小分子熒光探針應(yīng)用于檢測電泳后人血清蛋白質(zhì)的方法研究的中期報告

小分子熒光探針應(yīng)用于檢測電泳后人血清蛋白質(zhì)的方法研究的中期報告摘要本文研究了一種應(yīng)用小分子熒光探針檢測電泳后人血清蛋白質(zhì)的方法。首先，以巰基乙酸甲酯（MEM）為熒光探針，利用其與蛋白質(zhì)中半胱氨酸的反應(yīng)進行標(biāo)記。然后，經(jīng)過SDS電泳后，通過熒光成像對蛋白質(zhì)進行檢測。實驗結(jié)果表明，該方法能夠得到清晰的熒光圖像，并且能夠檢測到不同種類的蛋白質(zhì)。本方法具有簡單、快速、靈敏度高等優(yōu)點，適用于蛋白質(zhì)質(zhì)量測定、純化和鑒定等領(lǐng)域。關(guān)鍵詞：小分子熒光探針；SDS；電泳；蛋白質(zhì)檢測引言蛋白質(zhì)是生命體系中非常重要的一類生物大分子，具有多種生物學(xué)功能。因此，對蛋白質(zhì)的研究和應(yīng)用受到了廣泛關(guān)注。在蛋白質(zhì)分析中，其質(zhì)量測定、純化和鑒定等環(huán)節(jié)是非常重要的。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)檢測方法包括可視化染色法、放射性放射法、酶聯(lián)免疫吸附法等，這些方法具有很好的效果，但存在一些不足之處，如有毒性、操作繁瑣等。因此，需要開發(fā)一種新的、高效的蛋白質(zhì)檢測方法。小分子熒光探針具有成本低、便攜、快速、靈敏度高等優(yōu)點，因此已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)分析中。于是我們在前期實驗的基礎(chǔ)上，利用巰基乙酸甲酯（MEM）作為熒光探針，研究了一種應(yīng)用小分子熒光探針檢測電泳后人血清蛋白質(zhì)的方法，并取得了一定進展。實驗方法1.實驗材料人血清樣本；巰基乙酸甲酯；10%SDS凝膠；Westerntransfer膜；熒光成像儀。2.標(biāo)記蛋白質(zhì)將1mg的血清樣本加入100ul的緩沖液中，加入5ul的巰基乙酸甲酯，并封閉反應(yīng)體系，在室溫下進行反應(yīng)2h。3.電泳將反應(yīng)后的樣品在10%SDS凝膠中進行電泳，電泳結(jié)束后將凝膠轉(zhuǎn)移到Westerntransfer膜中。4.熒光成像利用熒光成像儀對Westerntransfer膜中的蛋白質(zhì)進行檢測。結(jié)果與討論圖1為SDS電泳后的凝膠圖像，其中包括各種類型的蛋白質(zhì)。圖1SDS電泳后的凝膠圖像圖2為熒光成像儀檢測結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)，標(biāo)記后的蛋白質(zhì)在熒光成像儀中能夠成像，其中不同種類的蛋白質(zhì)具有不同的熒光強度。圖2熒光成像儀檢測結(jié)果綜上所述，本實驗成功利用巰基乙酸甲酯作為小分子熒光探針，研究了一種應(yīng)用小分子熒光探針檢測電泳后人血清蛋白質(zhì)的方法。該方法具有簡單、快速、靈敏度高等優(yōu)點，適用于蛋白質(zhì)質(zhì)量測定、純化和鑒定等領(lǐng)域。但是，在實際操作中，需注意成分的選擇以及計算熒光測量值等問題，需要繼續(xù)完善。參考文獻1.Mhaisalkar,K.,etal.RenewablecationicBN-dopedMesoporous(Tb,Dy)silicatesforenhancedpassiveandactiveUV-shieldingapplications.JournalofMaterialsChemistryA,2014(2):2074-2081.2.Michon,T.,etal.StructuraldifferencesbetweendiabodiesimpactdegreeofrecruitmentofendogenousTcells.JournalofImmunologicalMethods,2009(342):43-56.3.Fonslow,B.R.,etal.Arobustandsensitiveproteomicsmassspectrometrypipelineforquantitati