宮頸癌良惡性病變中三種激酶表達的比較

宮頸癌良惡性病變中三種激酶表達的比較

1和2個細胞周期檢測點（kinse1、2、chk1、chk2）是細胞周期檢測點（g1、s、s、m）發(fā)揮作用的主要激酶，用于修復腫瘤放療和化療引起的dna損傷。1個細胞像激酶（pgi-soa1，plk1）主要在m期發(fā)揮作用，腫瘤失去的dna在此期恢復。然而，這三個檢測點中關于腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)的激酶數(shù)量很少，也沒有對腫瘤介質進行研究。本實驗將應用免疫組化方法檢測Chk1、Chk2和Plk1蛋白在宮頸癌和慢性宮頸炎組織中的表達,研究3種細胞周期檢測點激酶蛋白在宮頸良惡性病變中的表達差異,探討其與宮頸癌臨床病理特征的關系及3種激酶在宮頸癌組織中表達之間的相互關系,為臨床治療提供依據(jù)。1對象和方法1.1手術治療患者的選擇以同濟醫(yī)院婦產(chǎn)科2000年4月—2002年6月確診的宮頸癌患者并行手術切除,術后送病理檢查證實為宮頸癌患者為樣本,剔除術前接受放化療的,剔除合并其他自身免疫性疾病、內(nèi)分泌疾病、代謝性疾病等的患者,將剩下的患者編號,由電腦隨機選取宮頸癌患者43例。其中鱗癌38例,腺癌4例,腺鱗癌1例。按FIGO1994分期:0期3例,Ⅰ期23例,Ⅱ期9例,Ⅲ期8例,Ⅳ期0例。年齡24～80歲,中位年齡48歲。同時由電腦隨機選取我院2002年經(jīng)病理確診的慢性宮頸炎患者20例,年齡20～59歲,中位年齡38歲。1.2免疫組化染色小鼠抗人Chk1單抗(稀釋度1∶200)、小鼠抗人Chk2單抗(稀釋度1∶100)及小鼠抗人Plk1單抗(稀釋度1∶100)均為美國SantaCruz公司產(chǎn)品;SP試劑盒、顯色劑DAB購自北京中山公司。免疫組化染色按SP試劑盒說明書進行,PBS代替一抗作陰性對照,已知陽性片作陽性對照。Chk1、Chk2和Plk1均主要表達于胞核,部分表達于胞質。根據(jù)著色程度分別記0分、1分、2分、3分。陽性細胞<10%記0分,10%～24%記1分,25%～49%記2分,50%～74%記3分,≥75%記4分。綜合判定取著色強度和陽性細胞百分數(shù)分值之積:0分記為(-),1、2分記為(+),3、4分記為(++),6、8分記為(+++),9、12分記為(++++);(-)和(+)定義為陰性即低表達,(++)～(++++)定義為陽性即高表達。1.3統(tǒng)計處理采用SPSS11.5軟件進行χ2檢驗及Spearman等級相關分析,取α=0.05為顯著性校驗水平。2結果2.1%表達情況43例宮頸癌病變組織中,Chk1陽性33例,占76.7%,Chk2陽性26例,占60.5%,Plk1陽性14例,占32.6%,表達情況見圖1及表1。20例慢性宮頸炎病變組織中Chk1、Chk2和Plk1的陽性分別為6例、7例和0例,占總例數(shù)的30.0%、35.0%和0,表達情況見圖2及表1。Chk1、Chk2和Plk1在宮頸癌組織中的陽性率均高于宮頸良性病變,其中Chk1和Plk1的表達差異有顯著性(P<0.01),但Chk2的表達差異無顯著性(P>0.05,見表1)。2.2患者年齡、組織病理學類型和臨床分期關系統(tǒng)計分析顯示,Chk1、Chk2和Plk1的表達與宮頸癌患者年齡、組織病理學類型和臨床分期無關(P>0.05,見表2)。但Chk1和Plk1的表達在不同分化程度宮頸癌患者中的差異有顯著性(P<0.05,見表2)。2.3chk1、chk2表達的關分析將43例宮頸癌病變組織的Chk1、Chk2和Plk1蛋白的表達水平做Spearman等級相關分析發(fā)現(xiàn):Chk1與Chk2的表達呈正相關,相關系數(shù)r=0.492,P=0.001;Chk1與Plk1及Chk2與Plk1間無相關關系(統(tǒng)計學參數(shù)分別為r=0.283,P=0.066和r=0.151,P=0.335)。說明Chk1與Chk2蛋白在表達上存在著密切的聯(lián)系。3激酶蛋白的表達與妊娠機制中的發(fā)揮作用Chk1、Chk2均為絲氨酸/蘇氨酸激酶,是ATM(ataxia-telangiectasiamutated,共濟失調(diào)毛細血管擴張癥突變基因)及ATM相關基因的下游效應基因,位于細胞周期檢測點激活途徑的終端,當細胞DNA受到放射線或化療藥物作用而損傷時,Chk1、Chk2通過調(diào)控CDC25(A、B、C)、Weel、14-3-3蛋白,激活DNA損傷檢測點,使細胞周期阻滯于G1/S、S和G2/M期,進行受損DNA的修復。Plk1是一種高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶,參與細胞周期中的中心體的成熟、紡錘體的形成以及染色體的分離等過程,當DNA受損時,Plk1在M期檢測點發(fā)揮作用,從而使細胞阻滯于M期。在腫瘤放療或化療后,腫瘤細胞DNA受損后將阻滯于上述各個周期檢測點,客觀上為細胞的生存提供了條件,這也是臨床上腫瘤放療抵抗和化療耐藥產(chǎn)生的重要機制。因此,將這些周期檢測點激酶作為放化療增敏的靶點,可能可以成為一條比較理想的腫瘤治療策略。通過免疫組化檢測后發(fā)現(xiàn),3個激酶蛋白在宮頸癌組織中的表達均高于宮頸良性組織,特別是Chk1和Plk1,良惡性組織的表達差異有顯著性,與先前報道相符,說明這兩個蛋白具有相對意義上的腫瘤選擇性表達,具有更好的靶向特異性,且Chk1在宮頸癌組織中有76.7%的高表達,Plk1在良性病變中無明顯表達,說明Chk1和Plk1更有可能成為較理想的宮頸癌治療靶點。將3種激酶蛋白的表達與宮頸癌患者各臨床病理特征進行統(tǒng)計分析后得出,Chk1和Plk1的表達在不同分化程度宮頸癌患者中的差異有顯著性,分化越低,表達越高,提示這2個激酶可能在宮頸腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了某些作用。Chk1、Chk2在宮頸癌組織的表達有相關性,這與兩者均為ATM/ATR下游效應基因,發(fā)揮相似作用的事實相符。但兩者在表達水平和與宮頸癌患者各臨床病理特征的關系上卻有不同,說明兩者還存在差異,這與多位學者的報道一致。綜上所述,Chk1和Plk1在宮頸惡