仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)對(duì)肝細(xì)胞功能的影響.x課件

仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)對(duì)肝細(xì)胞功能的影響研究背景肝衰竭是指受到多種因素(如病毒、酒精、藥物等)造成肝細(xì)胞大量壞死,導(dǎo)致肝臟功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償,進(jìn)而出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床癥候群。目前肝移植是治療肝衰竭的有效方法,然而世界各國(guó)的器官移植面臨著嚴(yán)重的來(lái)源短缺問(wèn)題。為此,以實(shí)現(xiàn)肝臟功能修復(fù)、替代、重建為目標(biāo)的人工肝技術(shù)和肝組織工程為肝衰竭治療提供了新的選擇。研究目的和意義:我們通過(guò)結(jié)合肝組織工程與生物人工肝技術(shù),模擬正常肝臟基本結(jié)構(gòu),提出仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)技術(shù)的研究。通過(guò)該培養(yǎng)模式下對(duì)肝細(xì)胞功能進(jìn)行測(cè)定,并和其他體外培養(yǎng)模式比較,以期得到能夠提高體外肝細(xì)胞功能并適于生物人工肝應(yīng)用的新的肝細(xì)胞培養(yǎng)模式。另外,這種仿肝板結(jié)構(gòu)三維培養(yǎng)的肝組織也有望成為藥物開(kāi)發(fā)和檢測(cè)的有效評(píng)價(jià)工具。研究方法和內(nèi)容:我們利用微流控、水凝膠、軟光刻等技術(shù),采用人源性肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),成功構(gòu)建出仿肝板樣組織結(jié)構(gòu)。為研究仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)對(duì)肝細(xì)胞功能的影響,我們?cè)O(shè)計(jì)了體外功能實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物救治實(shí)驗(yàn)。仿肝板組和混合無(wú)序三維共培養(yǎng)、“三明治”夾層共培養(yǎng)、普通平板共培養(yǎng)法相比較,對(duì)四組進(jìn)行為期兩周的形態(tài)觀察、肝細(xì)胞活力測(cè)定、肝細(xì)胞功能檢測(cè)(白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、凝血因子等)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,對(duì)雄性昆明小鼠聯(lián)合應(yīng)用D-氨基半乳糖和脂多糖進(jìn)行急性肝衰竭造模,仿肝板肝組織腹腔注射對(duì)小鼠進(jìn)行救治,觀察昆明小鼠生存率,同時(shí)進(jìn)行小鼠血液生化指標(biāo)檢測(cè),綜合評(píng)估仿肝板肝組織對(duì)小鼠的救治效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)中,仿肝板組和混合三維組大體形態(tài)上無(wú)明顯差異;仿肝板組肝細(xì)胞活力高于混合三維組;仿肝板組在CYP1A2、凝血因子Ⅱ、睪酮代謝、安定代謝等指標(biāo)方面明顯優(yōu)于另外三組。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,仿肝板組救治效果明顯,和對(duì)照組相比小鼠生存率明顯提高,多數(shù)生化指標(biāo)下降明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)對(duì)肝細(xì)胞功能的影響表現(xiàn)在各個(gè)方面。在肝細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝、蛋白合成分泌、藥物代謝等方面,與“三明治”夾層共培養(yǎng)、普通平板共培養(yǎng)法相比較,具有明顯的優(yōu)勢(shì),值得進(jìn)一步研究。仿肝板肝組織能夠部分替代肝衰竭昆明小鼠的肝臟功能,且對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)有一定