山西農(nóng)大園藝-園藝生物技術(shù)復(fù)習(xí)題及答案

〔密封線內(nèi)不要答題〕………〔密封線內(nèi)不要答題〕………密………………封………………線……………專業(yè)______________________班級姓名______________學(xué)號f考試科目生物技術(shù)概論考試時間2023.11考試方式閉卷成績題號一二三四五六核總分得分評卷人〔本試題總分值100分，考試時間120分鐘〕一、名詞解釋〔解釋以下名詞，每題2分，共10分〕1.生物技術(shù)：2.基因：3.質(zhì)粒：4.植物遺傳轉(zhuǎn)化：5.分子標(biāo)記：二、填空題〔不填或錯填者不得分，每空1分，共20分〕1.常用的遺傳標(biāo)記有標(biāo)記、標(biāo)記、標(biāo)記和標(biāo)記等四種不同水平的標(biāo)記。2.在遺傳轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體中通常構(gòu)建有一些篩選基因或報告基因，如果實驗很成功，且檢測方法正確，那么以下基因的作用效果應(yīng)呈現(xiàn)的顏色分別是：LacZ基因重組子色菌斑；GUS呈色；GFP呈色。3.目前聚合酶鏈?zhǔn)椒错懗Ｓ玫降腄NA聚合酶是。4.利用分子標(biāo)記輔助選擇的重要條件是目標(biāo)基因與分子標(biāo)記存在關(guān)系。5.種植轉(zhuǎn)基因作物面積最大的4個國家分別是、、和。6.根據(jù)作用方式及功能不同，啟動子可分成、和等3種類型。7.植物DNA的提取方法主要有兩種：法和法；DNA含量和純度分析方法也主要有兩種：法和法。三、選擇題〔從以下各題備選答案中選出一個或多個正確答案，并將其代號寫在答題紙相應(yīng)位置。答案錯選或未選者，試題不得分；未選全，但選項正確者得1.0分。每題2.0分，共20分〕1.ThemostimportantcontributionofWatsonandCrickis()A:ProteinstructuremodelB:RNAstructuremodelC:DNAisthegeneticmaterialD:DNAdouble-helixstructuremodelE:TheoryofPCR2.如果DNA一條鏈?zhǔn)?’-ATCGTACGGGTT-3’，那么能與其互補(bǔ)配對的另一條鏈可能是：〔〕A:5’-ATCGTACGGGTT-3’B:5’-AACCCGTACGAT-3’C:3’-TAGCATGCCCAA-3’D:3’-UAGCAUGCCCAA-5’E:3’-TUGCUTGCCCUU-3’3.可用于基因別離的方法有：〔〕A:同源序列法B:圖位克隆法C:功能克隆法D:差減雜交法E:基因芯片4.右以下圖中剪刀所在位置是DNA分子上的某一酶的酶切位點，長方形是探針結(jié)合部位，試問1、2、3三種DNA樣品用該酶/探針組合進(jìn)行RFLP分析能得到的雜交信號條帶分別是：〔〕〔密封線內(nèi)不要答題〕………密〔密封線內(nèi)不要答題〕………密………………封………………線……………專業(yè)______________________班級姓名______________學(xué)號fB:1、2、2C:1、1、1D:1、1、2E:3、4、45.如果RAPD分析時所選用的隨機(jī)引物的序列為5’-ATCGTACGGGTT-3’，以下虛線局部為500-1000bp長的DNA區(qū)域，請分析其中能進(jìn)行2的指數(shù)倍擴(kuò)增的有：〔〕A:5’ATCGTACGGGTT————3’B:5’————ATCGTACGGGTT3’C:5’ATCGTACGGGTT————TAGCATGCCCAA3’D:5’ATCGTACGGGTT————TTGGGCATGCTA3’E:5’ATCGTACGGGTT————AACCCGTACGAT3’6.園藝植物常用轉(zhuǎn)化方法有哪些：〔〕A:農(nóng)桿菌介導(dǎo)法B:基因槍法C:PEG介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法D:電激轉(zhuǎn)化法E:電泳法7.常用的選擇標(biāo)記基因：〔〕A:GUS基因B:NPTII基因C:花青素基因D:GFP基因E:熒光霉素基因8.目前分子標(biāo)記在種質(zhì)資源研究中的用途有：〔〕A:繪制品種的指紋圖譜B:種質(zhì)資源的遺傳多樣新及分類研究C:物種的起源與演化D:種質(zhì)資源的評價、鑒定與創(chuàng)新E:繪制目標(biāo)性狀基因連鎖圖9.外源基因表達(dá)蛋白的檢測方法有：〔〕A:ELISA檢測B:Southern雜交C:Western雜交D:PCR檢測E:Northern雜交10.以下屬于現(xiàn)代生物技術(shù)研究的內(nèi)容有：〔〕A:有性雜交B:體細(xì)胞雜交C:組織培養(yǎng)D:基因克隆E:遺傳轉(zhuǎn)化四、判斷改錯題〔用√，×表示以下各題的正確與錯誤，并對錯誤的地方加以改正，如為錯誤命題，那么判斷占1.0分，改正占1.0分，每題2.0分，共10分〕1.PCR擴(kuò)增的引物為雙鏈DAN片段。2.DNA電泳操作時要戴手套，是因為其中的EB是一種劇毒的重金屬。3.在DNA電泳時，分子量大的片段比分子量小的片段距離正極更近。4.DNA復(fù)制時，新合成鏈的延伸方向是從5’到3’。5.DNA雙鏈中AT間形成的氫鍵比GC間多。五、簡答題〔請將答案寫在答題紙上，每題5分，共30分〕1.簡述目前園藝植物生物技術(shù)的主要研究內(nèi)容。2.簡述PCR反響體系的主要成分和反響程序的關(guān)鍵步驟。3.Ti質(zhì)粒由哪幾個區(qū)域構(gòu)成？各區(qū)域的功能是什么？4.簡述基因克隆的策略5.植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法有哪些？6.分子標(biāo)記主要有哪些優(yōu)點？六、綜述題〔兩題任選一題，請將答案寫在答題紙上，共10分〕1.通過對園藝植物生物技術(shù)的學(xué)習(xí)，談?wù)勆锛夹g(shù)在園藝科學(xué)中的應(yīng)用與展望。2.如果現(xiàn)已證明園藝植物的某一重要農(nóng)藝性狀是單基因控制的質(zhì)量性狀，且發(fā)現(xiàn)了一個與控制該性狀的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記?，F(xiàn)有一傳統(tǒng)品種，此品種的其它性狀均十分優(yōu)良，唯獨該性狀表現(xiàn)不佳，試論述如何應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)的方法對該性狀進(jìn)行改進(jìn)？〔密封線內(nèi)不要答題〕………〔密封線內(nèi)不要答題〕………密………………封………………線……………專業(yè)______________________班級姓名______________學(xué)號f考試科目生物技術(shù)概論考試時間2023.11考試方式閉卷成績題號一二三四五核總分得分評卷人〔本試題總分值100分，考試時間120分鐘〕一、名詞解釋〔解釋以下名詞，每題2分，共20分〕1.基因：2.質(zhì)粒：3.同尾酶：4.RT-PCR：5.分子標(biāo)記：6.生物技術(shù)：7.基因文庫：8.植物遺傳轉(zhuǎn)化：9.選擇標(biāo)記基因：10.Southern印跡雜交：二、填空題〔不填或錯填者不得分，每空1分，共20分〕1.限制性內(nèi)切酶酶切DNA片斷后通常有兩類末端：和。2.在遺傳轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體中通常構(gòu)建有一些篩選基因或報告基因，如果實驗很成功，且檢測方法正確，那么以下基因的作用效果應(yīng)呈現(xiàn)的顏色分別是：LacZ基因重組子色菌斑；GUS呈色；GFP呈色。3.DNA復(fù)制時，新合成鏈的延伸方向是。4.植物遺傳轉(zhuǎn)化的主要方法是和。5.PCR包括三個步驟，即、和。6.根據(jù)作用方式及功能不同，啟動子可分成、和等3種類型。7.植物DNA的提取方法主要有兩種：法和法；DNA含量和純度分析方法也主要有兩種：法和法。8.目前常用的兩種Ti質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)化載體系統(tǒng)是和。三、選擇題〔答案錯選或未選者，試題不得分，每題2.0分，共20分〕1.ThemostimportantcontributionofWatsonandCrickis()A:ProteinstructuremodelB:RNAstructuremodelC:DNAisthegeneticmaterialD:DNAdouble-helixstructuremodel2.如果DNA一條鏈?zhǔn)?’-ATCGTACGGGTT-3’，那么能與其互補(bǔ)配對的另一條鏈可能是：〔〕A:5’-ATCGTACGGGTT-3’B:5’-AACCCGTACGAT-3’C:5’-TAGCATGCCCAA-3’〔密封線內(nèi)不要答題〕………密………………封………………線……………〔密封線內(nèi)不要答題〕………密………………封………………線……………專業(yè)______________________班級姓名______________學(xué)號f3.園藝植物生物技術(shù)的核心是：〔〕A:基因工程B:細(xì)胞工程C:酶工程D:發(fā)酵工程4.右以下圖中剪刀所在位置是DNA分子上的某一酶的酶切位點，長方形是探針結(jié)合部位，試問1、2、3三種DNA樣品用該酶/探針組合進(jìn)行RFLP分析能得到的雜交信號條帶分別是：〔〕A:1、2、1B:1、2、2C:1、1、1D:1、1、25.如果RAPD分析時所選用的隨機(jī)引物的序列為5’-ATCGTACGGGTT-3’，以下虛線局部為500-1000bp長的DNA區(qū)域，請分析其中能進(jìn)行2的指數(shù)倍擴(kuò)增的有：〔〕A:5’ATCGTACGGGTT————3’B:5’ATCGTACGGGTT————TAGCATGCCCAA3’C:5’ATCGTACGGGTT————TTGGGCATGCTA3’D:5’ATCGTACGGGTT————AACCCGTACGAT3’6.基于Southern雜交的分子標(biāo)記：〔〕A:RFLP標(biāo)記B:RAPD標(biāo)記C:SSR標(biāo)記D:SNP標(biāo)記7.常用的選擇標(biāo)記基因：〔〕A:GUS基因B:NPTII基因C:花青素基因D:GFP基因8.在基因操作中所用的限制性核酸內(nèi)切酶是指：〔〕A．I類限制酶B.II類限制酶C.III類限制酶D.核酸內(nèi)切酶E:繪制目標(biāo)性狀基因連鎖圖9.外源基因表達(dá)蛋白的檢測方法有：〔〕A:Southern雜交B:Western雜交C:PCR檢測D:Northern雜交10.以下不屬于現(xiàn)代生物技術(shù)研究的內(nèi)容有：〔〕A:有性雜交B:組織培養(yǎng)C:基因克隆D:遺傳轉(zhuǎn)化四、簡答題〔請將答案寫在答題紙上，每題6分，共30分〕1.簡述目前園藝植物生物技術(shù)的主要研究內(nèi)容。2.簡述PCR反響體系的主要成分和反響程序的關(guān)鍵步驟。3.Ti質(zhì)粒由哪幾個區(qū)域構(gòu)成？各區(qū)域的功能是什么？4.列舉基因工程中常用的工具酶有哪些？5.植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法有哪些？五、綜述題〔兩題任選一題，請將答案寫在答題紙上，共10分〕1.通過對園藝植物生物技術(shù)的學(xué)習(xí)，談?wù)勆锛夹g(shù)在園藝科學(xué)中的應(yīng)用與展望。2.試述遺傳標(biāo)記的主要類型。植物組織培養(yǎng)局部根本原理1、簡述植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是細(xì)胞全能性學(xué)說，即植物體的每一個細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。2、植物組織培養(yǎng)有哪些特點？〔1〕培養(yǎng)條件可以人為控制：組織培養(yǎng)采用的植物材料完全是在人為提供的培養(yǎng)基質(zhì)和小氣候環(huán)境條件下進(jìn)行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災(zāi)害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便于穩(wěn)定地進(jìn)行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。〔2〕生長周期短，繁殖率高：植物組織培養(yǎng)由于人為控制培養(yǎng)條件，根據(jù)不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養(yǎng)條件，因此生長較快。另外，植株也比擬小，往往20—30d為一個周期。所以，雖然植物組織培養(yǎng)需要一定設(shè)備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來說本錢低廉，且能及時提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗〔3〕管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動化控制：植物組織培養(yǎng)是在一定的場所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養(yǎng)、激素等條件，既利于高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動化控制生產(chǎn)。它是未來農(nóng)業(yè)工廠化育苗的開展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲害等一系列繁雜勞動，可以大大節(jié)省人力、物力及田間種植所需要的土地3、培養(yǎng)基的種類？〔1〕根據(jù)態(tài)相不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基〔2〕根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過程：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基〔3〕根據(jù)作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基〔4〕根據(jù)營養(yǎng)水平：根本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、改進(jìn)培養(yǎng)基。4、植物組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于哪些方面？〔1〕快速繁殖運用組織培養(yǎng)的途徑，一個單株一年可以繁殖幾萬到幾百萬個植株〔2〕種苗脫毒針對病毒對農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無病毒種苗〔3〕遠(yuǎn)緣雜交利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種〔4〕突變育種采用組織培養(yǎng)可以直接誘變和篩選出具抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白等優(yōu)良性狀的品種〔5〕基因工程主要研究DNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)，而基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后必須通過組織培養(yǎng)途徑才能實現(xiàn)植株再生〔6〕生物制品有些極其昂貴的生物制品，如抗癌首選藥物--紫杉醇等，可以用大規(guī)模培養(yǎng)植物細(xì)胞來直接生產(chǎn)5、固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比有何特點？優(yōu)點:操作簡便，通氣問題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究.缺點:培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸(即吸收)面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴(kuò)散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時培養(yǎng)物排出的一些代謝廢物，聚集在吸收外表，對組織產(chǎn)生毒害作用。6、論述植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)在組織培養(yǎng)中的作用？并列舉常見的種類(1)生長素類：主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，促進(jìn)細(xì)胞脫分化；促進(jìn)細(xì)胞伸長；誘導(dǎo)根的分化，促進(jìn)生根(2)IAA〔吲哚乙酸〕；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)(3〕細(xì)胞分裂素類：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。③抑制根的分化。抑制衰老，減少葉綠素分解，有保鮮效果。包括6—BA(6—芐基腺嘌呤)、Kt(沖動素)、Zt(玉米素)等。7、與常規(guī)苗相比，試管苗具有哪些特點？(1)生長細(xì)弱；(2)光合作用差(3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)對逆境的適應(yīng)和抵抗能力差8、簡述原生質(zhì)體作為遺傳操作和生理生化研究的材料有何特點？〔1〕沒有細(xì)胞壁，有利于體細(xì)胞融合、體細(xì)胞雜交、基因轉(zhuǎn)移和單細(xì)胞培養(yǎng)?！?〕原生質(zhì)體能比擬容易攝取外來的遺傳物質(zhì)。根本概念1、植物組織培養(yǎng)(planttissueculture)：是指用無菌方法使植物體的離體器官、組織和細(xì)胞在人為提供的條件下生長和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術(shù)的總稱，也叫植物克隆。亦稱為離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng)。2、脫分化〔dedifferentiation〕：將已分化組織的已停止分裂的細(xì)胞從植物體的抑制性影響下解脫出來，恢復(fù)細(xì)胞的分裂活性。一個成熟的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程叫脫分化。3、再分化〔redifferentiation〕：經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同的細(xì)胞類型，形成完整植株的過程。4、外植體(explant)：由活體〔invivo)植物體上切取下來的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等5、愈傷組織(callus)：在人工培養(yǎng)基上由外植體上形成的一團(tuán)無序生長狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。6、器官發(fā)生(organgenesis)：由愈傷組織或外植體誘導(dǎo)形成不定根或不定芽，再獲得再生植株的方法。7、胚狀體發(fā)生(embryogenesis)：是指在組織培養(yǎng)中起源于一個非合子細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過程〔經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5個時期〕，形成具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)，而發(fā)育成再生植株的途徑。8、細(xì)胞全能性〔celltotipotency〕：即植物體的每一個細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。9、母液〔motherliquid〕：是欲配制液的濃縮液。配成比所需濃度高10-100倍。母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。好處:①保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性②配制時的快速移取③便于低溫保藏。10、褐變(brownchange)：是指外植體在培養(yǎng)中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，有時使整個培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。11、玻璃化現(xiàn)象〔vitrificationphenomenon〕：在長期的離體培養(yǎng)繁殖時，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。12、消毒〔disinfection〕：指殺死、消除或充分抑制局部微生物，使之不再發(fā)生危害作用。13、滅菌(sterilization)：是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體外表和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。14、接種(inoculation)：在無菌條件下，用灼燒過的鑷子將外植體放到培養(yǎng)基上的操作過程。15、愈傷組織培養(yǎng)(callusculture):是指將母體植株上的外植體，接種到無菌的培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、生長和發(fā)育的一門技術(shù)。16、繼代培養(yǎng)(subculture)：愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。這個過程叫做繼代培養(yǎng)17、形態(tài)建成〔organogenesis〕：外植體在適宜的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化、再分化形成不定根〔adventitiousroots〕、不定芽〔adventitiousshoots〕或直接發(fā)育成形態(tài)完整的植物體的過程。18、體細(xì)胞胚〔somaticembryo〕又稱胚狀體〔embryoid〕：指在組織培養(yǎng)中，由一個非合子細(xì)胞(體細(xì)胞)，經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過程〔經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5個時期〕，形成的具有雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)。19、快速繁殖(微繁殖)(micropropagation)：用組織培養(yǎng)的方法，使植物的局部器官、組織迅速擴(kuò)大培養(yǎng)，并移植到溫室或農(nóng)田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。20、原生質(zhì)體融合(protoplastfusion)也稱體細(xì)胞雜交〔somatichybridization〕：就是使別離下來的不同親本的原生質(zhì)體，在離體條件下通過誘導(dǎo)發(fā)生的質(zhì)膜融合進(jìn)而細(xì)胞核融合，像性細(xì)胞受精作用那樣互相融合成一體的現(xiàn)象。21、原生質(zhì)體〔protoplast〕：是指除去了細(xì)胞壁后的裸露的植物細(xì)胞。22、無病毒苗〔virus-freeplantlets〕：是指不含該種植物的主要危害病毒，即經(jīng)檢測主要病毒在植物內(nèi)的存在表現(xiàn)陰性反響的苗木。根本方法1、一般組織培養(yǎng)的操作工序：〔1〕、培養(yǎng)器皿的清洗；〔2〕、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌；〔3〕、無菌操作——材料的外表滅菌和接種；〔4〕、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)；〔5〕、試管苗的馴化、移栽和初期管理。2、常用的培養(yǎng)基有哪些？說明其特點(1〕MS培養(yǎng)基：1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計的。是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。特點是無機(jī)鹽離子濃度較高h(yuǎn)ite培養(yǎng)基：無機(jī)機(jī)鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。(3)N6培養(yǎng)基：KNO3和〔NH4〕2SO4含量高，不含鉬。廣泛應(yīng)用于禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。(4〕B5培養(yǎng)基：主要特點是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。適宜雙子葉植物特別是木本植物的培養(yǎng)M—8P培養(yǎng)基：為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計的。其特點是有機(jī)成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素3、植物組織培養(yǎng)技術(shù)主要包括哪些環(huán)節(jié)？各環(huán)節(jié)的主要工作內(nèi)容？〔1〕培養(yǎng)基的配制及滅菌〔2〕外植體的選擇及滅菌〔3〕外植體的接種及培養(yǎng)〔4〕試管苗的馴化與移栽4、組織培養(yǎng)中常用的滅菌方法？分為物理的和化學(xué)的兩類，〔1〕物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(紫外線、超聲波、微波)、過濾和大量無菌水沖洗等措施；〔2〕化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。5、怎樣進(jìn)行培養(yǎng)基的高壓濕熱滅菌?方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到49kPa時，翻開放氣閥，放出空氣〔注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底〕，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。當(dāng)壓力表上升到達(dá)108kPa時，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃〔在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢〕，維持20-30min。6、如何對外植體進(jìn)行外表消毒？(1)將需要的材料用水洗干凈。(2)外表滅菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3)滅菌劑處理：0.1%升汞10分鐘、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15分鐘。(4)用無菌水沖洗3-5次左右7、在植物組織培養(yǎng)中，通過哪些途徑可以得到完整的植株？(1)外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗①同時長芽和根②先長芽，再長根③先長根，再長芽(2)外植體→胚狀體→試管苗(3)外植體→根、芽→試管苗。8、簡述愈傷組織培養(yǎng)在園藝植物育種中的應(yīng)用〔1〕、加快了園藝植物新品種和良種繁育速度；〔2〕、培育無病毒苗木；〔3〕、獲得倍性不同的植株；〔4〕、克服遠(yuǎn)緣雜交困難；〔5〕、利于種質(zhì)資源長期保存和遠(yuǎn)距離運輸；〔6〕、提供育種中間材料；〔7〕、誘發(fā)和離體篩選突變體；〔8〕、制造人工種子。9、植物脫毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？〔1〕莖尖培養(yǎng)脫毒：病毒在植物體內(nèi)的分布并不均勻，越靠近莖端的病毒的感染深度越低，生長點那么幾乎不含或含病毒很少〔2〕愈傷組織培養(yǎng)脫毒法：通過植物的器官和組織的培養(yǎng)，脫分化誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織，然后從愈傷組織再分化產(chǎn)生芽，長成小植株，可以得到無病毒苗〔3〕珠心胚培養(yǎng)脫毒：病毒一般不通過種子傳播，由珠心細(xì)胞發(fā)育成的胚再生的植株是無毒的，并具有與母本相同的遺傳特性?！?〕莖尖微體嫁接：將實生苗砧木在人工培養(yǎng)基上種植培育，再從成年無病樹枝上切取0.4—1.0mm莖尖，在砧木上進(jìn)行試管微體嫁接，以獲得無病毒幼苗。〔5〕花藥培養(yǎng)脫毒〔6〕熱處理脫毒：一些病毒對熱不穩(wěn)定，在高于常溫的溫度下〔35-40℃〕，即鈍化失活〔7〕化學(xué)處理：抑制或殺死病毒綜合能力1、無菌操作時應(yīng)注意哪些事項？(1)在接種4h前用甲醛熏蒸接種室；(2)在接種前15-20min，翻開超凈工作臺的風(fēng)機(jī)以及臺上的紫外燈；(3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋等；(4)上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面；(5)接種工具蘸95%酒精，灼燒；(6)接種時將試管斜著，使試管口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動，灼燒數(shù)秒鐘。接完種后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘。(7)接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；(8)接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺。2、論述離體培養(yǎng)可能出現(xiàn)的異常現(xiàn)象及防止措施？〔1〕污染：污染原因從病源分面主要有細(xì)菌和真菌和兩大類。預(yù)防措施：(1)減少或防止材料帶菌(2)外植體滅菌要徹底

(3)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌(4)布質(zhì)制品的滅菌(5)無菌室的消毒(6)操作人員一定要嚴(yán)格按照無菌操作的程序進(jìn)行接種。〔2〕、褐變：防止的措施有：選擇適宜的外植體及最正確培養(yǎng)基、連續(xù)轉(zhuǎn)移、加抗氧化劑、加活性劑。〔3〕、玻璃化現(xiàn)象，預(yù)防措施：①適當(dāng)控制培養(yǎng)基中無機(jī)營養(yǎng)成分；②適當(dāng)提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂濃度；③適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素量；④增加自然光照，控制光照時間；⑤控制好培養(yǎng)溫度；⑥增加容器通風(fēng)，最好進(jìn)行CO2施肥3、如何提高試管苗移栽的成活率？〔1〕試管苗的生理狀況應(yīng)選擇壯苗，以提高移栽后的成活率〔2〕參加植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長素〔3〕降低無機(jī)鹽的濃度〔4〕參加少量活性炭，尤其是用酸、堿和有機(jī)溶劑洗過的活性炭〔5〕環(huán)境因子適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件能提高移栽的成活率〔6〕移栽過程中讓試管苗從無菌向有菌逐漸過渡4、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生有哪些情況？〔1〕愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無根的芽或無芽的根；〔2〕先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；〔3〕先產(chǎn)生根，再從根基局部化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對于單子葉植物；〔4〕先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來形成一株小植株。少見。5、試管苗的生根培養(yǎng)時應(yīng)注意哪些方面？〔1〕用無機(jī)鹽濃度低的White及1／2，1／3或1／4MS、B5培養(yǎng)基〔2〕適當(dāng)加大生長素-NAA的濃度，不用或少用細(xì)胞分裂素。也可在無激素的培養(yǎng)基上生根?！?〕降低蔗糖的濃度到1.0-1.5%，以增強(qiáng)植株的自養(yǎng)能力。〔4〕參加1%左右的活性碳；以免培養(yǎng)基過硬〔5〕將光強(qiáng)度增加到3000-10000lux，以提高小植株的光合能力〔6〕光周期可用24小時光照或16小時，8小時黑暗以利于形態(tài)建成。6、如何純化別離的植物原生質(zhì)體并鑒定其活力？(1)原生質(zhì)體的純化①離心沉淀法：應(yīng)用原生質(zhì)體的比重大于溶液的性質(zhì)而使原生質(zhì)體沉于底部。②漂浮法：應(yīng)用滲透劑含量較高的洗滌液使原生質(zhì)體漂浮于液體外表。③界面法：選用兩種不同滲透濃度的溶液，使原生質(zhì)體介于兩種溶液之間。(2)原生質(zhì)體活力的測定①形態(tài)識別：形態(tài)上完整，呈圓形，含有飽滿的細(xì)胞質(zhì)，顏色鮮艷的即為存活的原生質(zhì)體。②染色識別1〕0.1%酚番紅或Evans藍(lán)染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。2〕雙醋酸鹽熒光素(FDA)染色法：在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質(zhì)體。7、原生質(zhì)體培養(yǎng)的方法有哪些？〔1〕液體淺層培養(yǎng)〔2〕平板法培養(yǎng)〔3〕懸滴法培養(yǎng)〔4〕雙層培養(yǎng)法〔5〕飼喂層培養(yǎng)8、原生質(zhì)體融合有哪幾種主要方法？〔1〕化學(xué)法誘導(dǎo)融合：硝酸鹽溶液〔2〕PEG結(jié)合高鈣-高pH誘導(dǎo)法：具體做法：在無菌條件下混合雙親原生質(zhì)體-----滴加PEG溶液，搖勻，靜置------滴加高鈣高pH溶液，搖勻，靜置------滴加原生質(zhì)體培養(yǎng)液洗滌數(shù)次-----離心獲得原生質(zhì)體細(xì)胞團(tuán)----篩選--------再生雜合細(xì)胞?！?〕電融合技術(shù)：將雙親原生質(zhì)體懸浮溶液混合后插入微電極，接通一定的交變電場，原生質(zhì)體極化后順著電場排列成珠狀，此時施與適當(dāng)強(qiáng)度的電脈沖，使原生質(zhì)體膜被擊穿而發(fā)生融合。9、目前鑒定脫毒苗的方法有哪些？各有何特點？〔1〕直接檢測法：直接觀察脫毒植株生長狀態(tài)是否異常，莖葉上有無特定病毒引起的可見病癥。〔2〕指示植物法：將一些對病毒反響敏感、病癥特征顯著的植物作為指示植物〔又稱鑒別寄主〕，利用病毒在其他植物上產(chǎn)生的枯斑作為鑒別病毒種類的方法。這種方法條件簡單，操作方便，為一種經(jīng)濟(jì)而有效的鑒定方法〔3〕抗血清鑒定法：用抗血清鑒定未知病毒的種類。這種方法特異性高，測定速度快。所以抗血清法成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一?！?〕分子生物學(xué)鑒定法：①雙鏈RNA法(dsRNA)：受RNA病毒侵染的植物，有病毒的雙鏈RNA(dsRNA)存在；健康植株那么無。②互補(bǔ)DNA(cDNA)檢測法：用人工合成的能與病毒堿基互補(bǔ)DNA，作為探針，與從待測植物中提取RNA進(jìn)行DNA-RNA分子雜交。有熒光標(biāo)記的證明有病毒存在〔5〕電鏡檢查法：可以直接觀察病毒，檢查出有無病毒存在，了解病毒顆粒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)，又可以鑒定病毒的種類。優(yōu)點是方法先進(jìn)、靈敏度高、能在植物粗提取液中定量測定病毒。但需一定的設(shè)備和技術(shù)?；蚬こ叹植扛靖拍?、基因：能夠表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列，是決定遺傳性狀的功能單位。

2、基因組：細(xì)胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。3、基因工程：有目的的通過分子克隆技術(shù)，人為的操作改造基因，改變生物遺傳性狀的系列過程。

4、轉(zhuǎn)化：指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程。

5、感染：以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。

6、轉(zhuǎn)導(dǎo)：指以噬菌體為載體，在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移DNA的過程，有時也指在真核細(xì)胞之間通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA的過程。

7、轉(zhuǎn)染：指病毒或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程。

8、DNA變性：在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價鍵那么不受影響。

9、DNA復(fù)性：當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條DNA鏈又可以通過堿基互補(bǔ)配對結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。

10、分子克?。涸隗w外對DNA分子按照即定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入適宜宿主，使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。11、RFLP：即限制性片段長度多態(tài)性，個體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。假設(shè)因此而改變了限制性內(nèi)切酶的酶切位點那么可導(dǎo)致相應(yīng)的限制性片段的長度和數(shù)量發(fā)生變化，稱為RFLP。12、PCR技術(shù)：聚合酶鏈反響，它是一種模擬天然DNA復(fù)制過程，在有DNA模板、DNA聚合酶〔Taq酶〕、RNA引物和四種dNTP的情況下，通過高溫變性〔90℃－95℃，1－2min〕,低溫退火〔25℃－37℃，1－2min〕,中溫延伸〔60℃－75℃，90sec-5min〕,這樣反復(fù)循環(huán)的過程中，在體外擴(kuò)增特異性DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。13、RT-PCR：反轉(zhuǎn)錄PCR，先將mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后再以cDNA為模板，用PCR方法加以擴(kuò)增。14、同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，稱為同尾酶。15、克隆載體：為使插入的外源DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計的載體稱為克隆載體。16、表達(dá)載體：為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成肽鏈而特意設(shè)計的載體稱為表達(dá)載體。17、質(zhì)粒：細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中獨立于細(xì)菌染色體之外能自主地進(jìn)行復(fù)制的遺傳單位。18、染色體組性：染色體組型是指生物體細(xì)胞所有可測定的染色體特征總稱。包括染色體總數(shù)、染色體組數(shù)、每條染色體大小和形態(tài)、著絲點的位置等。19、帶型：用染色體分帶技術(shù)體所產(chǎn)生的明顯的染色帶〔暗帶〕和未染色的明帶相間的帶紋，使染色體呈現(xiàn)鮮明的個體性的技術(shù)。20、RAPD：隨機(jī)引物擴(kuò)增多態(tài)性DNA〔RandomAmplifiedPolymorphicDNA，RAPD〕是在PCR技術(shù)的根底上，以一系列不同的，隨機(jī)排列的寡聚核苷酸單鏈為引物，與變性后的模板鏈退火，在DNA聚合酶的作用下，合成一段新的互補(bǔ)DNA鏈。21、衛(wèi)星DNA：真核生物基因組酶切、離心后，在主帶附近會出現(xiàn)〔AT〕含量很高的簡單高度重復(fù)序列。22、AFLP：擴(kuò)增片段長度多態(tài)性Amplifiedfragmentlengthpolymorphism〔AFLP〕是在隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性〔RAPD〕和限制性片段長度多態(tài)性〔RFLP〕技術(shù)上開展起來的DNA多態(tài)性檢測技術(shù)。23、基因芯片技術(shù)：是指通過微陣列(Microarray)技術(shù)將高密度DNA片段陣列通過高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相外表，以熒光標(biāo)記的DNA探針，借助堿基互補(bǔ)雜交原理，進(jìn)行大量的基因表達(dá)及監(jiān)測等方面研究的最新革命性技術(shù)。24、Southern印跡雜交：是根據(jù)毛細(xì)管作用的原理，使在電泳凝膠中別離的DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當(dāng)?shù)臑V膜上，然后通過與已標(biāo)記的單鏈DNA或RNA探針的雜交作用以檢測這些被轉(zhuǎn)移的DNA片段的技術(shù)。25、Northern印跡雜交：指將RNA分子變性及電泳別離后、從電泳凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物上進(jìn)行核酸雜交的方法．又稱為NorthernRNA印跡雜交等。26、限制性核酸內(nèi)切酶(restrictionendonuclease,RE)：是識別DNA的特異序列(4~8bp),并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。根本技術(shù)1、介紹限制性內(nèi)切酶的切割方式限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是〔在對稱軸5'側(cè)切割產(chǎn)生5'粘端〕、〔在對稱軸3'側(cè)切割產(chǎn)生3'粘端〔在對稱軸處切割產(chǎn)生平段〕。2、列舉基因工程常用工具類工具酶功能限制性核酸內(nèi)切酶識別特異序列，切割DNADNA連接酶催化DNA中相鄰的5′磷酸基和3′羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使DNA切口封合或使兩個DNA分子或片段連接DNA聚合酶Ⅰ合成雙鏈cDNA分子或片段連接缺口平移制作高比活探針DNA序列分析填補(bǔ)3′末端Klenow片段又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53聚合、35外切活性，而無53外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈DNA3末端標(biāo)記等反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA替代DNA聚合酶I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或DNA序列分析多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5′羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3′羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基3、簡介目的基因獲取方法⑴.化學(xué)合成法：目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列。⑵.基因組DNA文庫(genomicDNAlibrary)⑶.cDNA文庫(cDNAlibrary)⑷.聚合酶鏈反響(polymerasechainreaction,PCR)4、探針的標(biāo)記法？答：⑴、缺口平移法：此法是利用適當(dāng)濃度的DNaseⅠ在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈，造成單鏈切口。切口處產(chǎn)生一個5末端和3末端，3末端就可以作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互補(bǔ)的DNA單鏈為摸板，依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上，合成新的DNA單鏈；同時DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5末端逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的局部核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。⑵、隨機(jī)引物法：隨機(jī)引物是人工合成的長度為6個寡核苷酸殘基的寡聚核苷酸片段的混合物。對于任何一個用作探針的DNA片段，隨機(jī)引物混合物中都會有一些六核苷酸片段可以與之結(jié)合，起到DNA合成引物的作用。將這些引物與變性的DNA單鏈結(jié)合后，以4種dNTP〔其中一種是標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP〕為底物，合成與探針DNA互補(bǔ)的切帶有標(biāo)記物的DNA探針。⑶、PCR標(biāo)記法：在PCR反響底物中，將一種dNTP換成標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP，這樣標(biāo)記的dNTP就在PCR反響的同時摻入到新合成的DNA鏈上。⑷、末端標(biāo)記法：只是將DNA片段的一端進(jìn)行標(biāo)記。5、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答：〔1〕、常用的工具酶①、

限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。②、

DNA連接酶：將兩段DNA分子拼接起來的酶。③、

DNA聚合酶：催化單核苷酸鏈延伸。④、

逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱互補(bǔ)DNA。⑤、

末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。⑥、

堿性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團(tuán)。⑦、

依賴DNA的RNA聚合酶：識別特異性啟動子，RNA轉(zhuǎn)錄。

〔2〕、良好載體的條件①、必須有自身的復(fù)制子；②、載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點，即多克隆位點，以供外源DNA插入；③、載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子；④、載體分子必須有足夠的容量；⑤、可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞；⑥、對于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動子、前導(dǎo)順序、增強(qiáng)子、加尾信號等DNA調(diào)控元件。6、舉出基因文庫構(gòu)建中對重組子篩選的3種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選或PCR篩選、差式篩選、DNA探針

多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因〔抗氨芐青霉素、四環(huán)素〕。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。

在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質(zhì)粒含LacZ基因〔編碼β半乳糖苷酶〕該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。7、介紹基因工程的宿主細(xì)胞必須具備的條件。便于重組DNA分子的導(dǎo)入；能使重組DNA分子穩(wěn)定存在于細(xì)胞中；便于重組體的篩選；遺傳性穩(wěn)定高，易于擴(kuò)大培養(yǎng)或發(fā)酵生長；平安性高，無致病性，不會對外界環(huán)境造成生物污染；有利于外源基因蛋白表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的積累，或促進(jìn)外源基因的高效分泌表達(dá)。在遺傳密碼的應(yīng)用上無明顯偏倚性；具有較好的翻譯后加工機(jī)制，便于真核目的基因的高效表達(dá)；在理論研究和生產(chǎn)實踐上有較高的應(yīng)用價值。綜合能力1、PCR的根本原理？答：PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反響，根本原理是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保存復(fù)制的機(jī)理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退火，然后耐熱DNA聚合酶以dNTP為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈DNA。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸３個步驟構(gòu)成PCR反響的一個循環(huán)，此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行，就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。DNA模板變性：模板雙鏈DNA?單鏈DNA，94℃。退火：引物＋單鏈DNA?雜交鏈，引物的Tm值。引物的延伸：溫度至70℃左右，TaqDNA聚合酶以４種dNTP為原料，以目的DNA為模板，催化以引物３’末端為起點的5’→3’DNA鏈延伸反響，形成新生DNA鏈。新合成的引物延伸鏈經(jīng)過變性后又可作為下一輪循環(huán)反響的模板PCR，就是如此反復(fù)循環(huán)，使目的DNA得到高效快速擴(kuò)增。2、核酸分子雜交的原理？答：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下〔適宜的溫度及離子強(qiáng)度等〕堿基互補(bǔ)配對結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及在復(fù)性過程中個分子間鍵的形成和斷裂。雜交的雙方是待測核酸和序列。3、藍(lán)-白篩選的原理？答：某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點的DNA序列。這些位點上如果沒有克隆外源性DNA片段，在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac-的大腸桿菌后，質(zhì)粒攜帶的半乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶，參加人工底物X-gal和誘導(dǎo)劑IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌落。如果在多克隆位點上插入外源DNA片段，將使lacZ基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結(jié)果菌落出現(xiàn)白色。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。4、SANGER雙脫氧鏈終止法的原理？答：DNA鏈中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯鍵連接，合成DNA所用的底物是2’-脫氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們在脫氧核糖的3’位置缺少一個羥基。在DNA聚合酶作用下通過三磷酸基團(tuán)摻入到延伸的DNA鏈中，但由于沒有3’羥基，不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。在DNA合成反響混合物的4種普通dNTP中參加少量的一種ddNTP，鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競爭，產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈，其長度取決于引物末端到出現(xiàn)過早鏈終止位置間的距離。在4組獨立酶反響中分別采用4種不同的ddNTP，結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸，它們將分別終止于模板鏈的A、C、G或T位置。5、PCR引物設(shè)計的根本要求？答：⑴、引物長度一般為15～30個核苷酸。過短影響PCR的特異性，過長會提高相應(yīng)退火溫度，使延伸溫度超過TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產(chǎn)物的生成。⑵、引物的堿基盡可能隨機(jī)，防止出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。3’端不應(yīng)有連續(xù)3個G和C。否那么會使引物和模板錯誤配對。G+C含量一般占45％-55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值,Tm值計算公式：Tm＝4(G+C)+2(A+T)⑶、引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以防止折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。引物的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過3bp。⑷、兩個引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)防止3’端的互補(bǔ)重疊。⑸、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不超過70％，引物3’末端連續(xù)8個堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否那么易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。⑹、引物3’端堿基是引發(fā)延伸的起點，因此一定要與模板DNA配對。引物3’端最正確堿基選擇是G和C，形成的堿基配比照擬穩(wěn)定。⑺、引物與模板結(jié)合時，引物的5’端最多可以游離十幾個堿基而不影響PCR反響的進(jìn)行。⑻、引物的5’端可以修飾，如附加限制酶位點，引入突變位點，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標(biāo)記，參加其它短序列包括起始密碼子、終止密碼子等6、什么是DNA重組技術(shù)，典型的DNA重組實驗的根本步驟？DNA重組技術(shù)也稱為〔基因克隆〕或〔分子克隆〕。最終目的是〔把一個生物體中的遺傳信息DNA轉(zhuǎn)入另一個生物體〕。典型的DNA重組實驗通常包含以下幾個步驟：

①提取供體生物的目的基因〔或稱外源基因〕，酶接連接到另一DNA分子上〔克隆載體〕，形成一個新的重組DNA分子。

②將這個重