血液分子生物學(xué)造血干細(xì)胞

造血干細(xì)胞

1編輯ppt造血干細(xì)胞

一、造血干細(xì)胞的起源*造血干細(xì)胞〔hemopoieticstemcell,HSC〕是存在于造血組織和血液中的一群原始造血細(xì)胞，它不是組織固定細(xì)胞.*造血干細(xì)胞在人胚胎2周時可出現(xiàn)于卵黃囊.*第4周開始轉(zhuǎn)移至胚肝.*妊娠5個月后，骨髓開始造血.*出生后骨髓成為造血干細(xì)胞的主要來源。*在造血組織中，所占比例甚少，如在小鼠骨髓中105核細(xì)胞中的有10個，在脾中105有核細(xì)胞中只有0.2個.2編輯ppt造血干細(xì)胞的生物學(xué)

一、造血干細(xì)胞的增殖和分化造血干細(xì)胞〔hematopoieticstemcell,HSC〕是各種白細(xì)胞和免疫細(xì)胞的始祖，擔(dān)負(fù)極其重要的生理功能。

具有三個重要特征：①高度自我更新或自我復(fù)制的能力；②多向分化潛能；③絕大多數(shù)可長期維持在非增殖狀態(tài)，這些特征隨著干細(xì)胞的分化逐漸減弱和消逝。3編輯ppt造血干細(xì)胞的生物學(xué)

一、造血干細(xì)胞的增殖和分化HSC的自我更新及分化增殖受眾多的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)，包括干細(xì)胞因子〔SCF〕、血小板生成素〔TPO〕、紅細(xì)胞生成素〔EPO〕、白細(xì)胞介素11〔IL-11〕、粒細(xì)胞集落刺激因子〔G-CSF〕、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子〔GM-CSF〕及趨化因子等多種因子。

4編輯ppt造血干細(xì)胞的特征和識別

造血干細(xì)胞沒有明確的形態(tài)學(xué)特征，形態(tài)上都表現(xiàn)為淋巴樣的單個核母細(xì)胞，這就給干細(xì)胞從形態(tài)的識別和檢測帶來了困難。但從干細(xì)胞的功能及細(xì)胞外表抗原的表達(dá)上那么為造血干細(xì)胞的識別和別離提供了條件。

5編輯ppt造血干細(xì)胞的特征和識別〔一〕功能的角度，可用細(xì)胞培養(yǎng)方法在體外觀察細(xì)胞發(fā)育潛能集落形成單位〔CFU〕

6編輯ppt造血干細(xì)胞的特征和識別X

〔一〕功能的角度，可用細(xì)胞培養(yǎng)方法在體外觀察細(xì)胞發(fā)育的潛能，1、脾集落形成單位〔CFU-S〕

是較早期的造血干細(xì)胞，具有形成紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞或混合多種造血細(xì)胞的多向分化能力。2、髓系多向祖細(xì)胞集落〔CFU-GEMM〕是檢測可以生成紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞的祖細(xì)胞，它具有一定的自我復(fù)制能力，有向不同細(xì)胞學(xué)分化的能力，具有造血干細(xì)胞的局部功能。3、長期培養(yǎng)起始細(xì)胞〔LTC-IC〕，是指那些經(jīng)5-8周培養(yǎng)后仍能生成單向或多向性祖細(xì)胞群的造血細(xì)胞，比較接近多能干細(xì)胞，這種檢測方法是近幾年實(shí)驗(yàn)和臨床研究中國的較多、較可靠的干細(xì)胞檢測方法。上述檢測和實(shí)驗(yàn)的方法都不能直接識別單個干細(xì)胞。

7編輯ppt造血干細(xì)胞的特征和識別

〔二〕細(xì)胞外表抗原表達(dá)及其單克隆抗體1、CD34+細(xì)胞為具有造血重建能力的人造血干細(xì)胞，2、CD34+、Thy－1low、Lin-為造血干細(xì)胞特征，其中Thy為胸腺細(xì)胞外表抗原標(biāo)記，Lin為特定細(xì)胞系的系列標(biāo)記，如果表達(dá)陽性，那么它就成為已分化的細(xì)胞。3、CD34+、CD33-、Lin-、HLA―DR-代表造血干細(xì)胞，其中HLA―DR與細(xì)胞的增殖有關(guān)，而干細(xì)胞常處在非增殖狀態(tài)，因此干細(xì)胞應(yīng)不表達(dá)HLA―DR。8編輯ppt4、CD34+

、Lin-、Sca-1+

、C―Kit+

細(xì)胞屬多能造血干細(xì)胞。5、AC133是一個新的造血干細(xì)胞標(biāo)記，AC133特異在造血干細(xì)胞和早期祖細(xì)胞上表達(dá)，6、近幾年實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)CD34-造血細(xì)胞比CD34+造血細(xì)胞更為原始，它能分化為CD34+細(xì)胞并進(jìn)一步向髓系和淋巴系發(fā)育。

9編輯pptCD34+細(xì)胞選擇法親和柱層析，別離和免疫磁珠法。通過特異性識別、俘獲及洗脫別離得到CD34+細(xì)胞。〔1〕親和柱層析:將預(yù)分選的細(xì)胞與生物素化〔biotinglated〕的抗CD34抗原的單抗一起孵育，然后洗去未結(jié)合的抗體，通過抗生物素蛋白包被的聚丙酰胺柱的親和柱，使CD34+細(xì)胞留滯在柱內(nèi)的聚丙酰胺外表上，再經(jīng)機(jī)械搖動，沖洗出CD34+細(xì)胞。

10編輯ppt〔2〕免疫磁珠別離法CD34單抗標(biāo)記細(xì)胞后，與超順磁性微球連接、通過強(qiáng)磁場中的過濾柱時，陽性細(xì)胞被吸附，陰性細(xì)胞被濾掉。研制出了納米微粒作為固相收集CD34+細(xì)胞。通過將采集物與抗CD34抗原的單抗結(jié)合，細(xì)胞特異地被超順磁鐵－葡聚糖納米〔直徑50nm〕微球結(jié)合，使CD34+細(xì)胞與納米微球形成復(fù)合物，再通過磁鐵誘導(dǎo)的強(qiáng)磁場過濾柱，別離出CD34+細(xì)胞。其CD34+細(xì)胞回收純度＞95％,回收率67%以上。11編輯ppt

造血干細(xì)胞〔HSC〕主要來源于骨髓、成人外周血、臍血臍血來源干細(xì)胞的特點(diǎn)CD34＋細(xì)胞數(shù)低于骨髓，但CD34＋CD38-細(xì)胞數(shù)高于骨髓，且臍血CD34＋CD38-細(xì)胞增殖分化能力高于骨髓，尤其是參加各種細(xì)胞因子后CFU-GEMM〔多向祖細(xì)胞〕、BFU-E〔紅系祖細(xì)胞〕集落數(shù)明顯高于骨髓。淋巴系統(tǒng)抗原表達(dá)弱，淋巴細(xì)胞功能不成熟，這顯示出臍血干細(xì)胞移植(UCBT)后移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率可能較低。研究說明凍存10年的臍血HSC仍具有良好的回收率。12編輯ppt

造血干細(xì)胞的可塑性

造血干細(xì)胞不僅能重建造血細(xì)胞,而且能分化心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞、消化道上皮細(xì)胞、肺上皮細(xì)胞等。

另外：骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在恰當(dāng)?shù)拇碳は履苻D(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、星形細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、心肌細(xì)胞等細(xì)胞。骨髓多能前體細(xì)胞,其表達(dá)胚胎干細(xì)胞的遺傳標(biāo)志,體外培養(yǎng)條件類似于胚胎干細(xì)胞,且能高度擴(kuò)增;在體外它不僅能分化成基質(zhì)細(xì)胞,而且能分化為內(nèi)臟中胚層、神經(jīng)外胚層細(xì)胞和肝細(xì)胞等內(nèi)胚層細(xì)胞。

13編輯ppt

干細(xì)胞的可塑性

對造血系統(tǒng)被破壞的小鼠進(jìn)行肌細(xì)胞移植后,小鼠造血功能恢復(fù),是由于肌肉組織內(nèi)的造血干細(xì)胞的作用引起.■

肝損害的小鼠進(jìn)行骨髓移植后,肝臟再生的原因是骨髓中的卵圓細(xì)胞在肝內(nèi)轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞.14編輯ppt

干細(xì)胞可塑性機(jī)制干細(xì)胞可以經(jīng)歷轉(zhuǎn)分化的過程,細(xì)胞的基因信息可以重組,經(jīng)過基因重組,細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)化為多種不同的細(xì)胞.

如從視網(wǎng)膜神經(jīng)中提取少突膠質(zhì)細(xì)胞,在體外無血清,低密度的培養(yǎng)條件下,獲得神經(jīng)干細(xì)胞的功能和特征.細(xì)胞融合是最近對干細(xì)胞可塑性的又一種解釋.

如將小鼠骨髓干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞,或小鼠神經(jīng)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞共培養(yǎng)后,獲得的融合細(xì)胞表現(xiàn)胚胎干細(xì)胞的功能和特征.

15編輯ppt造血干細(xì)胞移植及在腫瘤治療中的應(yīng)用

HematopoieticStemCellTransplantationinCancerThearpy

造血干細(xì)胞移植〔hematopoieticstemcelltransplantation;HSCT〕的概念

是經(jīng)大劑量放、化療或其他免疫抑制劑進(jìn)行預(yù)處理，去除受者體內(nèi)的病理細(xì)胞〔腫瘤細(xì)胞、異常克隆細(xì)胞、病態(tài)造血細(xì)胞〕或阻斷發(fā)病機(jī)制，然后把異體或自體的造血干細(xì)胞移植到受者體內(nèi)，以重建受者的正常造血及免疫功能，到達(dá)治療疾病目的的治療手段。16編輯ppt造血干細(xì)胞移植概況

自1993年以來，自體外周血干細(xì)胞移植〔autologousperipheralbloodstemcelltransplantation;APBSCT〕的數(shù)量超過了自體骨髓移植〔ABMT〕。近幾年，隨著對臍血研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)人類臍血中含有大量的造血干/祖細(xì)胞，其中淋巴細(xì)胞抗原性弱，功能相對不成熟，移植后發(fā)生急性移植物抗宿主病〔GVHD〕的危險性低等，已成為造血干細(xì)胞移植的又一方法，即臍血干細(xì)胞移植〔cordbloodstemcelltransplantation,CBSCT〕。17編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)

一、移植種類〔一〕根據(jù)造血干細(xì)胞來源分類

1、骨髓移植〔bonemarrowtransplantation,BMT〕.

2、外周血干細(xì)胞〔peripheralbloodstemcelltransplantation,PBSCT〕。

3、臍血干細(xì)胞移植〔cordbloodstemcelltransplantation,CBSCT〕?！捕掣鶕?jù)供者來源不同分類

1、同基因造血干細(xì)胞移植〔syngeneicHSCT,syn–HSCT〕。

2、異基因造血干細(xì)胞移植〔allogeneicHSCT,allo–HSCT〕。

3、自體造血干細(xì)胞移植〔autologousHSCT,AHSCT〕.

18編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔三〕二者結(jié)合分類

1、同基因骨髓移植〔Syn–BMT〕

2、同基因外周血干細(xì)胞移植〔Syn–PBSCT〕

3、異基因骨髓移植〔allo–BMT〕

4、異基因外周血干細(xì)胞移植〔allo–PBSCT〕

5、自體骨髓移植〔ABMT〕

6、自體外周血干細(xì)胞移植〔APBSCT〕

7、臍血干細(xì)胞移植〔CBSCT〕〔四〕根據(jù)預(yù)處理強(qiáng)度分

1、清髓性異基因造血干細(xì)胞移植

2、非清髓性異基因造血干細(xì)胞移植

19編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)二、各類造血干細(xì)胞移植特點(diǎn)〔一〕同基因造血干細(xì)胞移植

1、供者為同卵孿生同胞，不存在HLA〔humanleukocyteantigen〕差異。

2、易于植入，不存在排斥及移植物抗宿主病〔GVHD〕，亦無移植物抗白血病效應(yīng)〔GVL〕。

3、不需進(jìn)行移植細(xì)胞的體外凈化。

4、移植并發(fā)癥較少，平安性高，移植費(fèi)用較低。

5、移植后惡性疾病復(fù)發(fā)率較異基因造血干細(xì)胞移植為高。

6、移植適應(yīng)癥較廣泛。

20編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔二〕異基因造血干細(xì)胞移植

1、需要有HLA相同的同胞或非血緣關(guān)系志愿者作為供者，理論上同胞兄妹間有1/4的時機(jī)相配，非同胞兄妹間約1/10萬-1/20萬。

2、供受者之間存在不同程度的免疫學(xué)差異，移植后可發(fā)生排斥反響及移植抗宿主反響GVHD。

3、供者干細(xì)胞為正常細(xì)胞，移植適應(yīng)癥廣泛。

21編輯ppt4、移植物中無殘留病變細(xì)胞，不需體外凈化，移植后有抗白血病效應(yīng)，因而移植療效確切，腫瘤性疾病的復(fù)發(fā)率低，效果最好。

5、移植相關(guān)并發(fā)癥、死亡率較高，移植費(fèi)用較高。

6、移植成活后，因GVHD的影響，生存質(zhì)量較自體移植差。

22編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔三〕自體造血干細(xì)胞移植AHSCT

1、供者為患者本人，不受供髓來源限制。

2、是否適宜進(jìn)行AHSCT，受患者自身病情限制，移植適應(yīng)癥較窄。

3、因移植物中可能有殘留病變細(xì)胞，移植后病情復(fù)發(fā)率較高。

4、需考慮進(jìn)行體外凈化處理移植物，以改善療效。

5、移植相關(guān)并發(fā)癥、相關(guān)死亡率較低，適宜移植患者的年齡范圍較大，移植費(fèi)用較低。

6、無GVHD，移植成功后生存質(zhì)量較好。23編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔四〕外周血干細(xì)胞移植

1、外周血中造血干細(xì)胞收集比較方便，用血細(xì)胞別離機(jī)進(jìn)行別離、采集，采集方法可重復(fù)，供體無需麻醉，可免于多部位骨髓穿刺的痛苦和不便，供者易于接受。

2、因從外周血進(jìn)行造血干細(xì)胞的采集，對骨髓有浸潤纖維化或接受過骨盆放療的患者仍可施行。

3、正常情況下外周血干細(xì)胞含量很少，需進(jìn)行發(fā)動處理方可有效增加外周血干細(xì)胞含量，以供移植時采集。

24編輯ppt

4、與骨髓相比，外周血中腫瘤細(xì)胞混入可能較少，自體移植后外周血移植復(fù)發(fā)率可能低于自體骨髓移植。

5、外周血干細(xì)胞移植PBSCT后造血功能重建快，免疫功能恢復(fù)早，感染出血并發(fā)癥低且輕，降低了移植相關(guān)死亡率，縮短了住院時間。

6、PBSCT時，因外周血干細(xì)胞中存在大量T淋巴細(xì)胞，可能增加GVHD的發(fā)生率或加重GVHD的程度。

25編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔五〕臍血造血干細(xì)胞移植

1、臍血干細(xì)胞來源廣泛，采集方便，作為造血干細(xì)胞容易獲得，但需凍存保存，保存條件要求高，規(guī)模要求大，需相當(dāng)投資規(guī)模的臍血庫來進(jìn)行保存。

2、臍血淋巴細(xì)胞抗原性弱，免疫功能不成熟，臍血干細(xì)胞移植后GVHD的發(fā)生率及嚴(yán)重程度較低。因此，對HLA配型的要求和嚴(yán)格程度低于骨髓移植。

3、造血重建較慢。

4、單份臍血量較少〔約50-150ml〕，造血干細(xì)胞數(shù)量有限，目前臨床上主要用于兒童或低體重成年人，大體重成年人的廣泛應(yīng)用仍在探索中。

26編輯ppt造血干細(xì)胞移植種類及特點(diǎn)〔六〕非清髓性異基因造血干細(xì)胞移植〔nonmyeloablativeallogeneicstemcelltransplantation〕

1、處理〔放/化療〕劑量低。

2、預(yù)處理減弱同時加強(qiáng)免疫抑制用藥。

3、移植后造血常呈供受者兩種血細(xì)胞的混合嵌合狀態(tài)。

27編輯ppt造血干細(xì)胞移植的適應(yīng)癥X一、異基因造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥〔一〕腫瘤性疾病

1、急性白血病為allo-HSCT的主要適應(yīng)癥，移植時機(jī)以在初次完全緩解期進(jìn)行，效果為好，但兒童ALL標(biāo)危型和AMLM3型可能通過化療獲得良好的效果，一般主張?jiān)诘诙尉徑饣蛟缙趶?fù)發(fā)的時候進(jìn)行。

2、慢性粒細(xì)胞性白血病allo-HSCT是目前可以根治CML的惟一手段，年齡越輕，療效越好，對45歲以下患者應(yīng)盡早做，確診后17個月內(nèi)行HSCT，效果優(yōu)于17個月后行HSCT。加速期或急變期的療效差，成功率低。

28編輯ppt異基因造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥X〔一〕腫瘤性疾病3、骨髓增生異常綜合征主要用于幼稚細(xì)胞比例較高或有復(fù)雜染色體異位的患者。allo-HSCT治療可使患者3年無病生存率接近50%，相當(dāng)一局部可獲根治，尤其年輕患者，早期移植者療效佳。

4、惡性淋巴瘤對高危型、難治性、多發(fā)性或骨髓被累及者宜行allo-HSCT。

5、多發(fā)性骨髓瘤早期治療效果優(yōu)于晚期治療，allo-HSCT不能使MM患者已發(fā)生的骨質(zhì)損害恢復(fù)正常。

6、實(shí)體瘤：乳腺癌、卵巢癌、小細(xì)胞肺癌等。29編輯ppt異基因造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥X〔二〕非腫瘤性疾病

1、重癥再生障礙性貧血為非腫瘤性疾病中接受BMT最多的疾病，未輸血前行allo-HSCT治療效果明顯好于輸血后行allo-HSCT。

2、免疫缺陷病包括重癥聯(lián)合免疫缺陷病〔遺傳性〕、自體免疫性疾病。

3、遺傳代謝病包括范可尼綜合征、高雪病、尼曼–匹克病。

4、珠蛋白生成障礙性貧血allo-HSCT可使患者無病長期存活率達(dá)70%~90%，對無脾大或門脈纖維化的患者，效果尤佳。但是本病為慢性疾病，對癥治療可使患者生存相當(dāng)長的時間，allo-HSCT有一定的近期病死率及遠(yuǎn)期并發(fā)癥，是否做移植要權(quán)衡利弊。

5、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、急性放射病等。

30編輯ppt自體造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥

X〔一〕惡性血液病

1、急性白血病，一般應(yīng)在初次完全緩解后并進(jìn)行3~4個療程穩(wěn)固化療后進(jìn)行。

2、慢性粒細(xì)胞白血病，AHSCT對慢性粒細(xì)胞性白血病的療效差，很難消除Ph1染色體陽性克隆，復(fù)發(fā)率高，一般不主張做。有學(xué)者研究用經(jīng)過補(bǔ)體長期培養(yǎng)及分選技術(shù)分選出的ph1〔‐〕細(xì)胞做AHSCT，似有開展前景。

3、霍奇金病，對經(jīng)過3~4個常規(guī)療程化療仍未能獲得CR患者或取得CR后復(fù)發(fā)者宜進(jìn)行AHSCT。

4、非霍奇金淋巴瘤〔NHL〕，低惡度NHL病情急變者，中高惡度NHL，首次治療達(dá)CR后穩(wěn)固強(qiáng)化治療或僅達(dá)局部緩解〔PR〕者及常規(guī)化療取得CR后又復(fù)發(fā)的患者均是AHSCT的適應(yīng)癥。

惡性淋巴瘤是AHSCT的最好適應(yīng)癥，是AHSCT做得最多的病例。

31編輯ppt自體造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥X

〔一〕惡性血液病

5、多發(fā)性骨髓瘤〔MM〕，由于MM患者年齡多偏大，常規(guī)治療MM有效率較低，因此MM成為AHSCT較好的適應(yīng)癥。

6、慢性淋巴細(xì)胞白血癥〔CLL〕，對于常規(guī)治療效果不佳的進(jìn)展性的CLL，AHSCT是其有效的選擇。

7、原發(fā)性巨球蛋白血癥〔WM〕，對于常規(guī)化療效果不佳的難治性或進(jìn)展性的WM，AHSCT可能有很好的效果?！参覀兊?例難治性、進(jìn)展期WM，常規(guī)治療無效時行APBSCT，4年后仍處于CR中?！?/p>

32編輯ppt自體造血干細(xì)胞移植適應(yīng)癥X〔二〕實(shí)體瘤

1、乳腺癌：AHSCT對轉(zhuǎn)移性或難治局灶性乳腺癌顯示了較好的療效，乳腺癌是目前AHSCT最多的疾病之一。

初治的Ⅲ、Ⅳ期及炎性乳腺癌在常規(guī)誘導(dǎo)化療達(dá)CR或PR者，復(fù)發(fā)乳腺癌對常規(guī)誘導(dǎo)化療方案敏感者，Ⅱ期病人腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6個以上及有其他不良預(yù)后因素者。

2、卵巢癌，AHSCT治療卵巢癌是一種可望延生其生存期的有效治療手段。用于手術(shù)及化療失敗、復(fù)發(fā)或難治的患者。

3、小細(xì)胞肺癌：小細(xì)胞肺癌惡性程度高，易早期發(fā)生血性轉(zhuǎn)移，是肺癌癥開展最迅猛的一種，對放化療高度敏感。AHSCT可以提高有效率和生存率。

4、其他：神經(jīng)母細(xì)胞瘤、Ewing肉瘤、惡性黑色素瘤等。〔三〕非惡性疾病

自體免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、原發(fā)性血小板減少性紫癜、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥等都有移植有效的報道。

33編輯ppt造血干細(xì)胞移植相關(guān)技術(shù)一、造血干細(xì)胞采集目前用于移植的造血干細(xì)胞主要來源于骨髓、外周血和臍帶血。不同來源的造血干細(xì)胞其采集方式不同。

34編輯ppt骨髓的采集1、骨髓采集的條件〔1〕自體：①前提：血液系統(tǒng)惡性疾患已取得完全緩解或?qū)嶓w瘤尚未累及骨髓；

②身體條件適宜做自身造血干細(xì)胞移植，有移植適應(yīng)癥，無移植禁忌癥；③麻醉危險相關(guān)的檢查，無麻醉禁〔2〕異體：①年齡：親屬供者年齡一般8-55歲；②身體條件：身體健康，無急、慢性傳染性疾病，無特殊家族史及遺傳病史，HLA配型適合；③知情同意。

35編輯ppt骨髓的采集2、骨髓采集的準(zhǔn)備

〔1〕術(shù)前體檢，了解自體或異體供者的身體狀況，進(jìn)行術(shù)前評估，確無禁忌方可采髓。

〔2〕自體循環(huán)備血，移植時所采集的骨髓是骨髓液與血液的混合液。采髓過程中根據(jù)采髓量的多少會有明顯的失血。因此必須進(jìn)行采髓前自體循環(huán)采血備血，以備采髓時回輸補(bǔ)充血容量。

36編輯ppt骨髓的采集3、骨髓采集方法骨髓的采集必須在潔凈手術(shù)室內(nèi)進(jìn)行，整個過程應(yīng)保持無菌。麻醉由麻醉師主持與操作，采用硬膜外麻醉。在髂后及髂前上棘行多點(diǎn)穿刺抽吸，每個點(diǎn)在多方向、多層次上進(jìn)行抽吸，每次抽取4~6ml骨髓液。采集的骨髓予含有肝素的滅菌MPI1640或TC199保養(yǎng)液進(jìn)行抗凝保養(yǎng)，每100ml保養(yǎng)液加肝素4000單位，慶大霉素2000單位，1ml保養(yǎng)液可抗凝3~8ml骨髓液。37編輯ppt骨髓的采集每次采集的骨髓量根據(jù)具體情況不同而不同，自體骨髓采集細(xì)胞數(shù)為有核細(xì)胞數(shù)1×108/kg體重，假設(shè)采出的骨髓要進(jìn)行體外凈化處理，那么需3×108/kg體重以上。異體骨髓采集細(xì)胞數(shù)為有核細(xì)胞數(shù)達(dá)3×108/kg體重。采出的骨髓液中含有骨髓小粒須經(jīng)100目金屬網(wǎng)過濾，最后裝袋，做好標(biāo)記，保持無菌?；颊咴陂_始采髓時即給予輸血，在采髓的整個過程中應(yīng)注意輸血及靜脈足量輸液，予生理鹽水和膠體溶液交替輸入。采髓結(jié)束后，采髓局部應(yīng)嚴(yán)密消毒，無菌紗布加壓包扎，壓迫止血?；颊呋夭》亢竺芮杏^察術(shù)后反響，連續(xù)給予抗生素3天預(yù)防感染。38編輯ppt4、骨髓采集并發(fā)癥

骨髓采集根本是平安的，術(shù)后反響以局部疼痛最常見，少數(shù)患者可發(fā)熱，偶有與麻醉有關(guān)的嚴(yán)重并發(fā)癥〔術(shù)后肺炎、心律不齊〕或局部感染。

39編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集

1、外周血干細(xì)胞的發(fā)動正常狀態(tài)下，外周血中的干/祖細(xì)胞含量較低，占單個核細(xì)胞的0.01%~0.1%。在化療后骨髓抑制的恢復(fù)早期，細(xì)胞因子的作用下可有大量的干/祖細(xì)胞由骨髓進(jìn)入到外周血，使外周血在短期內(nèi)存在有大量的干/祖細(xì)胞。此時采集可得到供造血干細(xì)胞移植用的足量的造血干/祖細(xì)胞。

40編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集發(fā)動方法

外周血干細(xì)胞發(fā)動的方式有三種，即大劑量化療，單用造血生長因子，化療加造血生長因子。①單用造血生長因子：a、G-CSF：5~10ug/kg.d皮下注射，5~7天。一般大多數(shù)供者在G-CSF5ug/kg.d×5天情況下，可使外周血細(xì)胞數(shù)量明顯增加有足夠的干/祖細(xì)胞供移植時采集，且有量效關(guān)系；b、GM-CSF：5~10ug/kg.d皮下注射7~10天。GM-CSF較G-SF的發(fā)動作用稍差，付作用較G-CSF大；c、G-CSF+GM-CSF與單用G-CSF相比無明顯優(yōu)點(diǎn)。

41編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集②單純使用化療發(fā)動：a、大劑量環(huán)磷酰胺：大劑量環(huán)磷酰胺是大劑量單一藥物進(jìn)行發(fā)動的代表。4~7g/m2的劑量被廣泛認(rèn)可而采用b、大劑量足葉乙甙〔VP16〕及馬法蘭也是單一藥物發(fā)動中報道較多的藥，VP16可用至2g/m2，馬法蘭可用至140mg/m2；c、聯(lián)合化療的發(fā)動：很多的資料顯示聯(lián)合化療作為發(fā)動外周血干細(xì)胞的方法是確切可行的，只要化療強(qiáng)度足夠能到達(dá)骨髓的抑制，就可能成功的發(fā)動外周血干細(xì)胞。發(fā)動方案因疾病的不同可為不同的聯(lián)合化療方案。

42編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集③化療加G-CSF聯(lián)合發(fā)動：化療加G-CSF聯(lián)合發(fā)動外周血干細(xì)胞已是較為成熟的發(fā)動方法，有很多的應(yīng)用報道。本發(fā)動方法較單用化療或G-CSF效果更好，且兼顧了原發(fā)病的治療。43編輯ppt外周血干細(xì)胞PBSC的發(fā)動與采集〔2〕影響PBSC發(fā)動效果的因素①年齡：在同樣發(fā)動方案及藥物劑量下，發(fā)動效果與年齡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。②發(fā)動方法：化療加G-CSF的發(fā)動效果較單純化療或G-CSF發(fā)動效果好。③藥物劑量：化療的劑量、骨髓抑制的程度和白細(xì)胞恢復(fù)的速度均與發(fā)動效果呈正相關(guān)關(guān)系。G-CSF、GM-CSF的劑量與發(fā)動效果亦呈正相關(guān)關(guān)系。④發(fā)動前的治療情況：發(fā)動前化療次數(shù)過多、強(qiáng)度過強(qiáng)，距前一次化療時間過近，均可影響發(fā)動效果。既往化療中使用了包括卡氮芥和馬法蘭在內(nèi)的烷化劑類藥物，且劑量過強(qiáng)易使造血干細(xì)胞嚴(yán)重受損而影響發(fā)動效果。

44編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集〔3〕外周血干細(xì)胞發(fā)動的并發(fā)癥及副反響①含有化療發(fā)動方案的發(fā)動因在用藥后多有白細(xì)胞和血小板的明顯減少，故感染和出血為其主要的并發(fā)癥。②含有造血生長因子發(fā)動方案的發(fā)動?？砂l(fā)生骨痛，以腰骶部和骨盆部的酸、脹、痛為突出，嚴(yán)重時呈全身骨痛，尤以健康供者表現(xiàn)突出。還可有胸膜滲出物，血管神經(jīng)水腫和發(fā)熱。使用GM-CSF時，常有發(fā)熱及流感樣病癥，這些副反響均隨著藥物的停用而很快消失。無遠(yuǎn)期不良反響。

45編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集〔4〕外周血干細(xì)胞的采集時機(jī)①異體造血干細(xì)胞移植的發(fā)動以單純細(xì)胞生長因子進(jìn)行,多在第5、6天時CD34+細(xì)胞達(dá)峰值，因而多在發(fā)動第5、第6天時采集。②自體造血干細(xì)胞移植的發(fā)動以化療加細(xì)胞生長因子發(fā)動為主，CD34+細(xì)胞峰值在白細(xì)胞快速上升時達(dá)峰值，最正確時機(jī)是白細(xì)胞快速上升至5×109/L左右時。③動態(tài)監(jiān)測CD34+細(xì)胞比值的變化，以CD34+細(xì)胞值作采集標(biāo)準(zhǔn)，不管異體外周血干細(xì)胞移植還是自體外周血干細(xì)胞移植，一旦CD34+細(xì)胞>1%即可采集。

46編輯ppt外周血干細(xì)胞的發(fā)動與采集X〔5〕外周血干細(xì)胞的采集方法①設(shè)備：采集外周血干細(xì)胞用血細(xì)胞別離機(jī)②采集：用血細(xì)胞別離機(jī)對血液進(jìn)行大量的體外循環(huán)處理，血流速度為30~80ml/分，一般處理3倍以上人體血容量〔約12L〕，絕大局部可在一次采夠移植所需細(xì)胞數(shù)。一次采不夠可以在第2天重復(fù)進(jìn)行，假設(shè)2次仍采不夠可進(jìn)行3次。③外周血干細(xì)胞采集量：a、異體外周血干細(xì)胞，單個核細(xì)胞數(shù)為5~8×108/kg體重，CD34+細(xì)胞數(shù)為2~5×106/kg體重，CFU-GM數(shù)為2~5×105/kg體重；b、自體外周血干細(xì)胞：單個核細(xì)胞數(shù)為2~5×108/kg體重，CD34+細(xì)胞數(shù)為>2×106/kg體重，CFU-GM數(shù)為>2×105/kg體重。④影響外周血干細(xì)胞采集的因素：a、發(fā)動效果不佳；b、采集時機(jī)不當(dāng)；c、采血通路與返血通路不通暢；d、體外循環(huán)血量缺乏。

47編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸

〔一〕造血干細(xì)胞的保存造血干細(xì)胞保存是造血干細(xì)胞治療技術(shù)的重要組成局部，現(xiàn)己廣泛用于臨床。主要用于自體造血干細(xì)胞移植，臍血干細(xì)胞的保存及移植，基因治療、免疫治療等方面。造血干細(xì)胞的保存分為(1)非冷凍保存(2)冷凍保存

48編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸

1、非冷凍保存〔1〕保存方法非冷凍保存最主要的保存方式是4℃冰箱保存。將經(jīng)肝素抗凝采集的，含有1/3組織培養(yǎng)液MPI1640或TC199保養(yǎng)液的骨髓或細(xì)胞濃度為5×107/ml以下。細(xì)胞在4℃保存不同時間后細(xì)胞回收率結(jié)果在各個實(shí)驗(yàn)室有差異。但總的情況是：細(xì)胞在4℃保存24h其細(xì)胞數(shù)及活率根本是穩(wěn)定的，保存3-4天后一般下降為原來的50-80%。目前在臨床應(yīng)用4℃保存的造血干細(xì)胞進(jìn)行造血干細(xì)胞移植時，一般均選擇在72h以內(nèi)回輸。實(shí)踐證明，4℃保存72h內(nèi)的造血干細(xì)胞進(jìn)行自體移植，移植后病人造血均能順利重建。

49編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸

1、非冷凍保存〔2〕保存特點(diǎn)1、不需要特殊設(shè)備，簡便易行，在基層醫(yī)院均可進(jìn)行。2、細(xì)胞不經(jīng)冷凍過程，無冷凍損傷，回輸后造血恢復(fù)快。3、細(xì)胞液中不含冷凍保存液，回輸時無相關(guān)副作用。4、保存時間短，應(yīng)用受限，僅適用于預(yù)處理方案時間短的造血干細(xì)胞移植情況。50編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸

2、冷凍保存冷凍保存即零下溫度保存，是將造血干細(xì)胞降溫到零下某一溫度，使細(xì)胞代謝停止后保存于零下溫度.這是造血干細(xì)胞平安可靠的保存方式，可使造血干細(xì)胞長久保存。目前廣泛使用的方法有三種。

51編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸

〔1〕程控降溫凍存：造血干細(xì)胞〔骨髓需先進(jìn)行冷凍前的別離、濃縮處理〕在自體血漿或血漿蛋白濃度為5%保護(hù)液中，細(xì)胞終濃度在3×107~8×108/ml之間，然后緩慢參加冷凍保護(hù)劑二甲基亞砜〔DMSO〕，終濃度為10%，分裝于冷藏袋內(nèi)。在程控降溫儀內(nèi)以每分鐘1℃~2℃的降溫速度進(jìn)行降溫處理，當(dāng)被凍存細(xì)胞降溫到-50℃時，那么以每分鐘下降5℃的速度繼續(xù)降溫，當(dāng)凍存細(xì)胞溫度達(dá)-80℃后，即放入液氮中〔-196℃〕長期保存。程控降溫冷凍是最平安可靠的造血干細(xì)胞長期保存方法。但所需設(shè)備價格昂貴，冷凍耗時過長。

52編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸〔2〕非程控降溫冷凍保存造血干細(xì)胞不通過程控降溫直接冷凍保存于-80℃冰箱的方法，稱為非程控降溫冷凍保存。該方法是將造血干細(xì)胞〔別離、濃縮的骨髓、臍血或外周血干細(xì)胞〕用5%的DMSO+6%羥乙基淀粉〔HES〕+4%人血清蛋白做為保護(hù)劑，調(diào)整細(xì)胞終濃度1~4×108/ml分裝于冷藏袋內(nèi)，直接放入-80℃冰箱里冷凍保存。這種方法是較簡單可靠的方法，且易進(jìn)行重復(fù)操作。但凍存時間不如程控降溫冷凍保存時間長。

53編輯ppt造血干細(xì)胞保存和回輸〔二〕冷凍造血干細(xì)胞的解凍和回輸解凍是低溫保存造血干細(xì)胞的最后步驟，此過程易引起細(xì)胞腫脹、破裂死亡。合理的解凍方法是快速復(fù)溫解凍，快速復(fù)溫可縮短細(xì)胞解凍腫脹過程，并可防止重結(jié)晶現(xiàn)象的發(fā)生，盡可能的減少此過程中的細(xì)胞破壞。解凍方法一般是采用37℃~42℃水浴解凍熔化細(xì)胞。解凍熔化的細(xì)胞須在10分鐘之內(nèi)回輸，在回輸解凍的細(xì)胞時，要注意DMSO所致的不良反響，如：頭痛、惡心、嘔吐、血尿、低血壓等。輸注前患者要抗過敏、抗休克等預(yù)防處理。

54編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化

〔一〕體外凈化的方法1、物理學(xué)方法：①細(xì)胞密度梯度法；②細(xì)胞電泳法；③細(xì)胞滲透性休克法；④細(xì)胞冷凍法；⑤高熱殺傷法；⑥光敏法55編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化〔一〕體外凈化的方法2、藥理學(xué)方法：①環(huán)磷酰胺衍生物：A、4-HC〔4-羥環(huán)磷酰胺的類似物〕；B、ASTA-Z〔mafosfamide〕；②VP-16〔足葉乙甙〕；③博萊霉素；④長春新堿；⑤高三尖杉酯堿；⑥烷基溶磷脂〔ALP〕；⑦阿糖鳥嘌呤〔Ara-G〕

56編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化〔一〕體外凈化的方法3、免疫學(xué)方法：①單克隆抗體+補(bǔ)體；②免疫膠體鈷法；③免疫毒素法；④抗體軛化療藥物；⑤抗體軛放射核素；⑥LAK細(xì)胞法；⑦免疫吸附法；⑧免疫磁珠法；⑨補(bǔ)體溶解法；⑩流式激活細(xì)胞分選法

57編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化〔一〕體外凈化的方法4、生物學(xué)方法；①長期液體培養(yǎng)法；②胎肝低分子抑瘤物5、分子生物學(xué)方法：①反義寡核苷酸法；②自殺基因轉(zhuǎn)染法

58編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化〔二〕負(fù)凈化與正凈化及特點(diǎn)負(fù)凈化〔陰性選擇〕即用不同的方法去除造血干細(xì)胞中所含腫瘤細(xì)胞而保存正常的造血細(xì)胞的方法。這種方法的特點(diǎn)是：①特異性較差，對正常造血細(xì)胞的損傷較明顯；②移植后造血和免疫功能的重建較慢，并發(fā)癥發(fā)生時機(jī)增加；③凈化效應(yīng)有限，移植后的復(fù)發(fā)率較高；④局部方法簡便、易操作，無需特殊設(shè)備。59編輯ppt正凈化〔陽性選擇〕即利用正常造血干/祖細(xì)胞與許多腫瘤細(xì)胞表達(dá)CD34+抗原的差異，將CD34+的正常造血細(xì)胞從造血移植物中別離出來的方法。這種方法的特點(diǎn)是：①防止了細(xì)胞毒性藥物和免疫毒素凈化時可能對正常造血干細(xì)胞的損傷；②無需進(jìn)行抗腫瘤抗體凈化的多環(huán)節(jié)體外處理，減少污染時機(jī)；③不會因腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞毒性藥物和免疫毒素的敏感性差異而影響凈化效應(yīng)；④移植后造血和免疫功能恢復(fù)較快；⑤凈化效應(yīng)較好，移植后復(fù)發(fā)率有所改善。

60編輯ppt造血干細(xì)胞移植的預(yù)處理

預(yù)處理是在回輸造血干細(xì)胞前對患者進(jìn)行的一個療程大劑量化療和/或大劑量放療。其目的和意義主要在于：①去除體內(nèi)的惡性細(xì)胞或骨髓中的異常細(xì)胞群，以到達(dá)治療疾病的目的；②為移植的造血干細(xì)胞準(zhǔn)備空間，以利移植的造血干細(xì)胞定植；③抑制或摧毀受者的免疫細(xì)胞和功能，使造血干細(xì)胞不被排斥，容易植活。

61編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化X〔一〕預(yù)處理方案的構(gòu)成原那么1、常用預(yù)處理藥物及措施的作用特點(diǎn)〔1〕以免疫抑制作用為主者：ATG、全身淋巴組織照射〔TLI〕?！?〕以抗腫瘤作用為主者：馬利蘭〔Bu〕，以抗髓系白血病為主，阿糖胞苷〔Ara-C〕，以抗白血病，尤其是急性髓系白血病為主，足葉乙甙〔VP16〕抗淋巴瘤、實(shí)體瘤、急性白血病，順鉑〔CDDP〕以抗實(shí)體瘤為主，噻替哌，抗實(shí)體瘤為主。〔3〕具有雙重作用者：環(huán)磷酰胺〔CY〕、卡氮芥〔BCNU〕、環(huán)己亞硝脲〔CCNU〕、馬法蘭〔Mel〕，全身照射。

62編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化X〔一〕預(yù)處理方案的構(gòu)成原那么2、常用預(yù)處理藥物的最大耐受量①CY：移植時最大耐受量200mg/kg，限制性的髓外毒性為心臟損害及出血性膀胱炎。②Bu：移植時的最大劑量為16mg/kg，限制性髓外毒性為粘膜炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性。③Ara-C：移植時最大劑量為36g/m2，限制性髓外毒性為中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性及肺、胃腸道毒性。④Mel：移植時最大劑量為225mg/m2，髓外限制性毒性為胃腸、肝臟。63編輯ppt造血干細(xì)胞的凈化X〔一〕預(yù)處理方案的構(gòu)成原那么2、常用預(yù)處理藥物的最大耐受量⑤BCNU：移植時最大劑量為1200m