仿刺參精多糖的提取純化及其活性研究.x課件

仿刺參精多糖的提取純化及其活性研究海參是一種在中國(guó)沿海的重要海洋食品,含有多種功能性成分及多種保健功能。近年來(lái),海參多糖逐步在海參保健功能的研究中占有了重要地位,研究重點(diǎn)包括抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等。在海參的加工過(guò)程中,海參精作為海參的副產(chǎn)物之一,經(jīng)常會(huì)被丟棄,這樣既造成了浪費(fèi),也污染了環(huán)境。因此,本課題選擇海參中具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的仿刺參中的海參精為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行多糖的提取和活性研究。首先對(duì)其進(jìn)行不同蛋白酶酶解的工藝優(yōu)化:單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn),然后采用不同的方法對(duì)酶解得到的仿刺參精粗多糖（SCSCP）進(jìn)行逐步的分離純化得到四個(gè)組分（SCSPA₁、SCSPA₂、SCSPB₁、SCSPB₂）,最后對(duì)各分離組分分別進(jìn)行理化性質(zhì)的測(cè)定及抗腫瘤和抗氧化活性初步研究,以期為海參精副產(chǎn)物中多糖的生產(chǎn)及應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。結(jié)果如下:1.仿刺參精多糖的提取選擇兩種應(yīng)用廣泛的蛋白酶,以多糖得率為指標(biāo),將添酶量、酶解溫度和酶解時(shí)間作為重要的影響因子,首先進(jìn)行了兩種單酶各個(gè)因素取值范圍的確定,然后進(jìn)行了響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),最后對(duì)雙酶酶解添加比例進(jìn)行了篩選實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:木瓜蛋白酶單酶的提取率較高,添酶量為3%、酶解溫度為49℃、酶解時(shí)間為6h時(shí),其得率可達(dá)10.64‰。2.仿刺參精多糖的純化及理化性質(zhì)分析多糖SCSCP經(jīng)DEAESepharoseFastFlow柱層析得到SCSPA₁和SCSPA₂兩個(gè)主要組分,對(duì)SCSPA₁進(jìn)行葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析純化得到SCSPB₁,對(duì)SCSPA₂進(jìn)行SephadexG-200純化得到SCSPB₂,分別對(duì)分離純化到的各組分進(jìn)行理化性質(zhì)的分析。結(jié)果:首先,在化學(xué)組成方面,SCSCP、SCSPA₁、SCSPA₂、SCSPB₁和SCSPB₂的多糖含量分別為31.07%、40.03%、45.27%、44.62%、50.73%;蛋白含量分別為21.18%、19.43%、7.52%、10.36%、6.61%;糖醛酸含量分別為3.81%、3.14%、1.73%、3.50%、2.97%;硫酸根含量分別為12.39%、10.07%、17.71%、12.66%、21.33%。其次,紫外和紅外光譜掃描結(jié)果表明五種多糖組分在多糖的特征吸收區(qū)域內(nèi)均有吸收峰。最后,在單糖組成方面,甘露糖、氨基葡萄糖、乳糖、半乳糖和巖藻糖均被SCSPB₁和SCSPB₂所含有,但兩者所含單糖含量有所差異,而氨基半乳糖鹽酸鹽只被SCSPB₂所特有。3.仿刺參精多糖腫瘤抑制活性的研究采用MTT法對(duì)仿刺參精多糖及其純化組分進(jìn)行Hela和HepG2腫瘤細(xì)胞增殖能力的體外抑制試驗(yàn)表明:Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間不同SCSCP抑制效果也不同,五種多糖抑制細(xì)胞生長(zhǎng)強(qiáng)弱順序依次為SCSPB₂>SCSPA₂>SCSPB₁>SCSPA₁>SCSCP。當(dāng)SCSPB₂濃度為10mg/mL時(shí),對(duì)培養(yǎng)72h的Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的抑制率分別為85.63%和88.46%,表明具有顯著的體外抗腫瘤活性。4.仿刺參精多糖的抗氧化活性研究本文對(duì)分離組分進(jìn)行了:DPPH·、羥基自由基（OH·）和超氧陰離子自由基(O_2-·)清除活性的測(cè)定。結(jié)果表明在三種自由基清除上,粗多糖及其純化組分都發(fā)揮了不同的作用。所有組分都在O_2-·的清除實(shí)驗(yàn)上呈現(xiàn)出微弱的能力,但不同組分之間有一定的區(qū)別;在其余兩個(gè)自由基清除實(shí)驗(yàn)中各個(gè)多糖組分均呈現(xiàn)出較強(qiáng)的能力,且互相之間也有差別。其中,對(duì)三種自由基SCSPB₂的能力最強(qiáng),在DPPH·、OH