zhǎng)的光，然后以另外一種波長(zhǎng)發(fā)射光，稱之為熒光。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是一種物質(zhì)吸收光線后達(dá)到高能量級(jí)別，然后再通過發(fā)射光恢復(fù)到原有的能量水平。有的物質(zhì)具有特定的光波長(zhǎng)，這種光波長(zhǎng)即可以吸收（激發(fā)波長(zhǎng)）又可以發(fā)射（發(fā)射波長(zhǎng)）。熒光漆和熒光筆以清晰的顏色發(fā)出熒光。熒光（FL）檢測(cè)器熒光檢測(cè)通常具有高靈敏度和選擇性（不探測(cè)雜質(zhì)），適合痕量分析。不是所有物質(zhì)都能天生發(fā)射熒光（天然熒光）。但是，像氨基酸等物質(zhì)與熒光反應(yīng)劑（衍生作用）反應(yīng)后可以作為熒光物質(zhì)檢測(cè)。使用該種方法可高靈敏度檢測(cè)各種成分。折光檢測(cè)器是根據(jù)光在溶液中的折射原理檢測(cè)物質(zhì)成分的。如圖所示，折光檢測(cè)器的流動(dòng)池分成樣品池和參比池。分析前，將洗托液引入其中一池，直到洗脫液流達(dá)到平衡。參比池注滿洗脫液，并將色譜洗脫液通過更改過的流道引入樣品池。當(dāng)成分從色譜柱中洗脫出來后，其化學(xué)成分在樣品側(cè)溶液中發(fā)生了變化，改變了光折變水平。結(jié)果，光接收部分接收光的數(shù)量發(fā)生了改變，顯示為可以檢測(cè)到的峰型。任何洗脫液中的成分都可以被檢測(cè)到，因此折光檢測(cè)器通常被叫作“萬用檢測(cè)器”。示差折光（RI）檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的工作原理是將色譜洗脫液霧化后，向生成微粒成分照射光，并檢測(cè)生產(chǎn)散射光。理論上說，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器可檢測(cè)任何不揮發(fā)性物質(zhì)成分。蒸發(fā)光散射探測(cè)器的靈敏度是折光檢測(cè)器的10倍，但對(duì)小分子的物質(zhì)成分靈敏度稍低，原因是小分子物質(zhì)的分子較小。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器主要用于檢測(cè)非紫外吸收成分。應(yīng)注意不揮發(fā)性的食鹽不能用作洗脫液。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）由于在漂移管中流動(dòng)相的蒸發(fā)使ELSD是唯一在檢測(cè)前去除流動(dòng)相的檢測(cè)器，從而消除了溶劑峰對(duì)基線的擾動(dòng)，而獲得穩(wěn)定的基線，并且擴(kuò)大了對(duì)流動(dòng)相組分的選擇范圍。此檢測(cè)器可用于梯度洗脫，且響應(yīng)值僅與光束中溶質(zhì)顆粒的大小和數(shù)量有關(guān)，而與溶質(zhì)的化學(xué)組成無關(guān)。檢測(cè)器選擇性靈敏度優(yōu)點(diǎn)光學(xué)檢測(cè)紫外/紫外?可見檢測(cè)器23可檢測(cè)物質(zhì)范圍寬。可吸收的光波長(zhǎng)為190納米到900納米不等。靈敏度很大程度上取決于物質(zhì)成分。二極管陣列檢測(cè)器

（DAD或PDA）23可檢測(cè)物質(zhì)范圍寬?？晌盏墓獠ㄩL(zhǎng)為190納米到900納米不等。靈敏度很大程度上取決于物質(zhì)成分。每種物質(zhì)成分光譜可以確認(rèn)。熒光（FL）檢測(cè)器34可有選擇性檢測(cè)到發(fā)射熒光的物質(zhì)成分，檢測(cè)靈敏度高。常用于柱前柱后衍生性檢測(cè)。示差折光（RI）檢測(cè)器11可檢測(cè)到任何與洗出液折射率不同的物質(zhì)成分，但靈敏度較低。不能用于梯度分析。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）12該檢測(cè)器是將色譜洗脫液霧化后，檢測(cè)生成微粒物質(zhì)成分的散射光。對(duì)非紫外吸收成分探測(cè)靈敏度高。電學(xué)檢測(cè)電導(dǎo)檢測(cè)器（CD）23該檢測(cè)器可檢測(cè)電離成分，主要用于離子色譜法。電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）34可檢測(cè)到電氧化-還原反應(yīng)產(chǎn)生的電流。檢測(cè)電活性物質(zhì)成分，靈敏度高。Corona?電霧式檢測(cè)器

（Corona?CAD?）13該檢測(cè)器使洗脫液霧化并檢測(cè)經(jīng)過電暈放電處理后的生成微粒成分。檢測(cè)紫外非吸收成分靈敏度比蒸發(fā)光散射檢測(cè)器高。各種檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)匯總檢測(cè)器的選用項(xiàng)目三：家禽用飼料品質(zhì)檢驗(yàn)微量移液器微量移液器微量移液器微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用微量移液器的使用項(xiàng)目三：家禽用飼料品質(zhì)檢驗(yàn)梯度洗脫技術(shù)液相色譜的洗脫方式使用高效液相色譜儀進(jìn)行分析時(shí)，常用兩種洗脫方式，一種為等度洗脫（isocraticelution），另一種為梯度洗脫（gradientelution）。等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品。梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。采用梯度洗脫可以縮短分析時(shí)間，提高分離度，改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。不同洗脫方式下流動(dòng)相的組成變化1、梯度洗脫的可變參數(shù)A及B流動(dòng)相的成分和化學(xué)特性梯度的陡度梯度的變化形狀兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合，即有多種洗脫曲線：線性梯度凹形梯度凸形梯度階梯形梯度線性梯度最常用，尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。2、梯度洗脫的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)單位時(shí)間的分離能力增加檢測(cè)靈敏度提高缺點(diǎn)儀器設(shè)備要求高不適合某些檢測(cè)方式柱需再生定量分析的重復(fù)性較低3、實(shí)現(xiàn)梯度洗脫的方法低壓梯度只用一個(gè)輸液泵，靠梯度單元中電磁閥開關(guān)時(shí)間的比例來控制AB液的比例實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相濃度的變化高壓梯度靠?jī)蓚€(gè)或更多的輸液泵不同流速來直接實(shí)現(xiàn)各流動(dòng)相的比例低壓梯度設(shè)備便宜，但流動(dòng)相比例精度不夠，而且存在濃度梯度延遲。高壓梯度設(shè)備較貴，精度好，濃度梯度延遲很小。4、梯度設(shè)置的方法不同儀器軟件，設(shè)置方法有所區(qū)別，僅示例說明。5、梯度洗脫的作用梯度洗脫可在下列情形中發(fā)揮重要作用：?A?在等度下具有較寬k值的多種樣品分析。?B?大分子樣品分析。C?樣品含有強(qiáng)保留的干擾物，在目標(biāo)化合物出峰后設(shè)置梯度洗脫，將干擾物洗脫出來，以免其影響下一次分析。D?單組份化合物方法建立時(shí)，不知道其洗脫情況，使用梯度洗脫，找出其較優(yōu)的洗脫條件。5、梯度洗脫的作用5、梯度洗脫的作用6、梯度洗脫帶來的問題及解決方法6、梯度洗脫帶來的問題及解決方法6、梯度洗脫帶來的問題及解決方法7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)7、梯度洗脫的方法開發(fā)項(xiàng)目三：家禽用飼料品質(zhì)檢驗(yàn)衍生化技術(shù)1、衍生化的定義衍生化是色譜分析中常用的一種輔助手段。原理是待測(cè)樣品與具有特定功能基團(tuán)的衍生化試劑通過定量快速反應(yīng)，生成符合分析要求的衍生化物，通過檢測(cè)衍生化物的量來間接測(cè)定待測(cè)樣品的量。2、衍生化的目的改變待測(cè)物的色譜保留特性以改善分離度改善待測(cè)物的檢測(cè)特性，以增加其對(duì)檢測(cè)器的響應(yīng)（例如：紫外標(biāo)記、熒光標(biāo)記、電化學(xué)