月季的花藥培養(yǎng)

月季的花藥培養(yǎng)1整理ppt花中皇后月季又稱“月月紅〞，自然花期5至11月，開花連續(xù)不斷，通常扦插就可以成活。

2整理ppt1964年，印度科學家在培養(yǎng)茂業(yè)曼陀羅的花藥時，首次獲得了由花藥中的花粉粒發(fā)育而來的單倍體植株。

說明生殖細胞和體細胞一樣，在離體條件下也具有發(fā)育成完整植株的潛能。自20世紀60年代以來，世界上已有250多種高等植物的花藥培養(yǎng)獲得成功。我國已經(jīng)培育成功近50種植物的花粉再生植株，如小麥、玉米、大豆、甘蔗、橡膠等。3整理ppt知識回憶單倍體育種的過程？花藥離體培養(yǎng)〔N〕單倍體植株〔N〕秋水仙素處理，使染色體翻倍植株〔2N〕特點：1明顯縮短育種年限2后代植株都為純合子。正常植株〔2N〕4整理ppt課題背景5整理ppt花絲花藥：囊狀結構，內(nèi)有很多花粉〔一〕被子植物的花粉發(fā)育1雄蕊一、根底知識2花粉的概念:由花粉母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂形成的單倍體的生殖細胞.6整理ppt花粉發(fā)育過程7整理ppt花粉母細胞〔小孢子母細胞〕4個小孢子減數(shù)分裂小孢子四分體1個小孢子〔單細胞花粉?！郴ǚ哿！搽p核〕有絲分裂單核雙核8整理ppt小孢子母細胞花粉母細胞小孢子減數(shù)分裂有絲分裂花粉管細胞核生殖細胞核有分絲裂精子營養(yǎng)細胞生殖細胞〔小孢子四分體時期單核居中期單核靠邊期雙核期〕9整理ppt小孢子母細胞小孢子花粉囊花藥花粉?！搽p核期〕成熟花粉10整理ppt活動1：閱讀“被子植物的花粉發(fā)育〞，答復以下問題：

1．花粉是___倍體的_______細胞.

被子植物的花粉是在

中由

經(jīng)過

分裂形成的。

2．花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時期：

減數(shù)單生殖〔〕分裂〔〕分裂小孢子母細胞〔2n〕〔〕時期〔n〕單核〔〕期〔n〕雙核期〔〕細胞核〔n〕〔〕細胞核〔n〕〔〕細胞〔n〕〔〕細胞〔n〕〔〕個精子(n)單核〔〕期〔n〕〔〕分裂減數(shù)小孢子四分體靠邊有絲居中生殖營養(yǎng)花粉管2生殖有絲花藥花粉母細胞11整理ppt〔二〕產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導生根原因：培養(yǎng)基中的激素種類及濃度配比12整理ppt胚狀體——在組織培養(yǎng)過程中，某些細胞在形態(tài)上轉變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結構，發(fā)育過程亦與合子胚類似；神奇的人工種子13整理ppt:通過胚狀體途徑形成小植株煙草花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育途徑14整理ppt15整理ppt愈傷組織轉接種到再生培養(yǎng)基愈傷組織分化形成再生植株水稻花藥培養(yǎng)愈傷組織發(fā)育途徑局部花藥產(chǎn)生愈傷組織接種在平板上的水稻花藥16整理ppt不同植物的誘導成功率很不相同，就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導成功率也有直接影響。②選擇適宜的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素。因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。①選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關鍵。三、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇：17整理ppt一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的時期為單核靠邊期。選擇單核期以前的花藥接種，質地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時期的選擇④其它時期選擇的缺點18整理ppt為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花，都不宜選作實驗材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒⑤挑選單核期花藥的方法19整理ppt⑦花藥培養(yǎng)時間一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好，可提高花粉的誘導成功率。20整理ppt花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基各成分中植物生長調節(jié)劑的水平和配比起決定作用。⑴誘導愈傷組織或胚狀體產(chǎn)生的培養(yǎng)基：廣泛使用2，4-D、IAA；⑵誘導分化的培養(yǎng)基常除去2，4-D而以IBA代之。

親本植株的生長條件、材料的低溫預處理、接種密度等對誘導成功率都有一定的影響。2、培養(yǎng)基的組成：3、其他因素：21整理ppt為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？討論：22整理ppt〔一〕材料選取2、通過鏡檢來確定是否處于適宜的發(fā)育期。方法：醋酸洋紅法(將染色體染成紅色)

焙花青-鉻礬法(花粉細胞核染成藍黑色)。1、從花藥看：月季的初花期從花粉看：單核期

從花蕾看：完全未開放的

花藥〔載玻片上〕→1%的醋酸洋紅1滴→用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片→鏡檢〔花粉粒的細胞核被染成紅色〕花藥〔在卡諾氏固定液中處理20min〕→取出，置于載玻片上→焙花青－鉻礬溶液染色→蓋上蓋玻片→鏡檢〔花粉粒的細胞核被染成藍黑色〕四、實驗操作23整理ppt〔二〕材料的消毒5、無菌水沖洗3～5次

花藥的外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態(tài)1、花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾外表的水分4、放入質量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2～4分鐘〔質量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液〕24整理ppt在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，否那么接種后容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織。2、接種注意：〔三〕接種和培養(yǎng)25整理ppt①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。長出愈傷組織那么將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，那么一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否那么這些植株將很難分開。26整理ppt在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化〔主要原因是營養(yǎng)細胞核和生殖細胞核融合造成的〕。4、鑒定和篩選27整理ppt四、結果分析與評價1、選材是否恰當

選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關鍵。應學會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。

2、無菌技術是否過關

如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說明某些操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。3、接種是否成功

如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時轉換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。28整理ppt根底知識實驗操作被子植物的花粉發(fā)育花粉其他因素影響因素花粉發(fā)育經(jīng)歷的時期月季的花藥培養(yǎng)材料與培養(yǎng)基材料的選取產(chǎn)生途徑結果分析與評價消毒接種和培養(yǎng)課堂小結29整理ppt植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的比較項目相同點不同點植物組織培養(yǎng)技術離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導出根，然后進行移栽。外植體為體細胞，染色體數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。30整理ppt自主測評7．基因型為AaBb的水稻〔24條染色體〕的花藥通過無菌操作，接入試管后，在一定條件下培養(yǎng)形成試管苗?！?〕愈傷組織是花粉細胞不斷分裂后形成的不規(guī)那么的細胞團，愈傷組織形成中，必須從培養(yǎng)基中獲得、和小分子有機物等營養(yǎng)物質?！?〕要促進花粉細胞分裂生長，培養(yǎng)基中應有和兩種激素。〔3〕愈傷組織分化是指愈傷組織形成芽和根，再由芽發(fā)育成葉和莖。這一過程必須給予光照，其原因是①_________________②?！?〕試管苗的細胞核中含有條脫氧核苷酸鏈?！?〕培育成的試管苗可能出現(xiàn)的基因型有。水無機鹽細胞分裂素試管苗的生長發(fā)育所需營養(yǎng)來自葉綠體利用光能制造的有機物24AB、Ab、aB、ab生長素葉綠素的形成需要光31整理ppt以下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，請據(jù)圖答復有關問題：課堂練習:32整理ppt(1)選用的材料適宜與否是成功誘導出花粉植株的重要因素，一般來說選用期的花粉可提高成功率。選擇花粉時，一般要通過來確定花粉是否處于適宜的發(fā)育期，這時需要對花粉的細胞核進行染色，常用的染色劑是。(2)上圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中。(3)胚狀體與愈傷