血液病分子病理診斷

血液病分子病理診斷臨床應(yīng)用1編輯ppt多層次檢測(cè)平臺(tái)綜合應(yīng)用

細(xì)胞遺傳學(xué)形態(tài)學(xué)分子生物學(xué)流式細(xì)胞學(xué)

染色體核型分析

熒光原位雜交RT-PCR測(cè)序

多重?zé)晒獬彩絇CR定量PCR直接測(cè)序GeneScan2編輯ppt血液病分子病理檢測(cè)

血液病診斷分型

定量監(jiān)測(cè)MRD

白血病預(yù)后靶向治療

耐藥及疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè)

范可尼貧血嗜血細(xì)胞綜合癥等融合基因檢測(cè)基因突變檢測(cè)血液遺傳病檢測(cè)大多數(shù)情況下，某一患者只有一種融合基因陽(yáng)性3編輯ppt個(gè)案t(15;17)witht(9;22)46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BMmorphology:APLFCM:M3QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+4編輯ppt血液病分子病理檢測(cè)多重巢式RT-PCR

篩查

定性檢測(cè)用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。

熒光定量RT-PCR定量檢測(cè)

內(nèi)參基因c-abl結(jié)果以比值表示，全程動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)融合基因的拷貝數(shù)/內(nèi)參基因c-ablPCR-測(cè)序5編輯ppt篩查每月定量監(jiān)測(cè)3-6月定量監(jiān)測(cè)每月定量監(jiān)測(cè)6編輯pptCMPD-慢性骨髓增殖性疾病

*WilliamV,StefanN.AuniqueactivatingmutationinJAK2(V617F)isattheoriginofpolycythemiaveraandallowsanewclassificationofmyeloproliferativediseases.Hematology.2005,10-13:195-200

CML慢性粒細(xì)胞白血病Ph染色體t(9;22)(q34;q11)ET原發(fā)性血小板增多癥JAK2V617F*PV真性紅細(xì)胞增多癥JAK2V617F*CIMF慢性特發(fā)性骨髓纖維化JAK2V617F*HES特發(fā)性高嗜酸性粒細(xì)胞白血病FIP1L1-PDGFRα4q12缺失CMML慢性粒單核細(xì)胞白血病TEL/PDGFRβ:t(5;12)(q33;p13)7編輯pptCML—BCR/ABL約95%的CML5%的兒童ALL15%-30%的成人ALL8編輯pptCMPD-慢性骨髓增殖性疾病MolecularPathology：themolecularbasisofhumandiseasebyWillamB.Coleman,GregoryJ.TsongalisBCR/ABLJAK2V617FPV(-)65%-97%(+)純合子多見(jiàn)少數(shù)JAK2V617F(-)12Exon突變ET(-)50%(+)CIMF(-)50%(+)JAK2V617F(-)5%MPLW515L/K(+)9編輯pptJAK2V617F纈氨酸苯丙氨酸激活JAK2基因使細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子敏感性增高

PV、ET、CIMF

不是獨(dú)立的診斷指標(biāo)MDS、3%CMML10編輯pptMDS-骨髓增生異常綜合癥FISH內(nèi)參缺失預(yù)后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS轉(zhuǎn)AML的幾率為50%-Yq11好分子方面的理論有限，但發(fā)現(xiàn)有5q31,7q31，20q12的反復(fù)缺失，提示可能這些區(qū)域存在腫瘤抑制基因。11編輯ppt白血病-31種融合基因篩查1.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.MLL/AF95.MLL/ELL6.MLL/ENL7.CBFB/MYH118.BCR/ABL9.MLL/AF1P10.TEL/PDGFR11.MLL/AF1012.DEK/CAN13.MLL/AF1714.SET/CAN15.dupMLL16.PML/RARa17.E2A/PBX118.PLZF/RARa19.E2A/HLF20.NPM/ALK21.SIL/TAL122.NPM/MLF123.TEL/AML124.NPM/RARa25.AML1/ETO26.TEL/ABL27.AML1/MDS128.HOX1129.TLS/ERG30.EVI131.MLL/AF1Q12編輯pptM3:PML-RARA55%L型5%

V型體外對(duì)ATRA的敏感度低40%

S型低分化M3其他融合基因t(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa95%<5%dup(17)(q21.3;q23)STAT5b-RARa13編輯pptAML1/ETO80-90%M2少數(shù)M1/M4/M5CBFβ-MYH11M4Eo化療敏感預(yù)后較好14編輯pptTEL/AML1前B細(xì)胞ALLE2A/PBX15-6%的兒童ALL3%的成人ALL大局部前B細(xì)胞ALL15編輯pptAML患者常見(jiàn)基因突變及其預(yù)后意義同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變可與融合基因或其它基因突變同時(shí)存在；預(yù)后判斷；個(gè)體化用藥基因突變?cè)诩膊￠_展過(guò)程中可能會(huì)變化基因位置發(fā)生率預(yù)后C-KIT4q1220-30%差NPM15q3525-35%好FLT3-ITD13q1220-30%差CEBPA19q13.112.80%好16編輯ppt17編輯pptAML其他突變18編輯ppt淋巴瘤分子檢測(cè)IG重排

Ig受體基因重排MRDTCR重排T細(xì)胞受體基因重排BCL-1/JHt(11;14)(q13;q32)套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）少數(shù)B細(xì)胞增殖性疾病如多發(fā)性骨髓瘤BCL-2/JHt(14;18)70-80%的濾泡性淋巴瘤(FL)，大部分為t(14;18)，30%DLBCL19編輯ppt淋巴瘤-TCR，IG重排IG和TCR基因重排不一定是譜系的標(biāo)志

某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉20編輯ppt多發(fā)性骨髓瘤〔MM〕探針名稱位點(diǎn)異常率意義中位生存期（月）P53缺失17p1310-34%預(yù)后差24.7IGH重排(4;14)(14;16)50-70%預(yù)后差1q21擴(kuò)增1q2135-45%預(yù)后差21.9RB1缺失13q1450%預(yù)后中等42.3D13S319缺失13q1445%預(yù)后中等IGH重排(11;14)50-70%預(yù)后尚可50.521編輯ppt各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期(n=351)24.742.350.5FonsecaR.Blood2003;101:4569-4575.

22編輯ppt各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期（n=159）FonsecaR.Leukemia2006;20,2034-2040.23編輯ppt慢性淋巴細(xì)胞白血病CLL探針名稱位點(diǎn)及讀取異常率意義中位生存期(月)p5317p13缺失7-8%預(yù)后很差

32ATM11q22.3缺失11-18%預(yù)后差

7912cen12p11.1-q11三體16-25%預(yù)后中等

114RB113q14缺失36-64%預(yù)后好133D13S2513q14缺失36-64%預(yù)后好

13324編輯ppt各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組CLL患者生存期（n=325）3279114111133D?hnerH,EnglJMed.2000;43:1910-1916.

25編輯ppt基因檢測(cè)個(gè)體化用藥酪氨酸激酶抑制劑TKIBCR/ABL融合基因FIP1L1/PDGFRa融合基因26編輯ppt基因檢測(cè)個(gè)體化用藥2021NCCN27編輯pptABL激酶突變檢測(cè)ABL激酶區(qū)突變c.763G>A(p.E255K)和c.944C>T(p.T315I)。28編輯pptMRD監(jiān)測(cè)WT1表達(dá)量檢測(cè)*約75%AML患者可檢測(cè)到WT1高水平表達(dá)，WT1是AML患者常用的MRD檢測(cè)標(biāo)志融合基因定量檢測(cè)*CurrentOpinioninOncology2021,22:656–66329編輯pptWT1(Wilm’stumorgene)1.WT1基因在各類型白血病中均能表達(dá)(ALL，AML，CML，MDS).2.表達(dá)水平與白血病的進(jìn)程相關(guān)，可作為化療和骨髓移植后MRD檢測(cè)敏感指標(biāo)。3.鑒別白血病與反響性白細(xì)胞增高。30編輯ppt初診B-ALL;MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)WT1(Wilm’stumorgene)血液學(xué)復(fù)發(fā)FCMMRD+弟供姐異基因造血干細(xì)胞移植+14d白細(xì)胞植活+27d血小板植活31編輯ppt血液遺傳病分子檢測(cè)嗜血細(xì)胞綜合征相關(guān)基因突變PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP

LYST、AP3B1、RAB27A范可尼貧血基因突變FANCA60%、FANCC

15%、FANCG

10%

WASP綜合征純紅再障RPS19先天性角化不良

DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF232編輯ppt嗜血細(xì)胞綜合征Perforin

PRF110q21-10q22細(xì)胞殺傷功能缺陷

33編輯ppt范可尼貧血基因檢測(cè)FANCA16q24.3FANCC9q22.3

Exon1Itron4Exon5Exon6Exon14Q13XIVS4+4A>Tc.637_643delTACCGCCR185XR548XL554P34編輯ppt純紅再障-RPS19基因檢測(cè)RPS1919q13.2hotspotofmissensemutations-codons52and62常染色體1歲

女

Exon4發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變：c.184C>T(p.R62W)，其他外顯子未發(fā)現(xiàn)突變35編輯ppt先天性角化不良DKC1Xq28X-連鎖隱性7歲男

DKC1基因Exon11發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變：c.1058C>T(p.A353V)36編輯ppt

PCR

Secquence送檢標(biāo)本要求標(biāo)本要求EDTA抗凝、快速送達(dá)實(shí)驗(yàn)室EDTA抗凝、DNAorcDNA靈敏度最高大于15-20%分辨率bpbp報(bào)告時(shí)間3-5天5-7天37編輯pptMolecularplatform38編輯ppt