造血細胞檢驗方法：血象檢查及細胞化學染色

第三章造血細胞檢驗方法

第一節(jié)造血細胞形態(tài)學第二節(jié)細胞化學染色第三節(jié)骨髓活體組織檢驗（自學）第四節(jié)血細胞超微結(jié)構(gòu)檢驗（自學）第五節(jié)造血祖細胞培養(yǎng)檢驗（自學）第六節(jié)血細胞遺傳學檢驗（自學）第七節(jié)分子血液學檢驗（自學）下一頁目的要求第一節(jié)血象及骨髓象檢驗正常血細胞形態(tài)學

血象檢驗骨髓象檢驗二、血象檢驗血涂片檢驗步驟及內(nèi)容血涂片檢驗的重要性（一）血涂片檢驗步驟及內(nèi)容計數(shù)與分類

至少100個有核細胞，同時注意各種細胞的形態(tài)，并要全片觀察血涂片中其他部位（尤其尾部等血膜邊緣部位）計算結(jié)果

計算出各階段細胞的百分比，并填入骨髓報告單的血涂片欄中血涂片特征描述

一般需要描述涂片中有核細胞總數(shù)情況，以何種細胞為主，血細胞形態(tài)如何，有無寄生蟲及其他明顯異常細胞等各系細胞觀察內(nèi)容粒系：NEU數(shù)量及形態(tài)，如有無原粒、幼粒、棒狀小體、毒性改變等形態(tài)異常淋系：LYC數(shù)量及形態(tài)，有無原淋、幼淋及異淋等單系：MON數(shù)量及形態(tài)，有無原單、幼單、棒狀小體等其他有核細胞：有無有核紅細胞、漿細胞、巨核細胞、淋巴瘤細胞、吞噬細胞等無核細胞：包括紅細胞、血小板。注意紅細胞形態(tài)、內(nèi)含物及排列方式；血小板估計數(shù)量、聚集性及形態(tài)（二）血涂片檢驗的重要性骨髓象相似而血象有區(qū)別

如溶貧、缺鐵性貧血和急性失血等骨髓象有區(qū)別而血象相似

如傳染性淋巴細胞增多癥和慢，但前者骨髓中淋巴細胞稍增多，而后者骨髓中淋巴細胞卻明顯增多。骨髓象變化不顯著而血象有顯著異常

如傳單骨髓象有顯著異常而血象變化不顯著

如骨髓瘤、脂質(zhì)代謝障礙性疾病血象中細胞較骨髓中細胞成熟

較易辨認，輔助白血病細胞類型的判斷第二節(jié)細胞化學染色

CytochemicalStains細胞化學染色是細胞學和化學相結(jié)合而形成的一門科學。它以細胞形態(tài)學為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學反應(yīng)的原理對血細胞內(nèi)的各種化學物質(zhì)作定性、定位、半定量分析的方法。以前稱為組織化學染色（簡稱組化）細胞化學染色的作用輔助判斷急性白血病的細胞類型輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷細胞化學染色的基本步驟固定：包括蒸汽、液體固定，如甲醛、甲醇、乙醇等顯示：即有色的沉淀反應(yīng)。包括偶氮偶聯(lián)法（酶）、普魯

士藍反應(yīng)（鐵）、雪夫反應(yīng)（糖類）、聯(lián)苯胺法等復染：目的是顯示各種細胞而便于辨認。選擇原則：復染

液與沉淀的顏色有明顯的反差。如藍色沉淀→中性

紅、核固紅，紅色沉淀→甲基綠、美蘭細胞化學染色的種類鐵染色中性粒細胞堿性磷酸酶染色過氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過碘酸-雪夫反應(yīng)酸性磷酸酶染色貧血組合：鐵染色NAP染色PAS染色4Fe3++3K4[Fe（CN）6]Fe4[Fe（CN）6]3+12K+骨髓中鐵亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵↓（普魯士藍）一、鐵染色—原理

（ferritinstain）酸性正常人骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒（細胞外鐵）和中晚紅細胞（細胞內(nèi)鐵）中鐵染色的結(jié)果判斷結(jié)果判斷：陽性產(chǎn)物為藍色沉淀復染：中性紅或核固紅骨髓鐵：分為細胞外鐵和細胞內(nèi)鐵下一頁細胞外鐵的結(jié)果判斷（-）無蘭色顆粒（+）有少量鐵顆粒和鐵小珠（++）有多量鐵顆粒和鐵小珠（+++）有許多鐵顆粒和鐵小珠，有少量鐵小塊（++++）有極多鐵顆粒和鐵小珠，有許多鐵小塊細胞外鐵（－）細胞外鐵－顆粒細胞外鐵－小珠、塊細胞外鐵－顆粒、小珠、塊細胞外鐵－陰性、4＋、污染鐵細胞內(nèi)鐵的結(jié)果判斷Ⅰ型鐵顆粒1～2顆Ⅱ型鐵顆粒3～5顆Ⅲ型鐵顆粒6～10顆或粗顆粒1～4顆Ⅳ型鐵顆粒＞10顆或粗顆粒＞5顆環(huán)形鐵粒幼紅細胞（ringedsideroblast）：鐵顆粒在5顆以上，其中圍繞核周排列1/3以上觀察

100個

中幼、晚幼紅細胞，計算出細胞內(nèi)鐵陽性率鐵粒幼紅細胞及鐵粒紅細胞吞噬細胞鐵（彌散、顆粒、小珠、塊狀）吞噬細胞內(nèi)的鐵鐵染色的參考范圍細胞外鐵（+）～（++），2/3為（++）細胞內(nèi)鐵:陽性率為12%～44%以Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型鐵染色的臨床意義缺鐵性貧血：外鐵(-)、內(nèi)鐵為0或↓↓鐵粒幼細胞貧血：外鐵↑↑、內(nèi)鐵↑↑。環(huán)形鐵粒幼紅細胞↑＞15%骨髓增生異常綜合征：RARS其環(huán)形鐵粒幼紅細胞＞15%，細胞外鐵也常增加其他：溶貧、巨幼貧、再障、多次輸血后和白血病等），外鐵、內(nèi)鐵↑或N；感染、肝硬化、尿毒癥等，外鐵↑而內(nèi)鐵↓二、中性粒細胞堿性磷酸酶染色－－原理

(neutrophils)alkalinephosphatase，NAP/AKP

觀察100個

中性成熟粒細胞，標本為新鮮血片磷酸萘酚鈉堿性磷酸酶萘酚重氮鹽PH9.6左右有色沉淀NAP的染色結(jié)果結(jié)果:出現(xiàn)紅色顆粒，僅存在中性成熟粒細胞中結(jié)果判斷標準及分級:（-）胞漿淡藍色，無紅色顆粒（+）胞漿中有少量紅色顆粒，但不超過胞漿總面積的1/4（++）胞漿中有較粗的紅色顆粒，占胞漿總面積的1/4～1/2（+++）胞漿中基本上充滿紅色顆粒，但密度較低（++++）胞漿中充滿粗大紅色顆粒而呈深紅色，甚至掩蓋核NAP的積分計算（-）0分10個0×10＝0分（+）1分20個1×20＝20分（++）2分40個2×40＝80分（+++）3分20個3×20＝60分（++++）4分10個4×10＝40分NAP陽性率為90%，積分200分陰性陽性嗜酸性粒細胞單核淋巴1+2+3+4+NAP的參考值及臨床意義參考值:積分為30～130分（不需記）臨床意義：NAP↑：感染、再障、淋巴瘤、急淋、MPD等NAP↓：CML、PNH、急粒等類白呈強陽性類白CML呈陰性慢粒五、過碘酸-雪夫反應(yīng)(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

過碘酸(periodicacid)乙二醇基雙醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品紅無色品紅（shiff）PAS正常血細胞的染色反應(yīng)-紅色

粒系：分化好的原粒至中性分葉核粒細胞均呈陽性反應(yīng)，并隨著細胞的成熟而逐漸增強，陽性呈彌散性、細顆粒狀；嗜酸性顆粒呈陰性（間質(zhì)陽性），嗜堿性顆粒呈陽性單系分化差的原始單核細胞呈陰性，其他陽性，絕大多數(shù)陽性呈細顆粒狀淋系：大多數(shù)呈陰性，陽性率常＜20％，呈粗顆?；驂K狀巨系均呈陽性，呈顆粒狀或塊狀紅系：均呈陰性PAS染色2：小淋巴細胞呈陽性，呈顆粒狀（較粗）PAS染色1：1中性中幼粒細胞，呈彌散及顆粒狀陽性（較弱）；2中性成熟粒細胞，呈強陽性；3幼紅細胞，呈陰性；4淋巴細胞，呈陰性巨核細胞呈陽性PAS的臨床意義鑒別紅系良惡性疾?。杭t系惡性疾病中紅系可陽性（包括紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征），紅系良性基本陰性輔助鑒別急性白血病類型：ALL呈粗顆粒狀或塊狀；急粒呈彌散紅色或細顆粒狀；急單：呈細顆粒狀其他細胞：轉(zhuǎn)移性腺癌、戈謝細胞呈強陽性，尼曼-匹克細胞、Reed-Sternberg細胞陰性或弱陽性PAS染色：1和2為有核紅細胞，呈陽性；其他有核紅細胞呈陰性PAS染色：原始及幼稚淋巴細胞均陽性，呈粗顆粒狀、、塊狀陽性急性淋巴細胞白血病PAS染色：淋巴瘤細胞均陽性，呈粗顆粒狀、塊狀陽性淋巴瘤細胞白血病PAS染色：急單，細顆粒狀急單：細顆粒狀PAS染色：急粒急性粒細胞白血病PAS染色：M3PAS染色：M3急性早幼粒細胞白血病尼曼-皮克細胞呈弱陽性尼曼-皮克細胞通常同時做酒石酸抑制試驗毛細胞的陽性不被酒石酸抑制磷酸AS-BI萘酚ACPAS-BI萘酚六偶氮付品紅紅色沉淀六、酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色acidphosphatasestain,ACPACP染色的正常血細胞的染色反應(yīng)粒細胞、單核細胞、巨核細胞、血小板均呈陽性淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞均呈陽性

ACP染色的臨床意義毛細胞白血病:毛細胞呈陽性，