免疫診斷與免疫治療課件

免疫診斷

Immunodiagnosis

p229-240

免疫診斷與免疫治療1免疫診斷(Immunediagnosis)概念

利用免疫學(xué)原理進(jìn)行臨床疾病的診斷或輔助診斷免疫診斷與免疫治療2

抗原抗體反應(yīng)的特異性

抗原抗體反應(yīng)的可見性一、抗原或抗體的檢測（一）、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)利用已知抗體檢測病人的未知抗原，如HBVsAg利用已知抗原檢測病人的抗體，如抗HIV抗體、抗核抗體等免疫診斷與免疫治療3抗原抗體反應(yīng)的影響因素：親和力（affinity)親合力(avidity）YKeq=104AffinityY106AvidityYYYYY1010Avidity免疫診斷與免疫治療4抗原抗體比例合適溫度酸堿度電解質(zhì)抗原抗體反應(yīng)的影響因素：免疫診斷與免疫治療5（二）、檢測抗原或抗體的方法1.凝集反應(yīng)（agglutination)：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原+相應(yīng)抗體間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原+顆粒載體+相應(yīng)抗體免疫診斷與免疫治療6免疫診斷與免疫治療72.沉淀反應(yīng)(precipitation)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀物單向免疫擴(kuò)散：可用于檢測血清中Ig的含量雙向免疫擴(kuò)散：抗原抗體的定性分析免疫電泳：常用于血清蛋白種類分析免疫比濁：免疫診斷與免疫治療8AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel單向免疫擴(kuò)散免疫診斷與免疫治療9雙向免疫擴(kuò)散免疫診斷與免疫治療10Ag+-AgAb免疫電泳免疫診斷與免疫治療114.用標(biāo)記的抗原或抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)免疫診斷與免疫治療12免疫熒光法：熒光素與抗體連接熒光抗體直接免疫熒光：熒光素標(biāo)記的抗體直接作標(biāo)本染色

間接免疫熒光：一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色免疫診斷與免疫治療13AgYFluorochromeLabeledAbTissueSection直接免疫熒光免疫診斷與免疫治療14AgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb間接免疫熒光免疫診斷與免疫治療15酶免疫測定：酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。它將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。雙抗體夾心法檢測待測抗原間接法檢測待測抗體BAS-ELISA（生物素-親和素系統(tǒng)-ELISA）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT)免疫組化技術(shù)免疫診斷與免疫治療16免疫診斷與免疫治療17免疫診斷與免疫治療18免疫診斷與免疫治療19免疫診斷與免疫治療20二、免疫細(xì)胞的測定分析免疫細(xì)胞的數(shù)量和功能，評(píng)價(jià)病人的免疫功能包括CD分子測定、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、吞噬實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)等免疫診斷與免疫治療21（一）、淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定分離方法：密度梯度離心單個(gè)核細(xì)胞磁珠分離：抗體與磁珠交聯(lián)免疫吸附分離法：將已知抗體包被培養(yǎng)皿，加入淋巴細(xì)胞懸液熒光激活細(xì)胞分選儀分離法（FACS）抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)免疫診斷與免疫治療22磁珠分離法免疫診斷與免疫治療23流式細(xì)胞分選儀（FACS）免疫診斷與免疫治療24RedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityTwoParameterHistogramGreenFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityUnstainedcellsNumberofCells流式細(xì)胞儀免疫診斷與免疫治療25免疫診斷與免疫治療26（二）、免疫細(xì)胞功能測定：T細(xì)胞功能測定B細(xì)胞功能測定吞噬細(xì)胞功能測定免疫診斷與免疫治療27T細(xì)胞功能測定T細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞因子檢測皮膚試驗(yàn)免疫診斷與免疫治療28淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，鏡下觀察3H-TdR摻入法：氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷2.MTT法

3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑免疫診斷與免疫治療29細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞形態(tài)：臺(tái)盼藍(lán)染色51Cr的釋放LDH釋放凋亡細(xì)胞檢測法：細(xì)胞形態(tài)：瓊脂糖電泳FACSTUNEL免疫診斷與免疫治療30免疫診斷與免疫治療31細(xì)胞因子的檢測生物活性檢測法CTLL細(xì)胞株——

IL-2依賴免疫學(xué)檢測：ELISAELISPOT免疫診斷與免疫治療32免疫診斷與免疫治療33免疫診斷與免疫治療34B細(xì)胞功能測定Ig定量：單向瓊脂擴(kuò)散、免疫比濁法、ELISA

B細(xì)胞增殖試驗(yàn)抗體形成細(xì)胞測定：溶血空斑實(shí)驗(yàn)ELISPOT免疫診斷與免疫治療35吞噬細(xì)胞功能測定趨化功能測定（Boyden小室）吞噬功能測定（硝基藍(lán)四氮唑NBT、熒光標(biāo)記的生物顆粒）免疫診斷與免疫治療36三、免疫學(xué)檢測方法的應(yīng)用疾病的診斷：感染性疾病超敏反應(yīng)性疾病自身免疫病免疫缺陷病腫瘤免疫學(xué)監(jiān)測：免疫診斷與免疫治療37

第二十三章

免疫學(xué)防治

Immunoprophylaxisandimmunotherapy

p241-251免疫診斷與免疫治療38

一、免疫預(yù)防疫苗的基本要求:

安全有效實(shí)用自然免疫：機(jī)體感染病原體后建立的特異性免疫，包括胎兒或新生兒經(jīng)胎盤或乳汁從母體獲得抗體。疫苗（vaccine）：一些能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫的人工主動(dòng)免疫制劑如細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素等統(tǒng)稱為疫苗。人工主動(dòng)免疫:

用疫苗接種機(jī)體使之產(chǎn)生特異性免疫,從而預(yù)防感染的措施。人工被動(dòng)免疫：給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。免疫診斷與免疫治療39滅活疫苗：狂犬病、傷寒、流感疫苗減毒活疫苗：脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎疫苗類毒素：細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.3%-0.4%甲醛處理白喉、破傷風(fēng)亞單位疫苗：重組乙型肝炎病毒表面抗原疫苗結(jié)合疫苗：b型流感桿菌疫苗、腦膜炎球菌疫苗、肺炎球菌疫苗DNA疫苗：重組載體疫苗：麻疹、皰疹、腫瘤疫苗、甲乙型肝炎

疫苗的種類免疫診斷與免疫治療40新型疫苗合成肽疫苗：瘧疾疫苗、肝癌疫苗處于臨床試驗(yàn)階段轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤玫闹参锛?xì)胞基因組中，使其在植物的可食用部分穩(wěn)定表達(dá)，通過攝取食物達(dá)到免疫接種的目的。免疫診斷與免疫治療41疫苗的現(xiàn)狀：常規(guī)使用的疫苗的成功率：

脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎疫苗

BCG

百日咳疫苗免疫診斷與免疫治療42許多疾病無有效疫苗：

病毒：HIV，皰疹病毒細(xì)菌：葡萄球菌，A組鏈球菌真菌：假絲酵母原生動(dòng)物：瘧疾，利什曼病

蠕蟲感染：血吸蟲病免疫診斷與免疫治療43人工被動(dòng)免疫:給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑,以治療或緊急預(yù)防感染的措施.

種類：抗毒素免疫球蛋白細(xì)胞因子與單克隆抗體免疫診斷與免疫治療44佐劑（adjuvant)：預(yù)先或與抗原同時(shí)注入體內(nèi)，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的非特異性免疫增強(qiáng)物質(zhì)。增加局部抗原濃度刺激單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)抗原處理和提呈能力刺激淋巴細(xì)胞增殖分化常用佐劑：

氫氧化鋁

ISCOMs（免疫刺激復(fù)合物）

含CpG寡核苷酸細(xì)胞因子免疫診斷與免疫治療45我國計(jì)劃免疫程序疫苗名稱第一次第二次第三次加強(qiáng)預(yù)防傳染病卡介苗出生肺結(jié)核乙肝疫苗出生1月齡6月齡乙型病毒性肝炎脊灰疫苗2月齡3月齡4月齡4周歲脊髓灰質(zhì)炎百白破疫苗3月齡4月齡5月齡18-24月齡，6周歲百日咳白喉破傷風(fēng)麻疹疫苗8月齡麻疹麻腮風(fēng)疫苗18-24月齡風(fēng)疹流行性腮腺炎乙腦疫苗8月齡2周歲流行性乙型腦炎A群流腦疫苗6-18月齡（1、2次間隔3個(gè)月）流行性腦脊膜炎A+C群流腦疫苗3周歲6周歲甲肝疫苗18月齡甲型肝炎以上為兒童免疫規(guī)劃疫苗，以下為重點(diǎn)人群接種疫苗出血熱雙價(jià)純化疫苗出血熱炭疽減毒活疫苗炭疽鉤體滅活疫苗鉤體病免疫診斷與免疫治療46疫苗的應(yīng)用傳染病抗腫瘤計(jì)劃生育免疫診斷與免疫治療47二、免疫治療（Immunotherapy）

利用免疫學(xué)原理，針對(duì)疾病的發(fā)生機(jī)制，人為地調(diào)整機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療疾病目的所采取的措施。

免疫抑制、免疫增強(qiáng)

主動(dòng)或被動(dòng)

特異或非特異

免疫診斷與免疫治療48（一）、分子治療分子疫苗：合成肽疫苗、重組載體疫苗和DNA疫苗抗體3.細(xì)胞因子4.微生物抗原疫苗5.基因治療免疫診斷與免疫治療49

1）多克隆抗體在臨床應(yīng)用的多克隆抗體包括：胎盤球蛋白、丙種球蛋白、破傷風(fēng)抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴細(xì)胞抗血清、抗Rh抗體、抗SARS病毒抗體等2）鼠源單克隆抗體

在臨床應(yīng)用的鼠源單克隆抗體：抗CD3（OKT3）：抗器官移植排斥

抗CD20：治療B細(xì)胞淋巴瘤3）基因工程抗體基因工程抗體已經(jīng)成為治療性抗體的主流產(chǎn)品。包括：嵌合抗體（chimericAb)人源化抗體（humanizedAb）

人抗體

抗體藥物免疫診斷與免疫治療50基因工程抗體

鼠源單克隆抗體治療存在的主要問題是HAMA（Humananti-mouseantibody）反應(yīng)，導(dǎo)致療效下降，副作用增加。免疫診斷與免疫治療51抗細(xì)胞因子及其受體抗體

抗TNF

及其受體的抗體治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗IL-2及其受體治療自身免疫病和抗移植排斥抗VEGF抗體治療腫瘤抗EGFR2、EGFR1抗體治療腫瘤免疫診斷與免疫治療52抗CD分子抗體抗CD20嵌合抗體治療B細(xì)胞淋巴瘤抗CD33治療急性髓性白血病抗CD52治療淋巴瘤抗CD11a治療銀屑病免疫診斷與免疫治療53抗體靶向治療

（Antibody-targetedTherapy）以抗體為載體，攜帶同位素、毒素、藥物等分子，選擇性殺傷靶細(xì)胞的技術(shù)。免疫診斷與免疫治療54I131標(biāo)記抗CD20單抗治療B細(xì)胞淋巴瘤抗癌藥物（calicheamicin）偶聯(lián)的抗CD33治療白血病I131標(biāo)記鼠源抗HAb18（CD147）單抗治療肝癌（四軍醫(yī)大）免疫診斷與免疫治療55抗體藥物的主要問題臨床用量大成本高，價(jià)格昂貴生產(chǎn)工藝復(fù)雜，硬件設(shè)備高投入治療性免疫靶標(biāo)的鑒定有很大難度存在臨床風(fēng)險(xiǎn)免疫診斷與免疫治療56治療性抗體名稱（括號(hào)內(nèi)為商品名）適應(yīng)癥腫瘤抗CD20（Rituxan，Zevalin，Bexxar，Arzerra）

非霍奇金淋巴瘤抗HER2/CD340（Herceptin）

轉(zhuǎn)移性乳腺癌抗CD33（Mylotarg）

急性髓樣細(xì)胞白血病抗CD52（Campath）B細(xì)胞白血病、T細(xì)胞白血病和T細(xì)胞淋巴瘤抗EGFR（Erbitux，Vectibix）

轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌和頭頸部腫瘤抗RANKL（Prolia/Xgeva）預(yù)防已經(jīng)轉(zhuǎn)移并損害骨質(zhì)的腫瘤患者的骨骼相關(guān)事件

急性移植排斥反應(yīng)抗CD3（OrthocloneOKT3）

腎移植后急性排斥反應(yīng)抗CD25（Zanapax，Simulect）

腎移植后急性排斥反應(yīng)自身免疫病和過敏性疾病抗TNFα（Remicade，Humira，Simponi）Crohn病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、強(qiáng)直性脊椎炎抗IgE（Xolair）

持續(xù)性哮喘抗CD（Raptiva）

斑狀牛皮癬抗α4整合素（Tysabri）

多發(fā)性硬化癥抗VEGF（Lucentis）

年齡相關(guān)性黃斑病變抗CD45RO+（Amevive）銀屑病及其他自身免疫紊亂疾病抗TNF（Cimzia）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎抗IL-1β（Ilaris）自身炎癥性疾病抗IL-12/IL-23（Stelara）成年患者中度至嚴(yán)重的斑塊性銀屑病人源型抗C5（Soliris）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥

其他抗gpⅡb/Ⅲa（ReoPro）預(yù)防冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)中發(fā)生血栓抗呼吸道合胞病毒（Synagis）預(yù)防兒童在高危期呼吸道合胞病毒感染抗IgGⅠ（OncoScint）檢測結(jié)直腸腺癌和卵巢上皮細(xì)胞癌，診斷乳房癌、肺小細(xì)胞癌、胰腺癌、胃癌和食管癌抗PSMA（ProstaScint）評(píng)估疑有復(fù)發(fā)的前列腺患者、用于患者的分期抗CEA（CEA-Scan）檢測原發(fā)性、結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移，乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移抗肌凝蛋白單株（Myoscint）心肌梗塞引起的胸痛定位、心肌梗塞和心肌炎的造影抗SCLC抗體片段-NR-LU-10-Fab（Verluma）診斷常規(guī)方法檢查經(jīng)常無效的小細(xì)胞肺癌抗CD15（NeutroSpec）用于闌尾炎疑似患者的鑒別診斷美國FDA已批準(zhǔn)生產(chǎn)和臨床使用的單克隆抗體（截至2011年）免疫診斷與免疫治療57

批準(zhǔn)上市的重組細(xì)胞因子藥物

IFNα

白血病、肝炎、Kaposi肉瘤

IFNγ 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、慢性肉芽腫、生殖器疣

G-CSF

自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的粒細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血

GM-CSF自身骨髓移植、化療導(dǎo)致的血細(xì)胞減少癥、再生障礙性貧血

Epo

慢性腎衰導(dǎo)致貧血、癌癥或癌癥化療導(dǎo)致的貧血、失血后貧血

IL-2 癌癥、免疫缺陷、疫苗佐劑

IFNβ多發(fā)性硬化癥

IL-11放化療所致血小板減少癥

SCF與G-CSF聯(lián)合應(yīng)用與外周血干細(xì)胞移植

PDGF糖尿病導(dǎo)致的皮膚潰瘍

EGF外用藥治療燒傷、潰瘍（僅在中國上市）

bFGF外用藥治療燒傷、外周神經(jīng)炎（僅在中國上市）

TNF

局部灌注治療晚期骨髓瘤（僅在德國上市）

TNF

突變體晚期腫瘤（僅在中國上市）

Tpo治療血小板減少癥（僅在中國上市）重組蛋白質(zhì)藥物免疫診斷與免疫治療58

批準(zhǔn)上市的重組可溶性受體藥物

可溶性TNF受體-Ig（Enbrel）：治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Amgen),2006年銷售額超過45億美元

可溶性CD152-IgCTLA4-Ig）:商品名Abatacept，治療自身免疫?。˙ristol-MyersSquibb）,2005年12月批準(zhǔn)上市免疫診斷與免疫治療59重組蛋白質(zhì)藥物的主要問題半衰期短，需要反復(fù)給藥能夠誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生免疫診斷與免疫治療60基因治療將正常人體基因通過

invivo或exvivo的途徑導(dǎo)入病人體內(nèi)，通過體內(nèi)表達(dá)正常基因治療疾病。免疫診斷與免疫治療61AshantideSilva,wasthefirstpatienttobetreatedwithgenetherapy.重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）的基因治療腺苷脫氨酶（ADA）基因治療(1990)免疫診斷與免疫治療62免疫診斷與免疫治療63

XSCID的IL-2受體鏈基因治療性聯(lián)SCID的發(fā)病是由于IL-2R基因缺陷2000年法國科學(xué)家在Science首次報(bào)道2例成功基因治療的結(jié)果；至2002年法、英、美共治療14例，12例成功。第一例成功接受IL-2R基因治療的男孩RhysEvans免疫診斷與免疫治療64XSCID基因治療原理免疫診斷與免疫治療65基因治療的主要問題病毒載體的安全性靶基因選擇基因?qū)胄驶虻目烧{(diào)控表達(dá)免疫診斷與免疫治療66（二）、免疫細(xì)胞治療將