色氨酸與TCBQ熒光性質(zhì)的測定2

L-色氨酸與四氯苯醌（TCBQ）荷移熒光光譜法的研究摘要本文使用熒光光譜法研究了L-色氨酸與四氯苯醌（TCBQ）的荷移反應(yīng)。通過實驗可得知，L-色氨酸與TCBQ在水中，以pH=10.9溶液，活性劑為代十六烷基毗啶溶液，在20°C的室溫下加熱10min以后，可生成穩(wěn)定的荷移絡(luò)合物。此荷移絡(luò)合物的最大激發(fā)波長入=284，最大發(fā)射波長入max=364，△F=0.32857+25.48571c（卩g/mL）（R=0.99902）,濃度在0~2.0ng/mL的范圍內(nèi)符合比爾定max律，回收率在98.59?103.4%之內(nèi)，相對標(biāo)準偏差在0.96%以內(nèi)，該方法最低檢測限為0.037卩g/mL。關(guān)鍵詞熒光猝滅法L-色氨酸四氯苯醌（TCBQ） 荷移反應(yīng)1引言L-色氨酸（L-trytophan）是人類和動物必需的八種氨基酸之一，化學(xué)名稱為 L-氨基吲哚基丙酸，別名L-胰化蛋白氨基酸、L-B-（3-吲哚基）-a-丙氨酸，它是含有吲哚基的芳香族氨基酸，呈白色或略帶黃色的葉片狀結(jié)晶或粉末，無臭有甜味，溶于熱吡啶，微溶于乙醇，不溶于氯仿、乙醚，在稀酸或稀堿中溶解。L-色氨酸有促進機體生長發(fā)育，修補組織細胞的作用；有為肌體提供營養(yǎng)的作用；對肌體內(nèi)各種酶、激素的分泌起調(diào)節(jié)的作用；提高肌體的免疫抵抗能力的作用；運輸其它營養(yǎng)物質(zhì)和解毒的作用。L-色氨酸系氨基酸類藥物，對抑郁癥、失眠癥、高血壓、及止痛等有良效，在歐美一些國家已廣泛應(yīng)用于臨床［1］。目前定量測定L-色氨酸的方法主要有高效液相色譜法［2-4］、電位滴定法［5］、原子吸收光譜法［6］、熒光光譜法［7,8］、分光光度法［9-11］、毛細管電泳分析法［12］、阻抑速差催化光度法［13］、線掃伏安法［14］、化學(xué)發(fā)光法［15-17］等。利用與四氯苯醌（TCBQ）發(fā)生荷移反應(yīng)測定L-色氨酸含量的方法還未見報道。本文選用TCBQ為電子接受體，研究了L-色氨酸與TCBQ形成荷移絡(luò)合物的條件，探討了反應(yīng)機理，并對藥物樣品進行了含量測定，結(jié)果令人滿意。2實驗部分主要儀器與試劑儀器LS55發(fā)光分光光度計（美國PE公司）；WGY-10型熒光分光光度計（天津市港東科技發(fā)展有限公司）；HH-6電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永鑫實驗儀器廠）；92M-202A-DR電子天平（普利賽斯國際貿(mào)易〈上海〉有限公司）；211型酸度計（意大利Hanna）,XYJ-802離心沉淀機（江蘇醫(yī)療儀器廠）。試劑L-色氨酸（天津市大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站），TCBQ（sigma-Aldrich），溴代十六烷基吡啶（天津市光復(fù)精細化工研究所）。所用試劑中溴代十六烷基吡啶為化學(xué)純，其余均為分析純，實驗用水為超純水。溶液的配制方法L-色氨酸溶液的配制：準確稱取0.25000gL-色氨酸，用水溶解，轉(zhuǎn)移到250mL的容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，配成lg/L的溶液。準確量取1mllg/L的L-色氨酸，用水溶解，轉(zhuǎn)移到lOOmL的容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，配成0.01g/L的溶液。pH=10.9的三酸緩沖溶液：分別取2.70mL磷酸、2.29mL冰醋酸、2.47g硼酸于1000mL容量瓶中并稀釋至刻度，在酸度計下，用0.2mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH=10.9。TCBQ溶液的配制：準確稱取0.25000gTCBQ，用少量的乙醇溶解，轉(zhuǎn)移到250mL的容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，配成1g/L的溶液。硼砂溶液的配制：準確稱取38.14g四硼酸鈉，用水溶解，轉(zhuǎn)移到1000mL的容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，配成0.1mol/L的溶液。溴代十六烷基吡啶溶液的配制：準確量取5mL的溴代十六烷基吡啶于燒杯中，用500mL水溶解，配成0.1mol/L的溶液，搖勻后，置于試劑瓶中備用。樣品的制備：血清1.0mL于10mL離心試管中，加3.0mL乙醇除蛋白,靜置5min4000r/min離心10min,取上清夜于比色管中。實驗方法準確移取適量O.Olg/L的L-色氨酸溶液分別于兩支10mL比色管中，其中一支依次加入表面活性劑溴代十六烷基吡啶溶液0.7mL，用pH=10.9的三酸緩沖溶液稀釋至刻度，另一支依次加入TCBQ乙醇溶液0.3mL、表面活性劑溴代十六烷基吡啶溶液0.7mL，并用pH=10.9的三酸緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻，在室溫下反應(yīng)10min后，在負高壓140，出射狹縫4nm，掃描間隔2min的條件下，用1cm石英比色皿，在284nm激發(fā)波長處，測定364nm處的發(fā)射熒光強度F〔和F『并計算熒光猝滅量△F二F－F。123結(jié)果與討論實驗條件的選擇吸收光譜按照實驗方法，用熒光分光光度計對水，TCBQ的乙醇溶液，色氨酸溶液，色氨酸-TCBQ溶液進行激發(fā)和發(fā)射光譜掃描，負高壓為140，光譜通帶均為4nm。在220nm?800nm之間掃描。結(jié)果（圖1、2）表明，水中TCBQ的激發(fā)值和熒光值都很低，對測定無干擾，色氨酸溶液的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別為284nm和364nm；加入TCBQ，峰高明顯下降，而峰形和峰位都沒有發(fā)生顯著的變化。實驗選擇的激發(fā)波長為284nm，發(fā)射波長為364nm。

30.0o60熒光強度圖1不同濃度下的發(fā)射光譜譜圖注釋：從上至下譜線1~10分別如下：1-色氨酸（2.0mL）,2-色氨酸30.0o60熒光強度圖1不同濃度下的發(fā)射光譜譜圖注釋：從上至下譜線1~10分別如下：1-色氨酸（2.0mL）,2-色氨酸（l.OmL）,3-色氨酸（2.0mL）--TCBQ,5-色氨酸（0.5mL）,6-色氨酸（0.2mL）,7-色氨酸（0.5mL）8-色氨酸（0.2mL）-TCBQ,9-色氨酸（O.lmL）,10-色氨酸TCBQ,4-色氨酸（l.OmL）-TCBQ,（O.lmL）-TCBQ熒光強度100.o軸80.0-uo6卜卜圖2不同濃度下的激發(fā)光譜譜圖注釋：從上至下譜線1~10分別如下：1-色氨酸（2.0mL）,2-色氨酸（l.OmL）,3-色氨酸（2.0mL）--TCBQ,TCBQ,4-色氨酸（l.OmL）-TCBQ,5-色氨酸（0.5mL）,6-色氨酸TCBQ,4-色氨酸（l.OmL）-TCBQ,8-色氨酸（0.2mL）-TCBQ,9-色氨酸（O.lmL）,10-色氨酸（O.lmL）-TCBQ溶劑的影響選用不同的溶劑按實驗方法配制溶液，測定相應(yīng)絡(luò)合物的激發(fā)強度和發(fā)射強度并計算其猝滅量，結(jié)果（表1）表明，在乙醚、乙醇、乙腈、丙酮、二甲亞砜中試劑均有沉淀或分層現(xiàn)象，結(jié)果（表2）表明，溶劑用水和甲醇所得的結(jié)果差不多，但因考慮到甲醇有毒成本較貴，則本實驗采用水為溶劑。表1溶劑的影響溶劑乙醚乙醇乙腈 甲醇水丙酮二甲亞颯現(xiàn)象分層淡粉沉乳黃沉溶液溶液白色沉乳黃沉淀淀淀淀表2溶劑的影響溶劑L-色氨酸發(fā)射L-色氨酸與TCBQ發(fā)射△F甲醇44.925.719.2水33.118.914.22—L-色氨酸的熒光強度；4一L-色氨酸與2—L-色氨酸的熒光強度；4一L-色氨酸與TCBQ熒光強度;明，從表3、4、5中可看出，選取在室溫，反應(yīng)時間10min的條件下，發(fā)射的強度大且猝滅量較大且穩(wěn)定。表3溫度（19.8°C）和時間的影響時 間(min)1(nm)23(nm)4△F0358.033.2360.023.79.55360.033.3358.023.69.710358.033.1358.023.29.915358.032.8358.023.09.820358.032.7358.023.09.725358.032.3360.022.69.730358.031.9360.022.49.535358.032.1358.022.29.940358.032.5358.021.610.945360.032.2358.021.810.450360.032.8358/021.611.255358.032.9360.021.711.260360.033.0360.021.711.370358.033.2360.021.511.780358.033.5358.021.512.090358.032.9358.021.111.8100358.032.2358.021.111.1注釋：1一L-色氨酸的發(fā)射峰位；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位;

表4溫度（30°C）和時間的影響時 間(min)1(nm)23(nm)4△F0358.029.9358.025.44.55360.027.4358.022.05.410360.025.8360.020.35.515358.025.8360.019.86.020360.026.0360.019.36.725358.026.3360.018.77.630360.025.8360.019.06.835360.025.9360.018.17.840360.025.6360.018.07.645360.025.8360.017.78.150358.025.2358.017.67.655358.025.7360.017.68.160358.025.9358.017.48.570360.025.8358.017.58.380358.025.6360.016.88.890358.025.6360.016.09.6100360.025.1360.016.28.9注釋：1—L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的熒光強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ熒光強度；表5溫度（40C）和時間的影響時 間(min)1(nm)23(nm)4△F0360.033.1358.024.8&35360.026.3360.021.05.310360.024.4360.019.45.015358.024.0360.019.14.920358.024.8360.019.35.525360.025.1360.019.55.630358.025.3360.018.86.535360.024.6358.018.75.940358.024.8360.019.15.745358.024.8360.018.66.250358.024.6360.018.56.155360.025.0360.018.16.960358.024.7360.018.16.670360.025.3360.017.57.880362.024.4360.017.27.290358.024.2362.017.07.2注釋：1—L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的發(fā)射強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；表面活性劑的影響按照實驗方法配制溶液，分別加入不同的表面活性劑，濃度均為O.1mol/L，用量均為1mL，測定L-色氨酸的發(fā)射強度及其猝滅量，結(jié)果（表6）表明，十二烷基硫酸鈉、曲拉通X-100、溴代十六烷基吡啶猝滅量較大，但由于（表7）表明，曲拉通X-100本身就有強的熒光，而溴代十六烷基吡啶的猝滅量相對于十二烷基硫酸鈉較大，所以本實驗采用溴代十六烷基吡啶溶液作為表面活性試劑。表6表面活性劑的影響表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨十二烷基磺酸鈉不加表面活性劑十二烷基硫酸鈉溴代十六烷基吡啶曲拉通X-100葉溫20葉溫801(nm)366.0364.0364.0312.0364.0>100366.0364.0244.144.944.167.835.5—41.243.83(nm)364.0364.0364.0360.0370.0>100366.0364.0425.931.928639.49.0—32.928.9△F18.213.015.528.426.5—8.314.9注釋：1一L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的發(fā)射強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度;表7表面活性劑的影響表面活性劑十二烷基硫酸鈉曲拉通X-100曲拉通X-100本身溴代十六烷基吡啶1(nm)358.0306.0308.0364.0262.082.272.338.53(nm)358.0308.0304.0366.0444.232.682.29.3△F17.849.6—29.2注釋：1一L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的發(fā)射強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；表面活性劑用量的影響按實驗方法改變溴代十六烷基吡啶溶液的用量，結(jié)果（表8）表明。溴代十六烷基吡啶溶液的用量為0.7mL時，猝滅量較大，本實驗采用用量為0.7mL。表8表面活性劑用量的影響量}用<00.50.70.91.01.11.31.52.01(nm)364.0360.0362.0362.0360.0364.0364.0364.0357.0244.740.036.833.933.130.428.526.024.13(nm)360.0368.0362.0364.0362.0366.0366.0366.0359.0436.514.810.98.69.512.811.810.611.0△F&225.225.925.323.617.616.715.413.1注釋：1—L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的發(fā)射強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；3.1.6試劑TCBQ用量的影響按照實驗方法改變試劑TCBQ溶液的用量，結(jié)果（表9）表明，TCBQ的用量為0.30mL時，猝滅量最大。但當(dāng)TCBQ用量大于0.40ml時，試劑完全猝滅，沒有定量關(guān)系，所以本實驗采用TCBQ用量為0.30ml表9試劑TCBQ用量的影響用量(nm)00.010.020.060.10.150.200.30△F—2.65.616.819.124.529.330.83.1.7酸度的影響分別以0.1mol/L硼砂溶液和pH值不同的三酸溶液為緩沖溶液，按照實驗方法測定其發(fā)射強度并計算其猝滅量，結(jié)果見表10、11、12、。由表10可知，在pH=10—11L-色氨酸的發(fā)射強度最大并且猝滅量最大；表11表明，在pH=10.5—11.5L-色氨酸的發(fā)射強度最大并且猝滅量最大；表12表明，在pH=10.9猝滅量最大，則本實驗選用pH=10.9為緩沖溶液。表10酸度的影響PH1（nm）23(nm)4△F硼砂358.034.4360.022.212.20354.015.9356.03.412.51354.09.9356.06.93.0

2356.012.3357.08.63.73357.018.0357.013.14.94357.021.7353.013.08.75351.020.8349.015.45.46345.019.9343.013.56.47339.019.4335.013.75.78331.021.9330.014.37.69334.025.9332.018.47.510334.043.1332.028.015.111332.054.3332.032.721.612332.08.0334.04.73.313326.07.9326.03.94.014無蜂————注釋：1—L-色氨酸的發(fā)射峰位；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位；表112—L-色氨酸的發(fā)射強度；4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；酸度的影響pH1(nm)23(nm)4△F10.0360.041.9360.031.310.610.5360.047.1360.035.511.611.0360.050.8360.036.814.011.5360.033.1362.022.710.412.0360.07.2362.03.24.0注釋：1一L-色氨酸的發(fā)射峰位；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位；2—L-色氨酸的發(fā)射強度；4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；表12酸度的影響PH1(nm)23(nm)4△F10.5364.043.1278.031.711.410.7364.045.9278.031.114.810.9364.044.1278.028.615.511.0364.045.2278.031.614.611.1364.043.8278.029.913.811.3364.039.9280.029.110.8注釋：1—L-色氨酸的發(fā)射峰位； 2—L-色氨酸的發(fā)射強度；3—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射峰位； 4—L-色氨酸與TCBQ發(fā)射強度；3.1.8加入次序的影響按照實驗方法配制溶液，改變L-色氨酸、TCBQ、緩沖溶液及溴代十六烷基吡啶溶液的加入次序,測定其猝滅量，結(jié)果（表13）表明，加入次序為L-色氨酸、TCBQ、溴代十六烷基吡啶緩沖溶液時,測得的猝滅量最大。

表13加入次序的影響序號12 3 456△F14.315.1 15.8 14.414.914.1各序號加入次序分別為：1，L-色氨酸、TCBQ、溴代十六烷基吡啶、PH緩沖溶液2,L-色氨酸、溴代十六烷基吡啶、TCBQ、PH緩沖溶液3,TCBQ、L-色氨酸、溴代十六烷基吡啶、PH緩沖溶液4,TCBQ、溴代十六烷基吡啶、L-色氨酸、PH緩沖溶液5,溴代十六烷基吡啶、L-色氨酸、TCBQ、PH緩沖溶液6,溴代十六烷基吡啶、TCBQ、L-色氨酸、PH緩沖溶液精密度的測定在選定的最佳條件下，移取相同量的L-色氨酸溶液，按實驗方法平行測定10次，結(jié)果（見表14）。計算得，相對標(biāo)準偏差為0.96%。表14精密度的測定編號12345678910△F44.244.443.843.644.844.543.544.144.344.03.3工作曲線的繪制按實驗方法，準確移取不同量的L-色氨酸溶液，在選定的最佳條件下，分別測色氨酸本身和色氨酸-TCBQ體系的熒光值，求兩者熒光猝滅量，并繪制工作曲線（數(shù)據(jù)見表15,見圖3），結(jié)果表明，該方法下得L-色氨酸含量0~2.0“g/mL時熒光猝滅量與色氨酸的含量呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程AF=25.48571C+0.32857（單位為Ag/mL）,相關(guān)系數(shù)R=0.99902，該方法下最低檢測限為C=0.037Ag/mL（以3S/K計算，S為試劑空白測定值的標(biāo)準偏差，S=0.425，K為工作曲線的斜率）。即在該方法中，當(dāng)其信噪比為3時，該方法最低檢測限為0.037Ag/mL。表15工作曲線的測定加入體積（mL）0.01.01.52.02.53.0濃度C（Ag/mL）0.01.01.52.02,53.0F10.028.243.656.667.577.7F20.02.43.76.37.810.0△F0.025.839.950.359.767.73.4反應(yīng)機理的探討按實驗方法，分別在20°C和30°C下，準確移取不同量的L-色氨酸溶液，反應(yīng)后測定絡(luò)合物的猝滅量，并繪制曲線（數(shù)據(jù)見表16,見圖4），結(jié)果表明，色氨酸與四氯苯醌反應(yīng)屬于靜態(tài)猝滅。表16反應(yīng)機理的測定用量（mL）11.52.02.53.0△F(20C)23.835.846.354.964.4△F(30C)029.540.148.455.0圖4反應(yīng)機理的探討注釋：1—上面線是20C下；2—下面線為30C下熒光猝滅就是激發(fā)態(tài)的熒光分子通過各種外轉(zhuǎn)換過程失去能量使熒光強度降低的現(xiàn)象。如果熒光物質(zhì)以外的其它物質(zhì)存在時使其熒光猝滅，則該物質(zhì)稱為猝滅劑，在本實驗中TCBQ就是色氨酸的一種猝滅劑?；鶓B(tài)熒光分子與猝滅劑之間通過弱的結(jié)合生成復(fù)合物，使熒光猝滅的現(xiàn)象成為靜態(tài)猝滅；激發(fā)態(tài)熒光分子與猝滅劑碰撞使其熒光猝滅的現(xiàn)象稱為動態(tài)猝滅。一般來說，待測物質(zhì)溶液溫度升高，熒光強度降低，這是因為溫度升高后，待測物質(zhì)分子運動速率加快，有效碰撞增加，將消耗部分能量，從而降低熒光效率。由30C和室溫下的數(shù)據(jù)可以看出室溫下色氨酸的猝滅程度比30C色氨酸的猝滅程度大。因此，TCBQ使色氨酸的熒光猝滅是一種靜態(tài)猝滅，即DBQ與色氨酸發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致色氨酸的熒光強度降低。因為30C和室溫相比較，待測物質(zhì)溶液溫度高，分子運動速率加快，有效碰撞增加，熒光強度的猝滅程度應(yīng)該比室溫下的熒光強度的猝滅程度大，但這與實驗數(shù)據(jù)相反，所以該猝滅分析法是一種靜態(tài)猝滅分析法。4樣品測定及回收率實驗4.1樣品的測定取血清1.0mL于10mL的離心試管中，加入3.0mL的乙醇除蛋白，靜置5min，放入XYJ-802離心沉淀機中，4000r/min，離心10min。取上清液0.2mL于10mL的比色管中，用pH為10.90的三酸緩沖溶液稀釋到刻度，搖勻；取上清液0.2mL于10mL的比色管中，加入1.0mLTCBQ乙醇溶液，用pH為10.90的三酸緩沖溶液稀釋到刻度，搖勻，充分混合作用10min。測得血清，血清TCBQ體系的熒光強度均為0。

4.2回收率實驗按照樣品測定方法在0.2mL的血清中，分別加入不同量的0.01g/mL的色氨酸的標(biāo)準溶液，用標(biāo)準加入法測定，其結(jié)果見表17,表18。由表18可知，血清的回收率為98.8?103.2%。表17標(biāo)準加入法測樣品數(shù)據(jù)加入體積(mL)1.52.02.5色氨酸-血清41.154.066.7熒光色氨酸-血清1.32.23.4強度TCBQ熒光猝滅量△F39.851.863.3表18回收率實驗數(shù)據(jù)樣品色氨酸加入量/臨測得總量(n=3)回收率(%)血清11.51.549103.2血清22.02.202101.0血清32.52.47198.85干擾實驗的測定本實驗采用濃度0.5g/L的NaCl、KCl、苯丙氨酸、酪氨酸、硝酸鎳、硝酸鈣、葡萄糖、蔗糖作為干擾物質(zhì)，檢測對實驗有無干擾，結(jié)果如表19所示：NaCl、KCl、苯丙氨酸、葡萄糖、蔗糖的量是色氨酸量的50倍以下時均無干擾，而酪氨酸、硝酸鈣的量是色氨酸量的30倍以下時無干擾，而硝酸鎳是色氨酸量的0.5倍時無干擾，實驗證明：硝酸鎳對實驗干擾最大。表19回收率的測定干擾物不加1mLNaCl1mLKCl1mL苯0.6mL丙氨酪氨0.01mL硝酸鎳0.6mL硝酸鈣1mL葡萄糖1mL蔗糖酸酸猝滅量41.542.739.040.736.57.33540.138.9干擾量00.29%6.02%1.93%7.99%2.05%0.91%3.37%6.26%參考文獻宋文霞，王瑞明.L-色氨酸的研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊，2005，(3)：18—20.李家勝，陳忠明.高效液相色譜法測定飼料中色氨酸含量[J].飼料工業(yè)，1999，(5)：219—222.陳永波，饒斌，覃蘭.高效液相色譜法快速直接測定酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸[J].氨基酸和生物資源，2000，22(1)：55—58.陳揚，于燕梅，駱廣生.高效液相色譜分析法測定色氨酸對映體[J].分析測試技術(shù)與儀器，200612(4)：213—217.范哲鋒，杜黎明，靳曉濤.色氨酸熒光猝滅法測定人發(fā)稀土總量[J].分析化學(xué)，2001，29(9)：1049—1051.胡寶祥，楊未，劉文函，王曉兵?原子吸收光譜間接測定色氨酸的研究[J].光譜實驗室，2006,23(6)：1307—1310.魏永鋒，馬冬梅，趙瓊.比值導(dǎo)數(shù)熒光光譜法同時測定色氨酸和5-羥基色氨酸[J].分析試驗室,2006，25(9)；75—77.何云華，趙小瑾.流動注射化學(xué)發(fā)光法測定L-氨基酸[J].漢中師范學(xué)院學(xué)報，2000,18(2)：49－52．任嬌艷，趙謀明，王金水，崔春?分光光度法測定蛋白酶解物中的色氨酸[J].食品科學(xué)，2006,27(12)：591—593.許前會，王慧彥，李艷輝，程青芳?對二甲氨基苯甲醛分光光度法測定色氨酸[J].甘肅科技，2006，22(12)：50~51.孫昕?分光光度法測定立類及其粗蛋白質(zhì)中的色氨酸[J].生物學(xué)雜志，2000，17(5)：33—34.楊曉云，徐漢虹?色氨酸、半胱氨酸和酪氨酸的高效毛細管電泳分析[J].分析測試學(xué)報，2001,20(3)：16—18.孫衍華，楊景芝.阻抑速差催化光度法測定痕量色氨酸和酪氨酸[J].分析化學(xué)，2004，32(8)：89—91.王曉瑩，魏永鋒，馬冬梅，趙瓊?線掃伏安法同時測定5-羥基色氨酸和色氨酸[J].化學(xué)通報，2007(6)：459—462.[15]AlwarthanAA.Chemiluminescentdeterminationoftryptophaninaflowinjectionsystem[J].Anal.Chim.Acta，1995，317，233—237.ChenGN，XuXQ，DuanJP，