結(jié)核分枝桿菌及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)

結(jié)核分枝桿菌

及其實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)1整理課件結(jié)核病又稱為癆病和白色瘟疫。公元三世紀(jì)以前，我國(guó)古代醫(yī)學(xué)還只是認(rèn)識(shí)到該病可能是一種極為嚴(yán)重的慢性傳染病，“累年積月，漸就頓滯，以至于死，死后復(fù)轉(zhuǎn)旁人，乃至滅門(mén)〞。以后逐漸認(rèn)識(shí)到這是一種“肺癆〞，其病因?yàn)椤鞍A蟲(chóng)〞所致。后來(lái)，西方的一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)這類病人的肺內(nèi)有一個(gè)個(gè)堅(jiān)實(shí)的團(tuán)塊，摸上去像土豆或花生這類植物的根上塊莖，就將該病稱之為T(mén)uberculosis，即結(jié)節(jié)的意思，這就是結(jié)核病命名的由來(lái)。結(jié)核病2整理課件?紅樓夢(mèng)?：香魂一縷隨風(fēng)散，愁緒??三更入夢(mèng)遙。雖然說(shuō)?紅樓夢(mèng)?與醫(yī)學(xué)無(wú)關(guān)，但其作者筆下的“癆病〞代表林黛玉卻驚動(dòng)全世界。上世紀(jì)50年代，美國(guó)細(xì)菌學(xué)家杜博斯所寫(xiě)的?TheWhitePlague?(白色瘟疫)，就曾提到了林黛玉的肺結(jié)核，可見(jiàn)在當(dāng)時(shí)?紅樓夢(mèng)?中林黛玉的病癥已是結(jié)核病的典型病癥。?黃帝內(nèi)經(jīng)素問(wèn)?：“大骨枯稿，大肉陷下。胸中氣滿，喘息不便，內(nèi)痛引肩項(xiàng)，身熱，脫肉破腘。〞結(jié)核病3整理課件2021年全球結(jié)核病發(fā)病率〔世界衛(wèi)生組織2021年結(jié)核病報(bào)告〕結(jié)核病目前仍然是一個(gè)全球性的嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。結(jié)核病4整理課件流行過(guò)程傳染源

痰涂片陽(yáng)性的肺結(jié)核病人傳播途徑空氣傳播易感人群普遍易感第二節(jié)流行病特征影響流行的因素自然因素季節(jié)、環(huán)境、居室通風(fēng)社會(huì)因素社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、醫(yī)療效勞其他因素HIV-TB，MDR/XDR-TB結(jié)核病5整理課件結(jié)核病防控的三大手段臨床診斷常常結(jié)合痰涂片，胸片，病癥和體征結(jié)核病世界防治結(jié)核病日3月24日6整理課件結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的。。RobertKoch〔1843-1910〕1882年發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌，1905年獲得諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。FriedrichNeelsen(1854-1898)FranzZiehl〔1857-1926〕Ziehl-Neelsen染色法〔分枝桿菌抗酸染色的根底〕結(jié)核分枝桿菌7整理課件結(jié)核分枝桿菌〔一〕生物學(xué)性狀1.形態(tài)與染色細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽(yáng)性8整理課件2.培養(yǎng)與生長(zhǎng)特性特點(diǎn)專性需氧生長(zhǎng)緩慢營(yíng)養(yǎng)要求高，常用羅氏培養(yǎng)基生長(zhǎng)現(xiàn)象液體：外表生長(zhǎng)〔菌膜〕固體：顆粒、結(jié)節(jié)、花菜狀菌落乳白或米黃，不透明3.生化反響不發(fā)酵糖類，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，而熱觸酶試驗(yàn)陰性結(jié)核分枝桿菌整理課件4.抵抗力四不怕枯燥堿性染料青霉素等抗生素對(duì)酸或堿有抵抗力〔3%HCl或6%H2SO4、4%NaOH〕四怕乙醇濕熱紫外線抗癆藥物〔異煙肼、利福平等〕5.變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：

結(jié)核桿菌的L型：顆粒狀、絲狀毒力變異：

卡介苗BCG：Calmette和Guérin牛分枝桿菌13年230次耐藥性變異：耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多結(jié)核分枝桿菌10整理課件致病物質(zhì)〔二〕致病性莢膜與細(xì)胞外表受體結(jié)合〔粘附與入侵作用〕含多種酶〔分解利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)〕保護(hù)〔阻止有害物質(zhì)的進(jìn)入菌體〕脂質(zhì)索狀因子〔破壞細(xì)胞，引起肉芽腫〕磷脂〔形成結(jié)核結(jié)節(jié)〕硫酸腦苷脂〔抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合〕蠟質(zhì)D〔引起遲發(fā)性過(guò)敏反響〕蛋白質(zhì)引起遲發(fā)性過(guò)敏反響感染方式呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入機(jī)體所致疾病結(jié)核病，以肺結(jié)核常見(jiàn)結(jié)核分枝桿菌11整理課件〔三〕免疫性1.機(jī)體抗結(jié)核免疫特點(diǎn)：傳染、免疫、超敏反響共存2.屬于感染免疫(infectionimmunity)，又稱有菌免疫3.細(xì)胞免疫為主，遲發(fā)型超敏反響同時(shí)存在4.郭霍現(xiàn)象:注射結(jié)核桿菌于豚鼠皮下初次注射局部反響小全身擴(kuò)散無(wú)免疫無(wú)超敏反響再次注射局部反響大不擴(kuò)散有免疫有超敏反響5.結(jié)核菌素試驗(yàn)〔OT試驗(yàn)〕：應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來(lái)測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反響〔Ⅳ型變態(tài)反響〕的一種試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌12整理課件標(biāo)本處理：濃縮集菌〔氫氧化鈉處理〕直接鏡檢：抗酸染色別離培養(yǎng)：培養(yǎng)基、時(shí)間〔2~4周后見(jiàn)結(jié)果〕痰液等實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)別離培養(yǎng)〔一〕傳統(tǒng)微生物學(xué)檢查直接涂片13整理課件實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)〔二〕TB-Beads技術(shù)LiuJ,SunZQ,PeiH,etal.Increasedcasefindingoftuberculosisfromsputumandsputumdepositsaftermagneticbeadconcentrationofmycobacteria.JMicrobiolMethods,2021,93(2):144-147.14整理課件〔三〕核酸分子診斷技術(shù)-XpertMTB/RIF和TB-SAT靶基因菌種鑒定16SrRNAIS6110異煙肼katG、inhA、ahpC、oxyR、KasA、ndh利福平rpoB乙胺丁醇embB吡嗪酰胺pncA鏈霉素rpsL、rrs喹諾酮類藥物gyrA、gyrB

ZhangY,etal.Nature,1992,358(6387):591-593.ScorpioA,ZhangY.NatMed,1996,2(6):662-667.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)15整理課件基因水平-PCR技術(shù)1.XpertMTB/RIFIndorsedbyWHOin2021.實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)16整理課件2.TB-SAT技術(shù)SimultaneousAmplificationandTesting〔RNA仁度〕RNA作為臨床分子診斷靶標(biāo)的優(yōu)點(diǎn)RNA拷貝數(shù)≥DNA拷貝數(shù)更具臨床意義生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活潑RNA遠(yuǎn)不如DNA穩(wěn)定病原體死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.較好的愈后指標(biāo)實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)17整理課件恒溫?cái)U(kuò)增-SAT技術(shù)TB-SAT技術(shù)原理實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)18整理課件TB-RNA提取恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)60°C10min42°C5min超聲儀〔300W〕15min痰液預(yù)處理42°C40min50ul稀釋液TB-SAT操作步驟實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)19整理課件培養(yǎng)鑒定結(jié)果+PCR結(jié)果合計(jì)TB-SAT檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性陰性陽(yáng)性2317238陰性12318330合計(jì)243325568敏感度=231/243×100%=95.06%特異性=318/325×100%=97.85%準(zhǔn)確度=(231+318)/568×100%=96.65%恒溫?cái)U(kuò)增-SAT技術(shù)TB-SAT檢測(cè)的敏感度和特異性實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)20整理課件〔四〕蛋白分子診斷技術(shù)-γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子〔IFN-γ〕由于效應(yīng)T細(xì)胞存活時(shí)間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床病癥?；贗GRA原理的產(chǎn)品目前已被美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、法國(guó)、日本等二十余個(gè)國(guó)家寫(xiě)入本國(guó)的結(jié)核診療指南中〔IGRA，interferon-gammareleaseassay〕實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)21整理課件檢測(cè)過(guò)程與結(jié)果判斷陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果空白對(duì)照抗原A抗原B陽(yáng)性對(duì)照（PHA）實(shí)驗(yàn)室診斷新技術(shù)22整理課件美國(guó)FDA認(rèn)證臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)培養(yǎng)確診的結(jié)核病患者樣本183例敏感度95.6%(175/183)306例入伍新兵特異性97.1%(297/306)T.SPOT.TB檢測(cè)的敏感度和特異性國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)T-SPOT.TB確診病例合計(jì)試驗(yàn)組對(duì)照組陽(yáng)性62430654陰性31478509合計(jì)6555081163靈敏度=95.3%；特異性=94.1%；準(zhǔn)確性=94.8