牛奶摻假檢驗(yàn)

牛奶摻假檢測

南京衛(wèi)崗乳業(yè)有限公司質(zhì)量管理部

2一、背景概述：牛奶摻假是世界性難點(diǎn)04年安徽阜陽劣質(zhì)奶粉事件08年三鹿發(fā)生了三聚氰胺事件11年底發(fā)生了蒙牛黃曲霉毒素M1檢出后，國家將乳品安全作為市場監(jiān)管的重點(diǎn)印度是牛奶生產(chǎn)大國，但牛奶摻假現(xiàn)象屢見不鮮。《印度時(shí)報(bào)》2012年1月10日報(bào)道稱印度三分之二牛奶摻假含鹽和清潔劑等

印度牛奶不是摻假而是“摻奶”印度送奶員印度少女頂著裝牛奶的空罐04年安徽阜陽劣質(zhì)奶粉事件

專家授課頭部偏大，臉部浮腫08年三鹿發(fā)生了三聚氰胺事件

9二、牛奶摻假感官判別（一）肉眼觀察判斷1、看顏色正常牛奶呈乳白色或淡黃色發(fā)亮，若顏色變淡，發(fā)青色就可能是因摻水使牛奶變得稀薄。發(fā)紅色，出現(xiàn)常見的血奶，摻入初乳。2、看有無沉淀或漂浮物若有細(xì)微粒的沉淀或漂浮物則牛奶中可能摻了米湯、面湯、糊精等含淀粉食物。3、看有無雜質(zhì)

若牛奶中混有小片、小顆粒等雜質(zhì)，可能是摻堿、摻鹽、摻糖、摻淀粉類等，也可能是牛奶衛(wèi)生不好沒有過濾干凈。4、煮沸觀察

取約10毫升牛奶于試管中煮沸觀察，如有凝結(jié)或絮狀物產(chǎn)生，則牛奶已變質(zhì)，無結(jié)塊的是好奶。（二）口感及氣味判別通過口嘗鼻聞，主要使用冷嘗與熱嘗相結(jié)合，可對牛奶摻假情況進(jìn)行初步判定。奶味過甜：奶中加糖奶有咸味：奶有咸味奶中摻鹽其他非正常牛奶氣味必要時(shí)組織口感評審

15三、牛奶摻假快速檢測方法1、摻水的檢測

（1）測密度法（比重檢查法）：正常牛乳的密度（比重范圍）應(yīng)為1.028㎏/L～1.032㎏/L；摻水的檢測

（2）冰點(diǎn)測定法：正常牛乳的冰點(diǎn)很穩(wěn)定，摻水稀釋后冰點(diǎn)會升高。根據(jù)冰點(diǎn)的不同，可確定乳中的摻水量。-0.500---0.560℃2、堿性物質(zhì)的檢測（1）溴麝香草酚藍(lán)顯色反應(yīng)：

取5ML樣品置試管中，沿管壁小心地加入5滴0.04%溴射香草酚蘭溶液，切勿使溶液相互混合，2分鐘后根據(jù)環(huán)層指示劑顏色的特征，確定結(jié)果。同時(shí)做對照試驗(yàn)。陽性（2）玫瑰紅酸顯色反應(yīng)：

取被檢乳、正常乳各5ml分別注入2個(gè)試管中，然后各滴加0.05%的玫瑰紅酸酒精溶液5ml，搖勻后觀察其變化。陽性3、葡萄糖類物質(zhì)的檢測取尿糖試紙，浸入奶樣中2秒鐘后取出，在2分鐘內(nèi)對照標(biāo)準(zhǔn)板觀察。含有葡萄糖類物質(zhì)時(shí)，試紙即有顏色變化。陽性葡萄糖類：增加牛奶比重4、摻蔗糖取3ML牛奶于一試管中，加0.6ML濃鹽酸，混勻，加入間苯二酚0.1-0.5克，置于酒精燈上燒灼至沸。摻有蔗糖的牛奶呈紅色反應(yīng)。陽性蔗糖：增加牛奶比重5、淀粉、面粉類物質(zhì)的檢測將5毫升牛乳稍稍煮沸，冷卻后加入3-5滴2%碘液，充分混勻，若呈現(xiàn)藍(lán)色或青藍(lán)色，說明有淀粉摻入，若牛奶顏色未變就沒有摻淀粉。陽性6、摻尿素的檢驗(yàn)操作：向試管中加放3ml待測牛奶，加入1%亞硝酸鈉溶液和濃硫酸各1m1搖勻，放置5分鐘，待泡沫消失后加格里斯試劑約0.5g搖勻。摻有尿素的牛奶呈黃色，正常牛奶為紫紅色。陽性7、摻食鹽方法一：取5毫升0.01mol/L硝酸銀溶液加入試管中，滴入2滴10%鉻酸鉀溶液混勻，再加入1毫升被檢乳，充分搖勻。若呈黃白色，說明有食鹽加入,陰性呈暗紅色。方法二：正常牛奶中含有鹽類物質(zhì)，故具有電導(dǎo)性，牛奶電導(dǎo)率的正常范圍在4.5-5.5×10-4S，若>6.0×10-4S,則有摻假嫌疑。陽性8、牛奶中硫氰酸鈉的檢測方法1操作步驟：取2ml原料乳于試管中，沿管壁緩慢加入1mlFeCl3溶液，5min內(nèi)觀察接觸面的顏色變化2結(jié)果判定：陰性：黃色陽性微量：桔黃色或桔紅色陽性中量：紅色9、抗生素的檢測（1）凝結(jié)試驗(yàn)(成型試驗(yàn))

取100ml奶樣于150ml三角瓶中，在電爐上加熱煮沸后，冷卻至42℃，加入4-6ml經(jīng)接種的乳酸菌種，然后置于42℃的培養(yǎng)箱中發(fā)酵，2.5-3.0小時(shí)后觀察。如果奶樣已發(fā)酵成型，證明無抗生素；反之則為異常乳。9、抗生素的檢測

吸管、三角瓶(或試管)、量筒、溫度計(jì)、刻度吸管檢測流程檢樣100ml95℃水浴5分鐘

冷卻至42℃以下

加酸奶菌種4ml,振搖均勻

樣品管置于42℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

培養(yǎng)2.5-3.0小時(shí)后觀察組織狀態(tài)9、抗生素的檢測

（2）SNAP快速檢測法

用專用吸管加奶液于樣品管中，搖勻樣品管，加熱樣品和檢測盒5分鐘，加奶液于檢測盒的樣品孔中，當(dāng)激活圓開始褪卻時(shí)，按鍵，4分鐘后立即用讀數(shù)儀判讀結(jié)果。陽性陰性10、摻牛尿的檢驗(yàn)操作：取被測牛奶5ml，加4～5滴10%氫氧化鈉溶液，再加飽和苦味酸0.5ml，充分搖勻，放置10～15分鐘，如奶摻有牛尿，出現(xiàn)明顯的橙色，而天然奶呈苦味酸固有的黃色。11、摻豆?jié){

取牛奶5毫升于玻璃試管中，先加入乙醇、乙醚1：1的混合液3毫升，再加入25%的氫氧化鉀溶液2毫升，充分搖動(dòng)在5－10分鐘內(nèi)觀察顏色變化，摻了豆?jié){的呈黃色，正常牛奶顏色不變。12、摻洗衣粉1檢測方法

取20mL乳樣，加亞甲蘭試劑1ml混合均勻，加入3ml氯仿混勻震蕩，靜置分層。2結(jié)果判定

下層（氯仿層）顯蘭色表明存在陰離子表面活性劑，判定為陽性。

洗衣粉：延緩牛奶腐敗，降低酸度13、摻硝酸鹽1檢測方法

吸取3ml原料乳樣注于試管中，加入亞硝酸鹽檢測試劑0.3g，混勻，靜置2min后觀察顏色。2結(jié)果判定

如顯粉色或粉紅色，為陽性，如不顯色為陰性。陽性14、摻亞硝酸鹽1操作步驟

吸取3ml原料乳樣注于試管中，加入亞硝酸鹽檢測試劑0.3g，混勻，靜置2min后觀察顏色。2結(jié)果判定

試管中乳樣顯粉紅色為陽性，白色為陰性。檢出限為0.1ppm。陽性15、新鮮度檢測（1）煮沸法：將10ml乳樣置沸水浴中5分鐘，若產(chǎn)生凝塊或絮片則不新鮮。（2）酒精法：等量的75%（72%）酒精與牛乳混合，振搖后不出現(xiàn)絮片的牛乳是新鮮的16、摻水解動(dòng)物蛋白1操作方法：取5mL乳樣，加除蛋白試劑5mL混合均勻，過濾，沿濾液試管壁慢慢加入飽和苦味酸溶液約0.6mL形成環(huán)狀接觸面。2結(jié)果判定：環(huán)層顏色

摻假試驗(yàn)

判定結(jié)論清亮

不含水解動(dòng)物蛋白

合格乳白色環(huán)狀

含水解動(dòng)物蛋白

異常乳17、原料乳中重鉻酸鹽檢測方法

1原理

重鉻酸鹽與硝酸銀反應(yīng)生成黃色的重鉻酸銀。2檢測方法

取2ml奶樣于試管中，加入2ml2%的硝酸銀，振蕩搖勻后觀察顏色的變化。3結(jié)果判定

出現(xiàn)黃色判定為摻重鉻酸鉀。原料乳中重鉻酸鹽檢測方法重鉻酸鉀占正常牛奶的濃度比例奶樣顏色摻假試驗(yàn)的結(jié)果判定0%白色不含K2Cr2O70.1%橘黃含K2Cr2O70.005%米黃含K2Cr2O70.002%稍黃含K2Cr2O70.001%只有和正常原奶作對比才能比出稍微有點(diǎn)黃色很難判定18、三聚氰胺檢測方法（1）GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》，用三氯乙酸溶液-乙腈提取，經(jīng)陽離子交換固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜測定，外標(biāo)法定量（C18柱）。（2）通過三聚氰胺試劑盒檢測，利用酶聯(lián)免疫吸附測定法三聚氰胺殘留。（3）GB/T22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法》，用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強(qiáng)陽離子交換色譜柱分離，高效液相色譜測定，外標(biāo)法定量。（4）三聚氰胺快速檢測試紙條三聚氰胺檢測方法1、用牛奶稀釋液按1:4稀釋新鮮牛奶，混勻待檢。

2、吸取待檢樣品溶液垂直滴加3滴于加樣孔。

3、

液體流動(dòng)時(shí)開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)3～5min，6min以后判讀無效。

三聚氰胺快速檢測試紙條三聚氰胺快速檢測試紙條三聚氰胺的危害19、苯甲酸檢測方法液相色譜法：GB/T21703-2008《乳與乳制品中苯甲酸和山梨酸的測定》，通過沉淀去除試樣中的脂肪和蛋白質(zhì)，甲醇稀釋，過濾。采用反相液相色譜法分離測定（C18

柱）?；瘜W(xué)法：苯甲酸或水楊酸在酸性條件下由乙醚從牛乳中抽取出來，水浴蒸干后在NH4OH形成的堿性條件下可以和FeCl3溶液形成赤褐色的苯甲酸鐵或深紫色的水楊酸鐵。20、摻雙氧水檢測方法1操作步驟

取被檢乳樣lml于試管中，加入約5滴碘化鉀淀粉溶液，搖勻，再加入1滴硫酸搖勻，靜置2min后觀察顏色。2結(jié)果判定

牛乳中有過氧化氫存在時(shí)即顯藍(lán)色或藍(lán)紫色。正常乳相同操作，在滴入硫酸后也可能出現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)紫色，但搖勻后藍(lán)色即消失不再出現(xiàn)。陽性陰性21、β-內(nèi)酰胺酶檢測方法

β-內(nèi)酰胺酶酶聯(lián)免疫檢測方法1原理

采用生物酶化學(xué)方法快速測定經(jīng)過β-內(nèi)酰胺酶催化水解后殘留的青霉素G的含量，對牛奶中β-內(nèi)酰胺酶的殘留進(jìn)行定量檢測。2儀器MK3酶標(biāo)儀牛奶中β-內(nèi)酰胺酶檢測試劑盒（MRLBL-100K）

1)取陽性質(zhì)控溶液50μl到離心管中，再加入375μl待檢測樣品充分混勻，靜置40分鐘，配成待檢溶液。2)用移液器取300μl已配好的待檢溶液，緩慢豎直滴加至檢測條的凹槽中。

3)孵育8分鐘結(jié)束后，蜂鳴器響動(dòng)，取出檢測條，3分鐘內(nèi)判讀結(jié)果。當(dāng)讀數(shù)儀讀數(shù)結(jié)果為≤+500時(shí)可以判定為β-內(nèi)酰胺酶陽性，當(dāng)