醫(yī)學(xué)免疫學(xué)免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)檢測技術(shù)Immunodiagnosis1編輯ppt第一節(jié)抗原或抗體檢測I.Detectionofantigensorantibodies2編輯ppt一、抗原-抗體反響的特點(diǎn)Specificity〔一〕高度特異性

Cross-reaction:commonantigen交叉反響：共同抗原Antiserumabsorption抗血清吸收1stantibody&2ndantibody一抗；二抗3編輯pptReversibility/invertibility:〔二〕可逆性non-covalent,surface-binding,dissociable非共價、外表結(jié)合，可解離complementarycapacity:affinity;avidity互補(bǔ)程度：親和力；親合力4編輯pptVisibility〔三〕可見性的條件Compatibleconcentrationsofantigenandantibodycombinedinproportionatornearequivalence[Antigen:multivalent;Antibody(IgG):divalent]比例適合：抗原多價，抗體2價。交織成網(wǎng)。Phvalue;Temperature;Ionicconcentration條件適宜：酸堿度、溫度、離子濃度Adequateconcentration,bindingstrength;reactiontime足夠濃度、結(jié)合強(qiáng)度和反響時間5編輯pptProzonephenomenon

前帶現(xiàn)象6編輯ppt二、抗原-抗體反響的應(yīng)用Terms術(shù)語Serologicalreaction血清學(xué)反響Qualitativeanalysis定性Quantitation定量Orientation定位Titration滴定Titer效價/滴度7編輯ppt三、常用的抗原-抗體反響技術(shù)經(jīng)典技術(shù)中和反響補(bǔ)體結(jié)合反響凝集反響沉淀反響8編輯pptI)Agglutination〔一〕凝集反響：顆粒性抗原或包被有可溶性抗原的顆粒+相應(yīng)抗體肉眼可見的凝集塊1.直接凝集顆粒性抗原+相應(yīng)抗體玻片凝集：抗原定性〔ABO血型〕試管凝集：抗體定量〔肥達(dá)反響〕2.間接凝集包被有可溶性抗原的顆粒+相應(yīng)抗體紅細(xì)胞〔間接血凝〕；乳膠〔間接乳凝〕Coombs’Test:紅細(xì)胞〔Rh抗原〕+不完全抗體+抗人球蛋白3.派生的試驗(yàn)反向間接凝集反響：包被抗體的顆粒+抗原間接凝集抑制反響：〔乳膠妊娠試驗(yàn)〕抗體+未知抗原+包被有相應(yīng)可溶性抗原的顆粒凝集？9編輯pptHaemagglutination10編輯pptII)Precipitation〔二〕沉淀反響可溶性抗原+相應(yīng)抗體肉眼可見的沉淀物使用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)——瓊脂擴(kuò)散/免疫擴(kuò)散1.單向免疫擴(kuò)散：抗原的定量〔Ig、C3〕2.雙向免疫擴(kuò)散：抗原/抗體的定性、組成及Ag相關(guān)性分析3.免疫電泳：電泳+雙向免疫擴(kuò)散〔抗原分析〕4.對流電泳：雙向免疫擴(kuò)散+電泳〔抗原/抗體定性〕5.火箭電泳：單向免疫擴(kuò)散+電泳〔抗原定量〕免疫比濁：抗體+遞增量抗原比濁〔抗原定量〕11編輯pptIII)ImmunolabellingTechniques

〔三〕免疫標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記物：熒光素、酶、放射性核素、電子致密物質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記對象：抗原或抗體用途：定性、定量、定位免疫熒光法〔IFA〕熒光素可雙色；使免疫復(fù)合物呈熒光；可定性、定位〔1〕直接熒光法〔2〕間接熒光法：熒光素一抗熒光素二抗對每種抗體作標(biāo)記不必標(biāo)記每種抗體特異敏感測Ag測Ag/Ab12編輯ppt免疫熒光法13編輯ppt2.酶免疫測定〔EIA〕:ELISA與酶免疫組化〔1〕雙抗體夾心法ELISA：查抗原〔2〕間接法ELISA：查抗體〔3〕BAS-ELISA：Biotin-Avidin-酶放大系統(tǒng)〔4〕ELISPOT測定法：__包被物待測物測定結(jié)果___抗CK抗體CK分泌細(xì)胞單一CK抗原B細(xì)胞特異B細(xì)胞〔5〕酶免疫組化*酶標(biāo)抗體+組織/細(xì)胞〔未知抗原〕+形態(tài)學(xué)檢查*免疫組化技術(shù)：可對抗原定性、定量、定位酶免疫組化：HRP免疫金銀組化：膠體金顆粒免疫電鏡技術(shù)：HRP、膠體金、鐵蛋白14編輯ppt雙抗體夾心法、間接法ELISA15編輯ppt間接法ELISA16編輯pptELISA操作圖可調(diào)移液器8孔道可調(diào)移液器17編輯ppt3.放射免疫測定〔RIA〕常用125I，測定微量物質(zhì)4.化學(xué)發(fā)光免疫分析常用魯米諾，測定超微量物質(zhì)5.免疫印跡法〔WesternBlotting〕先做凝膠電泳將蛋白質(zhì)分區(qū)再將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體后用酶免疫、放射免疫等技術(shù)加以測定18編輯ppt第二節(jié)免疫細(xì)胞的測定一、淋巴細(xì)胞的別離與類型鑒定〔一〕血細(xì)胞別離外周血密度梯度離心法外周血單個核細(xì)胞〔淋巴細(xì)胞+單核細(xì)胞〕吸附培養(yǎng)別離法淋巴細(xì)胞尼龍毛，抗CD3單抗，E花結(jié)T細(xì)胞B細(xì)胞19編輯ppt〔二〕淋巴細(xì)胞鑒定免疫熒光法常用間接法測CD3/CD4/CD8、mIgM/mIgD2.磁珠別離法如抗CD4抗體交聯(lián)微珠可別離CD4與CD83.流式細(xì)胞術(shù)〔FlowCytometry,FCM〕可分析細(xì)胞大小、核型、外表分子〔多種熒光標(biāo)記〕檢測各類免疫細(xì)胞及其比率白血病、淋巴瘤的免疫學(xué)分型細(xì)胞分選20編輯ppt二、淋巴細(xì)胞功能測定〔一〕T細(xì)胞功能測定1.T細(xì)胞增殖試驗(yàn)：絲裂原/抗CD3刺激/特異抗原細(xì)胞增殖〔1〕同位素?fù)饺敕ā?〕MTT法〔3〕形態(tài)觀測法2.細(xì)胞毒試驗(yàn)CTL、NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞〔1〕51Cr釋放法〔2〕凋亡細(xì)胞檢查法階梯狀酶切圖譜TUNEL法FCM21編輯ppt3.細(xì)胞因子檢測〔1〕免疫學(xué)檢測法——夾心法ELISAFCM〔2〕生物學(xué)檢測法——細(xì)胞增殖〔或細(xì)胞增殖抑制〕試驗(yàn)細(xì)胞毒〔或細(xì)胞毒抑制〕試驗(yàn)〔3〕分子生物學(xué)檢測法RT-PCR測定mRNA4.皮膚試驗(yàn)：測試IV型超敏反響能力22編輯ppt〔二〕B細(xì)胞功能測定B細(xì)胞增殖試驗(yàn)小鼠：LPS

人：SPA；抗IgM2.抗體形成細(xì)胞檢測溶血空斑試驗(yàn)

ELISPOT試驗(yàn)23編輯ppt〔三〕吞噬細(xì)胞功能的測定趨化功能測定

Boyden小室2.吞噬功能測定

24編輯ppt第三節(jié)補(bǔ)體及循環(huán)免疫復(fù)合物的測定25編輯pptIII.Applicationofimmunologicaltechniques

第四節(jié)免疫學(xué)檢測方法的應(yīng)用1.Assessmentandselection一、免疫學(xué)檢測方法的評估與選擇Reliability:truevsfalse可靠性(goldstandard*=真陰性率與真陽性率)*Specificity=真陰性/〔真陰性+假陽性〕x100%*Sensitivity=真陽性/〔真陽性+假陰性〕x100%Safety平安性Simplicity簡易性Savingoftimeandmoney經(jīng)濟(jì)性26編輯pptSelectionasperrequirementandavailability

依據(jù)需要與可能選擇Screening:初篩highsensitivityfirst,toavoidcasemissing防止漏診Diagnosis:確診highspecificityfirst,toavoidmisdiagnosis防止誤診27編輯ppt2.Clinicalapplication

二、免疫學(xué)檢測方法的臨床應(yīng)用1)Infectiousdiseases〔一〕感染性疾病