糖尿病研究模型

糖尿病藥理學(xué)研究方法1整理ppt目錄糖尿病的發(fā)病機制糖尿病的治療靶點糖尿病的模型糖尿病的藥理學(xué)研究方法2整理ppt什么是糖尿??？糖尿病〔diabetesmellitus〕是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖那么是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時長期存在的高血糖，導(dǎo)致各種組織，特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。糖尿病的發(fā)病機制3整理ppt分型1型糖尿?。河捎谝葝uβ細(xì)胞破壞而導(dǎo)致內(nèi)生胰島素絕對缺乏。2型糖尿?。翰煌潭鹊囊葝u素分泌障礙和胰島素抵抗并存的疾病。糖尿病的發(fā)病機制4整理ppt表現(xiàn)：三多一少糖尿病的發(fā)病機制糖尿病的并發(fā)癥5整理ppt1型糖尿?。好庖呦到y(tǒng)缺陷和遺傳等因素。童年時期就發(fā)病。終身注射胰島素。2型糖尿病：高糖素樣多肽一、胰腺中的胰島、胰島素受體的功能障礙。后期發(fā)病。

糖尿病的發(fā)病機制6整理ppt糖尿病的發(fā)病機制小腸中的多肽一發(fā)現(xiàn)血糖水平升高。報告給胰腺。胰腺通知胰島分泌胰島素。胰島素在胰島素受體的配合下降低血糖。7整理ppt糖尿病的發(fā)病機制肥胖導(dǎo)致的糖尿病8整理ppt糖尿病的治療靶點9整理ppt體外研究模型基于靶點的細(xì)胞模型基于表型的細(xì)胞模型體內(nèi)研究模型正常動物糖尿病模型自發(fā)性糖尿病動物模型實驗性糖尿病動物模型基因工程糖尿病動物模型糖尿病的模型10整理ppt基于靶點的細(xì)胞模型以受體為靶點的細(xì)胞模型以胰島素信號通路為靶點的細(xì)胞模型以鈣通道和KATP通道為靶點的細(xì)胞模型基于表型的細(xì)胞模型胰島素抵抗細(xì)胞模型葡萄糖消耗運轉(zhuǎn)細(xì)胞模型糖尿病體外研究模型11整理pptGLP-1的生理作用以受體為靶點的細(xì)胞模型GLP-1受體cAMPGLP-1受體細(xì)胞模型膜受體：GLP-1；核受體：PPARγ

。12整理ppt以胰島素信號通路為靶點的細(xì)胞模型胰島素信號通路報告基因技術(shù)13整理ppt以鈣通道和KATP通道為靶點的細(xì)胞模型鈣離子信通路膜片鉗系統(tǒng)14整理ppt膜片鉗技術(shù)膜片鉗的原理15整理ppt胰島素抵抗細(xì)胞模型細(xì)胞HepG:肝胚胎瘤細(xì)胞3T3-L1:脂肪纖維細(xì)胞C2C12:成肌細(xì)胞造模處理：高濃度胰島素高糖高脂地塞米松衣霉素棕櫚酸檢測指標(biāo)：細(xì)胞活性葡萄糖消耗量16整理ppt葡萄糖消耗運轉(zhuǎn)細(xì)胞模型培養(yǎng)液：葡萄糖+氚標(biāo)葡萄糖培養(yǎng)液閃儀檢測17整理ppt葡萄糖消耗運轉(zhuǎn)細(xì)胞模型培養(yǎng)液：葡萄糖培養(yǎng)葡萄糖檢測細(xì)胞量檢測18整理ppt葡萄糖氧化酶法己糖激酶法血糖儀檢測連續(xù)式血糖檢測儀無創(chuàng)式血糖監(jiān)測血糖的檢測方法19整理ppt檢測原理葡萄糖氧化酶法20整理ppt己糖激酶法在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷腺苷(ATP)發(fā)生磷酸化反響，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與二磷酸腺苷(ADP)。前者在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP)，同時使氧化型輔酶Ⅰ(NADP)復(fù)原成復(fù)原型輔酶Ⅰ(NADH)。NADH的生成速率與葡萄糖濃度呈正比，NADH在340nm有特異吸收峰，在波長340nm處監(jiān)測吸光度升高速率，計算血清中葡萄糖濃度。21整理ppt血糖儀檢測全自動生化儀22整理ppt血糖儀檢測23整理ppt連續(xù)式血糖檢測儀2021年，美國FDA批準(zhǔn)Senseonics公司的Eversense連續(xù)血糖監(jiān)測〔CGM〕系統(tǒng)用于18歲以上的糖尿病患者。完全植入、可用90天的血糖檢測傳感器的CGM系統(tǒng)。24整理ppt無創(chuàng)式血糖監(jiān)測根據(jù)其工作原理，可分為以下四類：利用皮下間質(zhì)液中的糖分子測試血糖值。皮下間質(zhì)液可以有少量滲出皮膚，無創(chuàng)得到皮下間質(zhì)液樣品，測得血糖值。通過人體對近紅外線、中紅外線或遠(yuǎn)紅外線的頻譜分析，提取血糖值。當(dāng)用紅外線照射人體時，代表血糖特征的反射或吸收紅外線，稱為血糖特征頻譜信號，可用來提取血糖值。測試人體的射頻阻抗，提取血糖值。當(dāng)波長較紅外線更長的電磁波對人體輻射時，像血糖這種非離子可溶性物質(zhì)，將吸收一定的電磁波，提取其吸收特征值，理論上可以得到血糖值。根據(jù)糖尿病人血液中糖化蛋白比例較高這一特征，通過對眼球測試，得到血糖值。25整理ppt糖尿病體內(nèi)研究模型體內(nèi)研究模型正常動物糖尿病模型自發(fā)性糖尿病動物模型實驗性糖尿病動物模型基因工程糖尿病動物模型26整理ppt正常動物糖尿病模型以正常動物為實驗對象，對給藥后動物體內(nèi)葡萄糖的濃度變化進(jìn)行研究的模型。特點：影響因素較少，可直接反響藥物的降糖作用，缺點是非病理模型，不能反映對疾病的治療作用。常用的模型：糖耐量試驗糖鉗試驗27整理ppt實驗動物：大鼠、小鼠糖耐量試驗禁食給藥大、小鼠給葡萄糖

5g/kg眼眶采血頸靜脈采血剪尾采血28整理ppt糖耐量試驗葡萄糖檢測如何判斷抗糖尿病藥物的治療效果？29整理ppt糖耐量試驗CmaxAUC30整理pptAUC的計算梯形法積分法31整理ppt糖耐量試驗32整理ppt糖鉗實驗葡萄糖鉗夾技術(shù)〔Glucoseclamptechnique〕，是一種定量檢測胰島素分泌和胰島素抵抗的方法，被認(rèn)為是現(xiàn)今最新的葡萄糖穩(wěn)態(tài)的測量技術(shù)。葡糖鉗分類高胰島素-正常血糖鉗夾通過外周靜脈灌注，使受試者血清胰島素水平上升并維持在約100muU/ml。給予受試者20%葡萄糖的灌注，且使得血糖濃度維持在正常水平?？梢杂糜谠u估外周組織對胰島素的敏感性。高葡萄糖變量鉗夾通過血糖灌注使受試者血糖水平上升維持在7.0mmol/L。通過檢測保持在高水平血糖情況下葡萄糖的灌注量，從而評價葡萄糖代謝率。可以評價β細(xì)胞對葡萄糖的敏感性。33整理ppt血糖升高時，胰島素分泌增加，并通過增加攝取、存儲和利用葡萄糖等方式，下調(diào)血糖；血糖下降，胰島素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促進(jìn)代謝分解，加速糖原分解和葡萄糖異生作用，升高血糖。技術(shù)原理

1、葡萄糖—胰島素負(fù)反響體系34整理ppt正糖鉗技術(shù)通過同時輸注可控濃度及速率的外源性胰島素和葡萄糖，打破體內(nèi)葡萄糖一胰島素的負(fù)反響調(diào)控，使血漿外源性胰島素維持在較高濃度水平，而血糖維持在根底穩(wěn)態(tài)水平。技術(shù)原理

2、鉗夾技術(shù)原理由于血漿外源性胰島素的優(yōu)勢濃度，抑制了內(nèi)源性葡萄糖〔肝糖分解和糖異生〕和內(nèi)源性胰島素分泌，此時外源性葡蔔糖輸注速率等于外周組織的葡萄糖利用率，從而評價葡萄糖、胰島素以及其他相關(guān)物質(zhì)的代謝過程。35整理ppt1.防止內(nèi)源性胰島素缺乏〔如糖尿病患者〕及低血糖對胰島素敏感性測定的影響。2.將內(nèi)源性干擾減至最小，增加了實驗的可控性與準(zhǔn)確性，降低了結(jié)果的變異性。實驗技術(shù)特點

1.不同受試者的應(yīng)激反響和血管緊張度等諸多因素會對穩(wěn)態(tài)的建立產(chǎn)生一定的影響。2.該技術(shù)復(fù)雜耗時、費用昂貴，實驗中需頻繁取血。優(yōu)點缺點36整理ppt犬禁食12h后，稱重、測血糖。犬糖鉗實驗開通靜脈通道，與三通管相連，一進(jìn)口端輸注胰島素，另一進(jìn)口端輸注10％葡萄糖。分別從靜脈恒速輸注胰島素和10％葡蔔糖溶液。每隔10min取血測定血糖，根據(jù)所測血糖值調(diào)整葡萄糖輸注速率至穩(wěn)態(tài)。37整理ppt犬糖鉗實驗38整理ppt自發(fā)性糖尿病動物模型表現(xiàn)為高血糖、胰島素抵抗動物來源相對較少未經(jīng)任何的人工處理自然狀態(tài)下發(fā)生模型更接近人類糖尿病的自然起病及開展飼養(yǎng)、繁殖條件要求高動物昂貴模型特點模型缺乏自發(fā)性糖尿病小鼠模型是指未經(jīng)任何有意識的人為處置，在自然條件下發(fā)生糖尿病的小鼠模型。39整理ppt自發(fā)性糖尿病動物模型40整理ppt自發(fā)性糖尿病動物模型db/db小鼠美國Jackson實驗室于1966年發(fā)現(xiàn)的位于4號染色體的Leptin受體基因缺陷導(dǎo)致的自發(fā)性2型糖尿病小鼠，從四周齡即出現(xiàn)貪食、肥胖，隨周齡增加而出現(xiàn)明顯的高血糖、高血脂、胰島素抵抗等特征，其發(fā)病過程與2型糖尿病患者非常相似。41整理ppt自發(fā)性糖尿病動物模型ob/ob小鼠帶有ob基因(obese)。為6號染色體隱性基因，純合子導(dǎo)致單純肥胖伴晚期糖尿病。2周齡時肥胖個體外表上有別于正常個體。在8～9月齡時，動物體重增加到最大值，約為70克，多種代謝失調(diào)，包括脂肪形成增加，脂肪分解減少。代謝失調(diào)與過食癥和胰島素分泌過多有關(guān)，動物在6～9周齡時有中度的高血糖，但12～16周后自發(fā)消失。肥胖癥與人類的肥胖癥相似。用于肥胖癥的生化、癥理、激素及藥物治療等的研究。42整理ppt實驗性糖尿病動物模型實驗性糖尿病動物模型是指通過物理、生物、化學(xué)等致病因素人工誘發(fā)出的具有糖尿病特征的動物模型。具有耗時短，方法簡便，易于掌握，重復(fù)性好的特點，短期內(nèi)可誘導(dǎo)出大量模型。43整理ppt實驗性糖尿病動物模型手術(shù)誘導(dǎo)飲食誘導(dǎo)化學(xué)藥物誘導(dǎo)聯(lián)合誘導(dǎo)44整理ppt實驗性糖尿病動物模型-手術(shù)誘導(dǎo)手術(shù)誘導(dǎo)動物：一般選用較大型動物，如犬、家兔，其次大鼠。一般切除90%的胰腺，保存局部胰腺功能。出現(xiàn)多尿、多飲、多食等嚴(yán)重糖尿病病癥。缺點手術(shù)技巧術(shù)后護(hù)理45整理ppt實驗性糖尿病動物模型-飲食誘導(dǎo)飲食誘導(dǎo)動物：大鼠、小鼠。高脂高糖飼料喂養(yǎng)。動物表現(xiàn)為肥胖、糖耐量受損、胰島素抵抗和脂代謝異常。缺點：造模時間長，4-5個月以上，本錢高。普通飼料豬油蔗糖膽固醇+膽酸鹽46整理ppt實驗性糖尿病動物模型-飲食誘導(dǎo)47整理ppt實驗性糖尿病動物模型-化學(xué)藥物誘導(dǎo)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)STZ通過自由基損傷β細(xì)胞，使β細(xì)胞功能受損,胰島素合成減少,引發(fā)糖尿病。四氧嘧啶(alloxan)四氧嘧啶產(chǎn)生超氧自由基而破壞β細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素合成減少，胰島素缺乏。其作用可能與干擾鋅的代謝有關(guān)。48整理ppt實驗性糖尿病動物模型-化學(xué)藥物誘導(dǎo)動物選擇：推薦大鼠170-200g，小鼠17-22g。雄性動物。大鼠推薦用SD，小鼠推薦C57。造模前喂以高脂高糖飼料4-6周，誘發(fā)出胰島素抵抗，再注射小劑量STZ。禁食12h以上〔一般過夜禁食，不禁水〕。禁食的時間越長，STZ對胰島β細(xì)胞的破壞力越明顯。禁食大、小鼠腹腔注射

STZ3天后檢測血糖動物篩選分組給藥實驗49整理ppt實驗性糖尿病動物模型-化學(xué)藥物誘導(dǎo)一般病癥：糖尿病小鼠體重變輕，精神萎靡，反響遲鈍，毛豎無光澤，動作緩慢，弓背捲體，尿量顯著增加。50整理ppt組織病理學(xué)變化正常小鼠：胰島排列呈團(tuán)索狀，邊緣規(guī)那么，數(shù)目多，胰島細(xì)胞無壞死，胰島周圍及胰島內(nèi)無炎細(xì)胞浸潤。糖尿病小鼠：胰島數(shù)目減少，胰島周圍及胰島內(nèi)出現(xiàn)炎癥。實驗性糖尿病動物模型-化學(xué)藥物誘導(dǎo)51整理ppt實驗性糖尿病動物模型-聯(lián)合誘導(dǎo)手術(shù)及藥物聯(lián)合制作糖尿病模型手術(shù)切除實驗動物胰腺鉤突及體尾部，