熒光分光光度法測定維生素B2

儀器分析實驗維生素B2的測定維生素B2維生素B2,又稱核黃素，為橙色結(jié)晶性粉末。熒光測定的依據(jù)：1.結(jié)構(gòu)與熒光的關(guān)系2. F

=2.3

I0

abc

當(dāng)入射光強(qiáng)度I0

和光程一定時，上式為：

F

=Kc

即熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成之正比，但這種線性關(guān)系只有在極稀的溶液中。對于較濃溶液，由于猝滅現(xiàn)象和自吸收等原因，使熒光強(qiáng)度和濃度不呈線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線法

熒光強(qiáng)度vs.濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線熒光強(qiáng)度核黃素濃度樣本激發(fā)濾光片發(fā)射濾光片F(xiàn)s-F0最大最大的激發(fā)波長最大的發(fā)射波長熒光發(fā)射處于第一激發(fā)單重態(tài)中的電子躍回至基態(tài)各振動能級時，將得到最大波長為λ3的熒光。很明顯，λ3的波長較激發(fā)波長λ1或λ2都長，而且不論電子開始被激發(fā)至什么高能級，最終將只發(fā)射出波長λ3為的熒光。熒光的產(chǎn)生在10-7-10-9s內(nèi)完成。熒光、磷光能級圖S0S1S2T1吸光

1吸光

2熒光

3第一片濾光片（蘭字）λ（nm）360400480530FsF0Fs-F0第二片濾光片λ（nm）420450470510550600FsF0Fs-F0固定第二片濾光片λ（nm）：固定第一片濾光片λ（nm）：實驗內(nèi)容1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作維生素B2系列標(biāo)準(zhǔn)液的配制：操作規(guī)范靈敏度選擇：（舊儀器統(tǒng)一選10，新儀器選4）濾光片的選擇：Fs-F0最大標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：c對Fs-

F0作圖，線性2.樣品含量的測定樣品溶液的制備（稱量，定容，樣品處理，最后定容）樣本的測定及濃度計算實驗注意事項基本操作要規(guī)范：吸量管的使用，溶液轉(zhuǎn)移，定容試劑取后，得放回原處保持試驗臺整潔移液管的使用常見移液管：標(biāo)有溫度和容量(注意是否標(biāo)有吹)用途：準(zhǔn)確移取一定體積的液體操作：洗滌(蒸餾水)、潤洗(3次)、移液、洗滌干凈注意事項：1、整個操作過程中，保持移液管的垂直；2、讀數(shù)時視線與凹液面平齊溶液下端1-2cm二、吸量管吸量管的全稱是“分度吸量管”，它是帶有分度的量出式量器（帶刻度的移液管。吸量管的使用方法與移液管大致相同。實驗注意事項基本操作要規(guī)范：吸量管的使用，溶液轉(zhuǎn)移，定容試劑取后，得放回原處保持試驗臺整潔實驗報告格式1、實驗?zāi)康模ê唵危?、實驗原理（詳細(xì)）3、試劑儀器（簡單）4、實驗步驟（簡單）5、數(shù)據(jù)處理（詳細(xì)，表格，圖）6、結(jié)果討論