維生素的測定

維生素的測定17.2維生素的測定17.2.1概述［2,3］維生素廣泛存在于各種生物體中，其種類繁多，化學(xué)結(jié)構(gòu)與生理功能各異。因此無法按照結(jié)構(gòu)或功能分類，按其溶解性可分為脂溶性（Va、Vd、Ve、V』和水溶性％、VB2、VB6、Vpp、VJ兩大類。維生素是人體生命活動不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)，它們一般在動物和人體內(nèi)不能合成或合成數(shù)量少，滿足不了動物和人體的需要，必須依靠從食物中攝取。在食物中缺乏了任何一種維生素，人和動物都會發(fā)生特有的缺乏癥狀，如缺乏維生素A、B和C時，可分別引起夜盲癥、腳氣和壞血病等，嚴(yán)重時足以致命。某些維生素含量的高低，是評價農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。維生素的分析是一項比較復(fù)雜的工作。其樣品分析的一般程序是：①用酸、堿或酶分解樣品，使其中的維生素游離出來；②用溶劑進(jìn)行提??；③分離干擾物質(zhì)，對樣液進(jìn)行分離提純；④用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行定量等。維生素的測定方法，有微生物學(xué)測定法、生物學(xué)測定法等。儀器分析的方法有分光光度法、熒光分析法、薄層層析法、高效液相色譜法等。維生素的分析方法很多，選用方法時應(yīng)根據(jù)樣品的品種、類型、待測維生素的性質(zhì)、含量以及干擾物質(zhì)多少等因素來決定。下面重點介紹維生素C、維生素B］和B2以及作為維生素A原的b-胡蘿卜素的測定。維生素C又稱抗壞血酸，其純品為白色無臭結(jié)晶，熔點為190~192弋，溶于水或乙醇中，不溶于油劑，在水溶液中易被氧化，在堿性條件下易分解，在弱酸條件下較穩(wěn)定。還原型（L-抗壞血酸）可被氧化為氧化型（L-脫氫抗壞血酸），還有一定的生理作用，如果進(jìn)一步水解則生成2,3-二酮古樂糖酸，失去生理作用。總抗壞血酸包括還原型、氧化型抗壞血酸和2,3-二酮古樂糖酸。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)可以測定VC的含量。常用的測定方法有二氯靛酚法、2,4-二硝基苯肼法、鉛-硫化氫法、碘酸法以及熒光分光光度法。2,6-二氯靛酚法用于測定還原型VC，其它方法多用于測定總VC的含量。17.2.2還原性維生素C的測定17.2.2.1方法原理抗壞血酸（VC）結(jié)構(gòu)中有烯二醇結(jié)構(gòu)存在，因此具有還原性，能將藍(lán)色染料2,6-二氯靛酚還原為無色的化合物，VC則被氧化為脫氫VC，反應(yīng)式如下：還原型VC 氧化型2,6-二氯靛酚 脫氫VC 還原型2,6-二氯靛酚（無色）二氯靛酚具有酸堿指示及氧化還原指示的兩種特性，在堿性介質(zhì)中呈深藍(lán)色，而在酸性介質(zhì)中呈淺紅色（變色范圍pH4~5），其氧化態(tài)時呈深藍(lán)色（堿介質(zhì)中）或淺紅色（酸性介質(zhì)），還原態(tài)時為無色。根據(jù)這個特性，用堿性藍(lán)色染料的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定植物樣品酸性浸出液中VC到剛變淺紅色為終點，由染料的用量即可計算VC的含量。滴定終點的紅色是剛過量的未被還原的（氧化型）染料溶液在酸性介質(zhì)中的顏色。通常測定VC浸提和測定都是在20g?L-i的草酸溶液中進(jìn)行的，目的是保持反應(yīng)時一定的酸度，避免VC在pH高時易被空氣氧化（注1）。此染料不致氧化待測液中非VC的還原性物質(zhì)，所以對VC的測定有一定的選擇性。本法適用于測定一般水果、蔬菜樣品的還原型vC，不包括脫氫vC。如樣品中含有Fe2+、Sn2+、Cu2+、SO32-、S2O32-、SO?等還原性雜質(zhì)，則有干擾。17.2.2.2主要儀器高速組織搗碎機(jī)（8000~12000r?min-1）;電動離心機(jī)（4000r?min-1）；半微量滴定管。17.2.2.3試劑20gL-1草酸溶液：稱取草酸（化學(xué)純）20g溶于水中，稀釋至1L,貯于避光處（注2）60g?L-iKI溶液。1Og?L-1淀粉指示劑。0.1000mol?L-i(1/6KIO3)標(biāo)準(zhǔn)液：稱取在105°C烘過2h的碘酸鉀(KIO3,優(yōu)級純)1.784g溶于水，定容至500mLo此為0.1000mol?L-i(1/6KIO3)貯備液。使用時將此貯備液用煮沸并冷卻的水稀釋100倍，即成0.0010moK-1(1/6KIOJ標(biāo)準(zhǔn)溶液。大約每星期應(yīng)稀釋配制一次。VC標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取維生素C(C5H8O5，分析純)20.0mg溶于20g?L-1草酸溶液，并用20g?L-1草酸稀釋至100mL,此液約含VC0.2mg?mL-1,置于冰箱中保存。臨用前當(dāng)天進(jìn)行標(biāo)定。VC的標(biāo)定：吸取VC液5.00mL于50mL三角瓶中，加入20g?L-1草酸溶液10mL,60g?L-1KI溶液0.5mL,10g?L-1淀粉溶液5滴，用0.1000mol?L-1(1/6KIO3)標(biāo)準(zhǔn)液滴定至溶液突變?yōu)闇\藍(lán)色為止(約需滴定11mL)，計算VC的準(zhǔn)確濃度：VC溶液濃度，mg?mL-1二cV1x88/V2式中c—所用(1/6KIOJ標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mol?L-1);V]—所用(1/6KIOJ標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL)；V2—所用VC溶液的量(mL)；88—維生素C(1/2C5H8O5)的摩爾質(zhì)量(注3)?mol-1);2,6-二氯靛酚溶液：稱取2,6-二氯靛酚(分析純)50mg溶于約200mL含有NaHCO3(分析純)52mg的溫水中(<40C)，冷卻后用水稀釋至250mLo用玻璃濾器或折迭濾紙濾于棕色瓶中，保存在冰箱中。使用前，待溶液恢復(fù)至室溫后，用VC標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度。在冰箱中保存時，每周標(biāo)定一次(注4)。標(biāo)定方法：吸取已標(biāo)定的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL倍VC約1mg)于50mL三角瓶中，加入20g?L-1草酸溶液10mL，搖勻，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈淺紅色，約在15s不褪色為止(應(yīng)用染料溶液約10mL)o計算每毫升染料溶液相當(dāng)于VC的mg數(shù)，即滴定度T(應(yīng)約為0.1mg?mL-1Vc):T=cxV1/V2式中c—所用Vc標(biāo)準(zhǔn)液的濃度(mg?mL-1);V]—所用Vc標(biāo)準(zhǔn)液的體積(mL)；v2—所用染料溶液的體積(mL)。17.2.2.4操作步驟樣品處理：新鮮果蔬樣品：稱取鮮樣50.0~100.0g，放入組織搗碎機(jī)的杯中，加入等重量的20g?L1草酸浸提劑，快速搗碎1min，將樣品打成漿狀。樣品處理的整個過程應(yīng)在10min中內(nèi)完成，以免Vc被空氣氧化。用小燒杯稱取漿狀物10~30.xg(含還原型Vc1~5mg)，放入100mL容量瓶中，用20g?L-1草酸溶液定容，若有泡沫可加2滴辛醇除去。過濾，若濾液色深，影響滴定終點的判定時，可加1~2勺白陶土脫色(注5)不易過濾，可用離心機(jī)分離。多汁果蔬樣品：可用紗布壓汁后脫脂棉花快速過濾，量取10~20mL汁液，立即用20g?l-i草酸溶液定容至100mL。干樣品：稱取1~4.xxxg(含還原型Vc1~5mg)放入研缽中，加入20g?L-i草酸溶液研磨成漿狀液，洗入100mL容量瓶中，用20g?L-1草酸定容。⑷含有還原性物質(zhì)的樣品：含有較多Fe2+的樣品可用80mL丄-1醋酸代替20g?L-1草酸作為浸提劑。亞硫化脫水樣品，可于稀釋至一定容量之前加入20mL丙酮，以除去SO2的干擾。樣品的測定：吸取以上制得的無色濾液5.00~10.00mL(使含VC約0.2~1mg范圍)放入50mL三角瓶中，用棕色半微量滴定管中裝的二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淺紅色，約在15s內(nèi)不褪色為終點(注6)。同時以浸提劑做空白試驗(空白值約0.08~0.10mL)。17.2.2.5結(jié)果計算還原型Vc含量(mg?kg-1)=(V-V0)x1000xT/m式中V—滴定樣品液所用染料溶液量(mL);V0—滴定空白所用去染料溶液量(mL)；T—染料溶液的滴定度；m—滴定時樣品溶液中樣品的質(zhì)量(g)。兩次測定結(jié)果允許誤差：樣品還原型Vc含量，mg?kg-1允許誤差，mg?kg-15.0<1005.0100~100010.017.2.2.6注釋注1.偏磷酸是Vc的最佳穩(wěn)定劑，且具有沉淀蛋白質(zhì)的作用。但其價格較貴，在室溫下放置易轉(zhuǎn)化為正磷酸，降低對Vc的穩(wěn)定性。草酸廉價易得，有與磷酸相近的穩(wěn)定性。而醋酸適于浸提含有Fe2+的樣品。注2.草酸不應(yīng)置于日光下，以免產(chǎn)生過氧化物。當(dāng)有催化劑（如CU2+）存在時，過氧化物能破壞Vc。注3.Kio3與還原Vc的主要反應(yīng)如下：IO3-+5I-+6H+=====3I2+3H2Oi2+C6H8o8=====C6H6o8+2i-+2H+從上述反應(yīng)式可知1mol（1/6KIOJ與1mol（1/2C6H8O8）完全反應(yīng)，故1/2C6H8O8的摩爾質(zhì)量為88g?mol-i。（注4）2,6-二氯靛酚固體試劑有時含有分解產(chǎn)物，染料溶液長久貯存時也會生成分解主物，從而使滴定終點不敏銳，因此應(yīng)在使用前檢查。檢查方法：取15mL染料溶液加入過量的Vc溶液，若還原后的溶液帶有顏色，表示此溶液已不能使用。（注5）使用白陶土?xí)r，要對每批新的白陶土測定對Vc的回收率。（注6）樣品中可能有其它還原性物質(zhì)也可使染料還原。但其還原染料的速度較慢，故滴定終點以淺紅色在15s不褪色為準(zhǔn)。17.2.3維生素C總量的測定（2,4-二硝基苯肼比色法）17.2.3.1方法原理維生素C總量包括還原型Vc、脫氫型Vc和二酮古樂糖酸，將樣品中的還原型抗壞血酸氧化為脫氫抗壞血酸，進(jìn)一步水解為二酮古樂糖酸。二酮古樂糖酸與2,4-二硝基苯肼偶聯(lián)生成紅色的脎。其呈色的強(qiáng)度與二酮古樂糖酸濃度成正比，可以比色定量。17.2.3.2主要試劑10g?L-i草酸，20g?L-1草酸;酸處理活性炭：取活性炭200g，加入1:9HCl1000mL,煮沸后，抽氣過濾，再用沸水1000mL煮沸過濾，重復(fù)用水洗至溶液中無Fe2+離子（用10gL-iKSCN溶液試驗無紅色），放在100?120°C烘干。20g?L-i2,4-二硝基苯肼溶液：稱取2,4-二硝基苯肼（分析純）2.00g溶解于100mL4.5mol?L-iH2SO4中。4.5mol?L-iH2SO4溶液：量取濃H2SO4（分析純）250mL，慢慢倒入750mL水中，邊加邊攪拌。100g?L-1硫脲溶液：用500mL?L-i酒精溶液溶解5.00g硫脲（分析純），使其最終體積為50mL。H2SO4（9:1）溶液：量取濃硫酸90mL，慢慢倒入10mL水中。標(biāo)準(zhǔn)Vc溶液：稱取維生素C（C6H8O5，分析純）20mg溶解于10g?L-1草酸溶液中，移入100mL容量瓶中，并用10g?L-1草酸溶液定容。吸取此溶液50mL，加入活性炭0.1g，搖1min，過濾。吸取此溶液5mL于100mL容量瓶中，用10g?L-1草酸溶液稀釋定容。此Vc工作液為10mg?mL-1。17.2.3.3操作步驟樣品處理：稱取適量樣品（m）加等重量的20g?L-1草酸溶液，在組織搗碎機(jī)中打成漿狀。取漿狀物20g用10g?L-1草酸溶液移入100mL容量瓶中，定容過濾。樣品中總Vc的測定：取濾渡10mL,加入10g?L-1草酸10mL（總Vc約1~10mg?mL-1），加一勺活性炭。搖1min，靜置過濾。各取濾液2mL于樣品管和樣品空白管中，各管加入1滴硫脲溶液（注1）0于樣品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5mL，兩管都加上蓋子，置于37C保溫箱中保溫3ho然后取出樣品管放入冰水中（終止反應(yīng)）。樣品空白管取出后冷卻至室溫，然后加入2,4-二硝基苯肼0.5mLo然后在樣品管和樣品空白管皆置于冰浴中，從滴定管中滴加9:1硫酸溶液2mL于各管中，邊滴邊搖試管（防止溶液溫度上升，溶液中糖炭化而轉(zhuǎn)黑色）。將各管從冰浴中取出，在室溫下放置30min后（注2），立即在分光光度計540nm波長比色，讀取吸收值，根據(jù)吸收值從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：吸取Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液10，20，30，40，50mL稀釋至50mL，即此系列含有2,4,6,8,10mg?mL-i的Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液。各取2mL于各標(biāo)準(zhǔn)管中，以下操作步驟同上樣品測定。以上述Vc濃度系列為橫座標(biāo)，以吸收值(A)為縱座標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。17.2.3.4結(jié)果計算Vc總量(mg?kg-i)=rx20x1000/1000=rx20式中r—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的總抗壞血酸的含量(mg?mL-i);20—樣品稀釋倍數(shù)［(2m/m)x(100/20)x(20/10)=20］;1000—分別代表1000g樣品中總Vc的含量和將mg換算成mg。17.2.3.5注釋注1.硫脲可防止Vc被氧化，且可幫助脎的形成，最終溶液中硫脲的濃度應(yīng)一致，否則影響色度。注2.加入H2SO4(9:1)溶液后試管從冰水中取出，溶液顏色會繼續(xù)變深，所以必須準(zhǔn)確加入H2SO4后30min內(nèi)比色。17.2.4維生素B1和維生素B2的測定(液相色譜法)維生素B1又名硫胺素，作為抗腳氣病因素和抗神經(jīng)炎因素，早已為人們所知［4］。它常以游離態(tài)、或作為焦磷酸鹽存在于自然界中。它是熔點為246~250弋的白色結(jié)晶，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚和氯仿。硫胺素遇氧化劑或還原劑很不穩(wěn)定，在干燥時較耐熱，在酸性條件下(pH3.5)不易分解，在堿性條件下易分解。維生素B1在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆、綠色蔬菜和牛乳、蛋黃、肝臟、豬肉中比較豐富，動物組織不如植物組織豐富。一般天然物中的維生素B1不但有游離型的，而且也有結(jié)合型的，在農(nóng)產(chǎn)品中它常與淀粉、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，要進(jìn)行各種相應(yīng)的前處理，使其成為游離型后，才可以進(jìn)行測定。維生素B1可用靈敏度較高的硫色素?zé)晒夥ǎ?,3,4,5,8,9］，紫外分光光度法、偶氮染料比色法和熒光目測法［8］等進(jìn)行測定。維生素B2又名核黃素、乳黃素，作用名為促進(jìn)生長因素。它是橙黃色針狀結(jié)晶，熔點為282弋的，耐熱，對空氣、氧氣穩(wěn)定，微溶于水，其水溶液呈黃綠色熒光，在強(qiáng)酸性和堿性溶液中則充分溶解。在酸性溶液中即使加熱也很穩(wěn)定，而在堿性溶液中則不穩(wěn)定，特別是具有遇光易分解的性質(zhì)。維生素B2在自然界中較多地存在于酵母、肝臟蛋、牛乳、肉類中，在天然物中維生素B2不僅有游離型，還有與核酸結(jié)合在一起的。測定時要經(jīng)適當(dāng)?shù)那疤幚?，使其分離后進(jìn)行測定。維生素B2的測定方法有分光光度法［8］、核黃素?zé)晒夥ê凸恻S素?zé)晒夥ǎ?,3,4,5,8,9］等。隨著儀器分析技術(shù)的發(fā)展，液相色譜法也應(yīng)用于同時測定維生素維生素B2，下面就此方法進(jìn)行介紹。17.2.4.1方法原理樣品在稀鹽酸溶液中經(jīng)消化，用淀粉酶和木瓜酶分解樣液中的淀粉和蛋白質(zhì)后，即得到維生素B2的測定樣液。此溶液在堿性鐵氰化鉀溶液中氧化后用異丁醇提取所得維生素B2測定樣液。然后用YWG-C18柱乙晴-磷酸鹽緩沖溶液作流動相，以熒光檢測器進(jìn)行液相色譜法測定，求出樣品中維生素B］和維生素B2的含量。17.2.4.2儀器液相色譜儀：具有：?熒光分光檢測器和記錄儀；?色譜柱：不銹鋼柱長為250mm，內(nèi)徑3.8mm。淤漿法填裝YWG-C18H3710m固定；微量注射器：5mL和10mL。17.2.4.3試劑乙晴和異丙醇，分析純，重蒸；0.025mol?L-1磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)；流動相：流動相A，以磷酸鹽緩沖液80份和乙晴20份相混而成；流動相B，以磷酸鹽緩沖液82份和乙晴18份混合而成。堿性鐵氰化鉀溶液：吸取150g?L-1氫氧化鈉溶液97mL加入10g?L-1鐵氰化鉀3mL混合而成；混合酶溶液：取淀粉酶和木瓜酶各3g,用2mol?L-1醋酸鈉溶液稀釋至100mL;維生素B］標(biāo)準(zhǔn)溶液：用0.01mol?L-1鹽酸溶液將符合藥典的鹽酸硫胺素配制成100mg?L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液；維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液：用0.01mol?L-1鹽酸溶液將符合藥典的核黃素配制成25mg?L-i的標(biāo)準(zhǔn)溶液；維生素B］和維生素B2混合工作液：取上述維生素B］和維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液用0.01mol?L-1鹽酸溶液稀釋至含維生素B］和維生素B2各2mg?L-i的標(biāo)準(zhǔn)溶液。17.2.4.4操作步驟樣品處理：固體樣品粉碎過20目篩，果蔬、肉類有水產(chǎn)品經(jīng)搗碎備用。稱取試樣1.00g（維生素B］和B2含量不低于0.5mg）于50mL棕色容量瓶中，加入0.1mol?L-1鹽酸溶液35mL，在超聲波浴中超聲3min或轉(zhuǎn)動搖勻，在高壓滅菌鍋內(nèi)121C保持20~30min或置于沸水浴中加熱30min，然后輕搖數(shù)次。取出，冷卻至40C以下，分別加混合酶液各2.5mL，搖勻，置于37C下過夜或42?43C加熱4h，冷卻，用水定容。樣液經(jīng)每分鐘3000轉(zhuǎn)速度離心過濾，取約10mL濾液備用。然后取濾液直接進(jìn)行維生素B2測定（注1）。取上述濾液5mL于60mL分液漏斗中，沿分液漏斗壁加堿性鐵氰化鉀溶液3mL（邊搖邊加），繼續(xù)振搖10s，立即加入異丁醇8mL，并猛烈振搖45s，靜置分層后棄去水層。有機(jī)相通過無水硫酸鈉小柱，其收集液為維生素B/寺測液。2?標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：準(zhǔn)確吸取2mg?L-1維生素B】和維生素B2混合工作液0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mL于50mL棕色容量中，再加入與樣品等量的0.1mol?L-1鹽酸，以下操作同樣品處理，得到維生素B2標(biāo)準(zhǔn)系列水溶液和維生素8］標(biāo)準(zhǔn)系列異丁醇溶液。樣品測定：維生素B1的測定：首先調(diào)整液相色譜儀中激發(fā)波長為435nm,狹縫為10nm，發(fā)射波長為375nm，狹縫為12.5nm，靈敏度為10。使用流動相A,流速1mL?min-1。然后用微量注射器吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和樣液為4mL或8mL（注2），注入液相色譜儀中，得到其出峰保留時間和峰高。維生素B2的測定：首先調(diào)整液相色譜儀中激發(fā)波長為440nm,發(fā)射波長為565nm,狹縫與維生素B］相同，靈敏度為3。使用流動相B,流速1mL?min-i。然后用微量注射器吸取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和樣液為5mL,注入液相色譜儀中，得到其出峰保留時間和峰高。由于采用等容量進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列的峰高為縱座標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)系列的維生素B］或B2含量(mg)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。17.2.4.5結(jié)果計算維生素8］或B2(mg.kg-i)=mi/m式中：m】一由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)維生素B1或B2的質(zhì)量(mg)；m—進(jìn)入色譜內(nèi)相當(dāng)樣品質(zhì)量(g)。17.2.4.6注釋注1.維生素B2測定用消化后的濾液直接進(jìn)樣，處理后的標(biāo)準(zhǔn)和樣品都有雜質(zhì)峰，但能分離維生素b2，不影響測定。注2.由于維生素B］被堿性鐵氰化鉀氧化并不是定量產(chǎn)生硫色素，但在恒定條件下是一個恒量。用異丁醇萃取的維生素B1也是如此。因此本法采取等體積進(jìn)樣。17?2?5以b-胡蘿卜素的測定胡蘿卜素是具有類似維生素A的生物活性和效力的物質(zhì)，稱維生素A原。胡蘿卜素常有a、b、g幾種異構(gòu)體，其中以b-胡蘿卜素的生理效能最大。在動物的小腸內(nèi)、肝臟中轉(zhuǎn)化為維生素A。結(jié)構(gòu)式如下：b-胡蘿卜素由此可見，一分子的胡蘿卜素可分為二分子的維生素A，在實際效能上，一分子的胡蘿卜素只相當(dāng)于一分子的維生素A。胡蘿卜素是脂溶性物質(zhì)，易氧化，對熱、酸不穩(wěn)定。在紫外光照射下分解。但是在惰性氣體中加入適當(dāng)?shù)目寡趸瘎?如維生素E)，則可提高穩(wěn)定性。b-胡蘿卜素是植物色素。存在于谷物、蔬菜、水果等食物中。以每百克可食部分計，小米0.12mg、玉米0.34mg、玉米面0.13mg、黃豆0.40mg、黃豆粉0.48mg、綠豆0.22mg、毛豆0.23mg。因b-胡蘿卜素是有色色素，可采用直接比色法定量分析。17.2.5.1主要儀器：分光光度計，帶塞燒瓶，分液漏斗，容量瓶。17.2.5.2試劑水飽和正丁酮：5份正丁酮與1~2份水在分液漏斗中用力地進(jìn)行搖動，靜置分層，取上清液備用。乙醚。b-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.025