食品中藥物殘留的檢測

第六章

食品中藥物殘留

的檢測

1第一節(jié)藥物殘留概述一、藥物殘留的概念及分類

現(xiàn)代化的畜禽生產中，普遍使用抗生素類藥物。在農業(yè)生產上，抗生素可以防治病蟲害，刺激植物生長，提高產量。造成了抗生素在食品中的殘留。

2為了到達投入少量的飼料而獲得更多畜產品的目的，往往使用激素來促進畜禽的生長發(fā)育。常用于食品動物的激素為性激素具有促進生長發(fā)育、增加體重和同步發(fā)情等作用，廣泛用于畜牧業(yè)生產中，通過飼料添加劑或皮下置入等方法而攝入牲畜體內，造成了肉食品中激素殘留而影響人體健康。食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，引起了世界各國的關注。因此，對食品中藥物殘留情況，必須加以監(jiān)測，以保證食用平安。3藥物使用后，局部藥物被分解或直接排出體外，另一局部將殘留在畜禽體內，這種殘留稱為藥物殘留(residueofdrugs，residueofveterinarydrugs)。4主要殘留藥物有以下幾類：

1．抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰樂菌素等。

2．呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。

3．磺胺藥類；4.抗球蟲藥；5.激素藥類；6.驅蟲藥類。5二、藥物對食品的污染及危害(一)藥物對食品的污染1．預防和治療畜禽疾病2．作為飼料添加劑使用3．保鮮：在食品的保鮮過程中，有時參加某種抗生素以抑制微生物的生長、繁殖，使用后也會對食品造成污染。6〔二〕藥物的殘留對人體的危害藥物雖然有預防和治療疾病的作用，但同時對機體也產生有害的作用。藥物與毒物之間并無明顯的界限，有些毒物在適當?shù)膭┝繒r具有治療作用，而所有藥物過量或應用時間過長，均有毒性。殘留的藥物對人體的不良影響主要有：1．毒性作用2．使某些細菌產生抗藥性3．過敏反響4．造成菌群失調5．致癌作用：現(xiàn)已證明殘留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。7三、各種藥物的使用原那么〔一〕合理配伍用藥畜禽發(fā)生疾病以后要正確診斷，合理用藥，能用一種藥的情況下不用多種藥?！捕嘲磭乙?guī)定的范圍、劑量使用藥物各國政府都嚴格規(guī)定了各種藥物的使用條件。多數(shù)國家規(guī)定對生命期短的食用動物禁止應用雌激素。8〔三〕使用獸用專用藥物一些國家規(guī)定，但凡人類經常使用的抗生素及其藥物不能作為畜禽飼料添加劑。世界衛(wèi)生組織不主張用鏈霉素飼喂動物，以免產生耐藥性菌株?！菜摹骋幸欢ǖ男菟幤谒^的休藥期是指食品動物從停止給藥到許可屠宰或它們的產品許可上市的間隔時間。此時間的規(guī)定是根據(jù)上述物質在動物體內代謝的消除率和殘留量不致影響人體健康為依據(jù)的。9第二節(jié)食品中抗生素的測定抗生素種類繁多，結構復雜，測定方法各不相同。因而給檢測工作帶來了許多困難?？股氐臏y定方法進展很快。主要可分為微生物測定法，化學測定法和物理測定法三大類。10其中以微生物測定法應用較廣。因其測定原理基于抗生素對微生物的生理機能和代謝作用的抑制，所用試劑數(shù)量少，儀器簡單。如牛乳中TTC測定法，肉中四環(huán)素杯蝶測定法都屬于微生物分析法，但這類方法測定時間較長，且結果誤差較大。11化學測定法和物理測定法那么利用抗生素中某些基團的特殊性質或反響來測定其含量的分析方法。包括比色法、熒光分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法。12一、高效液相色譜HPLC〔一〕高效液相色譜法的特點1．別離效能高2．選擇性高3．檢測靈敏度高4．分析速度快對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子質量大的有機物原那么上都可用HPLC進行別離、分析。目前已廣泛應用于化工、食品、醫(yī)藥、生化、衛(wèi)生、環(huán)境保護和高能化合物等生產和科研工作中。13二、四環(huán)素類抗生素殘留量的測定食品中四環(huán)素類抗生素的測定多采用微生物法?！惨弧吃順悠方浱崛?，用離子交換樹脂別離，甲醇溶劑洗脫，經濃縮，殘渣用Mcllvaine緩沖液溶解，經熒光鑒定，然后用微生物法進行定量測定。本方法的最低檢出量為0.05mg/kg。14〔二〕其它抗生素也可用此法進行測定，只是試驗的菌種不同或培養(yǎng)基不同。測定青霉素為金黃色葡萄球菌，鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌〔6633〕，氯霉素為卵黃色八疊球菌〔9341〕，新生霉素為白色葡萄球菌。15三、鏈霉素殘留量的測定〔比色分析法〕〔一〕原理在酸性條件下，鏈霉素可與二硝基苯肼反響生成黃色的鏈霉素二硝基苯腙；多余的試劑經乙酸丁酯提取除去后，于430nm波長處測吸光度，以標準曲線求出樣品中鏈霉素的含量。16四、鮮乳中抗生素殘留量的測定〔TTC試驗〕〔一〕原理當乳中含有抗生素時，標準菌株嗜熱鏈球菌的生長受到抑制，不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑〔TTC〕復原為無色。反之，當乳中抗生素不存在時，參加的標準菌株，就會大量生長繁殖，而且將TTC復原為紅色化合物。其紅色強度與細菌數(shù)量成正比。本法對各種抗生素的最低檢出量：青霉素為0.004IU/mL，鏈霉素為0.5IU/mL，慶大霉素為0.4IU/mL17〔二〕本卷須知1.本法的正確性與菌種的活力有密切關系。如菌種活力減弱時，應屢次反復傳代加強活力。2.每次檢驗每個樣品應一式二份，另外要作陰性、陽性對照各2管，陰性對照管作無抗生素乳9mL，陽性對照管用無抗生素乳9mL加抗生素。3.水浴培養(yǎng)要避光，保持37℃，水面高于被檢樣品，判斷要迅速；檢樣經80℃水浴加熱5min，要嚴格掌握。4.制備培養(yǎng)基的乳要絕對無抗生素存在；操作所用試管、吸管均須經滅菌。18第三節(jié)食品中激素的測定由于動物性食品中性激素的含量極微，所以一般的測定方法受到了限制，較常用的方法有薄層色譜法、熒光分析法、氣相色譜法和高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法具有更大的優(yōu)越性，并有取代其它方法之勢。一、性激素總量的測定〔薄層色譜法〕〔一〕原理樣品中的性激素經有機溶劑提取、濃縮，在硅膠G薄層板上點樣、展開后，以硫酸顯色，與標準斑點進行比較，從而到達定性和半定量的目的。19硅膠H硅膠中未參加粘合劑硅膠G硅膠中參加粘合劑石膏硅膠S硅膠中參加粘合劑淀粉硅膠HF254硅膠H中參加波長254nm熒光物質硅膠GF254硅膠G中參加波長254nm熒光物質常見的幾種硅膠吸附劑20〔二〕本卷須知1.薄層色譜法可用于性激素的鑒別、半定量測定以及含量測定前的別離。2.由于性激素的種類多，故所用的溶劑系統(tǒng)、吸附劑、展開劑和顯色劑不能一概而論?？筛鶕?jù)具體情況，挑選效果最正確者使用。21二、雌激素殘留量的測定〔包括己烯雌酚的測定〕〔熒光分光光度法)〔一〕熒光分光光度法1.原理樣品中雌激素經鹽酸水解為甾體綴合物，用有機溶劑提取后，再經硫酸處理，在紫外光照射下，產生藍色熒光；其激發(fā)波長542nm，發(fā)射波長560nm，根據(jù)熒光強度，可測定雌激素的含量。222.本卷須知(1)本法測定的是雌激素的總量，包括雌酮、雌二醇和雌三醇。(2)操作過程中參加氫醌，可防止熒光產物氧化，增進熒光的穩(wěn)定性；二氯甲烷溶劑中參加對—硝基苯酚也起增進熒光穩(wěn)定性的作用。(3)因為雌激素有酚羥基存在而呈弱酸性，用碳酸氫鈉緩沖液〔pH10.5〕洗滌，可將那些強酸性物質洗掉。23(4)測定中用NaOH振搖，可使雌激素轉入NaOH液層，而中性甾體仍留在有機相中，起到去除雜質的作用。(5)在作乙醚提取之前，參加固體碳酸氫鈉調節(jié)pH至10，是乙醚定量提出雌激素的關鍵。24(二〕液相色譜法1.原理試樣勻漿后，以甲醇提取過濾，注入HPLC柱中，以紫外檢測器鑒定。于波長230nm處測定吸光度，同條件下繪制工作曲線，己烯雌酚含量與吸光度值在一定濃度范圍內成正比，試樣與工作曲線比較定量。本法適用于新鮮雞肉、牛肉、豬肉、羊肉中己烯雌酚殘留量的測定。252.分析步驟〔1〕提取及凈化：甲醇〔2〕色譜條件〔3〕繪制標準曲線〔4〕測定263.本卷須知〔1〕對主要影響因素甲醇、磷酸二氫鈉、p