N-芴甲氧羰基-蛋氨酸

1N-芴甲氧羰基-蛋氨酸范圍本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-蛋氨酸的技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期。本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-蛋氨酸。分子式：C20H21NO4S結(jié)構(gòu)式：相對分子量：371.45（按2019年國際相對原子質(zhì)量）2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》3術(shù)語和定義本文件無術(shù)語和定義。4技術(shù)要求應(yīng)符合表1的要求。2表1技術(shù)要求要求外觀白色至類白色粉末溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應(yīng)澄清透明鑒別（IR）供試品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致純度（HPLC）≥99.0%有關(guān)物質(zhì)（HPLC）Fmoc-Met（O）-OH≤0.2%Fmoc-OH≤0.2%Fmoc-β-Ala-OH≤0.2%Fmoc-β-Ala-Met-OH≤0.2%Fmoc-Met-Met-OH≤0.2%Fmoc-Osu≤0.2%未知雜質(zhì)≤0.2%游離氨基酸(TLC)異構(gòu)體(Fmoc-D-Met-OH)（HPLC）水分（KF)≤1.0%比旋光度[20/D]-30.0°±3.0°（c=1，DMF）含量（滴定）≥98.0%殘留溶劑乙酸乙酯（HS-GC）≤5000ppm丙酮（HS-GC）≤5000ppm乙醇（HS-GC）≤5000ppm醋酸（IC）≤200ppm5試驗方法本試驗所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純試劑和純化水。5.1外觀采用目視法測定。5.2溶解性35.2.1儀器50ml具塞比色管。5.2.2試劑DMF。5.2.3操作方法稱取本品約3.7g，置于一個干燥潔凈的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超聲溶解后應(yīng)澄清透5.3鑒別（IR）5.3.1儀器紅外光譜儀、電子天平。5.3.2測定方法取供試品適量，按照紅外光譜儀操作規(guī)程進(jìn)行測定，本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致。5.4純度（HPLC）5.4.1儀器高效液相色譜儀、電子天平。5.4.2試劑乙腈（色譜級）、甲醇（色譜級）、三氟醋酸、高純水。5.4.3色譜條件色譜條件應(yīng)符合表2的要求。4表2色譜條件設(shè)定參數(shù)設(shè)定值色譜柱型號：EclipsePlusC18（或等效的色譜柱）規(guī)格：4.6mm*100mm，3.5um流動相A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）洗脫方式梯度流速1.0ml/min進(jìn)樣體積20μl柱溫30℃檢測波長220nm運(yùn)行時間35min稀釋劑梯度洗脫方案應(yīng)符合表3要求。表3梯度洗脫方案時間（min）流動相A（%）流動相B（%）075253059530留時間應(yīng)參考表4。5表4保留時間保留時間（min)相對保留備注Fmoc-Met（O）-OH7.469雜質(zhì)Fmoc-OH10.448雜質(zhì)Fmoc-β-Ala-OH10.628雜質(zhì)Fmoc-β-Ala-Met-OH11.313雜質(zhì)Fmoc-Met-OH13.872主峰Fmoc-Met-Met-OH14.450雜質(zhì)Fmoc-Osu14.852雜質(zhì)5.4.4試驗步驟供試品溶液的配制取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。測定分別進(jìn)稀釋劑空白和供試品溶液各1針，按照5.4.3的色譜條件進(jìn)行測定。5.4.5定量方法以峰面積歸一化法計算純度和雜質(zhì)。5.5游離氨基酸(TLC)5.5.1儀器硅膠G薄層板、層析缸。5.5.2試劑正丁醇、冰醋酸、甲醇、茚三酮、0.5%茚三酮乙醇溶液。5.5.3分析步驟對照品溶液的配制取L-甲硫氨酸約0.01g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量水溶解后定容至刻度，搖勻，做為對照品溶液。濃度：0.1mg/ml。供試品溶液的配制6取本品約1.0g，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加適量甲醇溶解后定容至刻度，搖勻，做為供試品溶液。濃度：100mg/ml。點(diǎn)板精密吸取上述2種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用用正丁醇：冰醋酸：水(4：1：3）（v/v/v)為展開劑，展開，晾干。顯色噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃烘烤加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。結(jié)果判定對照品溶液應(yīng)顯一個清晰的斑點(diǎn)，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。5.6異構(gòu)體(HPLC)5.6.1儀器高效液相色譜儀、電子天平。5.6.2試劑乙腈、甲醇（色譜級）、醋酸、醋酸銨。5.6.3色譜條件色譜條件應(yīng)符合表5的要求。7表5色譜條件設(shè)定參數(shù)設(shè)定值色譜柱型號：PhenomenexLux5umCellulose-1規(guī)格：4.6mm*25cm，5um流動相0.1%TFA-水：乙腈=40：60(v/v)洗脫方式等度流速1.0ml/min進(jìn)樣體積5μl柱溫30℃檢測波長254nm運(yùn)行時間稀釋劑保留時間應(yīng)參考下列要求：——Fmoc-L-Met-OH：12.0min——Fmoc-D-Met-OH：10.6min5.6.4試驗步驟對照品溶液的配制取消旋體約（Fmoc-DL-Met-OH）50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。供試品溶液的配制取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。測定取稀釋劑溶液、供試品溶液和對照品溶液各進(jìn)1針，按照5.6.3的色譜條件進(jìn)行測定。5.6.5定量方法以峰面積歸一化法計算異構(gòu)體（Fmoc-D-Met-OH）的含量。5.7水分（KF)5.7.1儀器分析天平、自動水分測定儀。85.7.2試劑卡爾費(fèi)休氏試劑、無水甲醇。5.7.3操作方法取本品約0.2~0.5g，按照水分測定儀操作規(guī)程進(jìn)行測定。5.8比旋光度5.8.1儀器旋光儀、電子天平。5.8.2試劑DMF。5.8.3操作方法稱取本品約1.0g，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，搖勻。按照旋光測定儀操作規(guī)程進(jìn)行測定。5.8.4計算公式比旋度[20/D]=---------------式中:α——為測得的旋光度；l——為測定管的長度，dm；c——為100ml溶液中含有被測物質(zhì)的重量，g/100ml。5.9含量（滴定）5.9.1試劑和溶液應(yīng)包含下列試劑和溶液：——中性甲醇：取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯淡紅色，保持30s不褪?！?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L)——酚酞指示劑5.9.2操作方法取本品約0.7g，精密稱定，置于一個干燥潔凈的150ml錐形瓶中，加入50ml中性甲醇，振搖使供9試品溶解后加2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯粉紅色，并保持30秒鐘不褪色；記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。5.9.3計算公式c×V×0.37145含量%=-------------------------×100m式中：c——為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V——為供試品消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；0.37145——為1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1000mol/L]相當(dāng)于Fmoc-Cys(Trt)-OH的質(zhì)量；m——為供試品的重量，g。5.9.4允許誤差取兩次平行實驗結(jié)果的平均值為測定結(jié)果，兩次平行實驗結(jié)果之間的RSD不得大于0.3%。6檢驗規(guī)則6.1檢驗分類產(chǎn)品的檢驗分為出廠檢驗和型式檢驗。6.2組批以相同材料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，每批產(chǎn)品不應(yīng)超過150t。6.3抽樣6.3.1固體產(chǎn)品按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》執(zhí)行。6.3.2將采樣品置于干燥清潔，取固體樣品1000g,分別裝于2個潔凈、干燥的容器瓶中，密封并貼上標(biāo)簽，注明生產(chǎn)廠名稱、產(chǎn)品名稱、批量、取樣日期等，一份檢測使用，一份用于留樣。6.4出廠檢驗6.4.1產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)本公司質(zhì)檢部門按本標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗，檢驗合格后方可出廠。6.4.2出廠檢驗項目為感官要求、溶解性、鑒別、純度、游離氨基酸、異構(gòu)體、水分、比旋光度、含量（滴定）。6.5型式檢驗6.5.1每年進(jìn)行一次型式檢驗，有下列情況之一時，亦須進(jìn)行型式檢驗：——更換主要設(shè)備或主要工藝；——長期停產(chǎn)再恢復(fù)生產(chǎn)時；——出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗有較大差異時;——國家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行抽查時。6.5.2型式檢驗項目為要求中的全部項目。6.6判定規(guī)則6.6.1出廠檢驗時，檢驗結(jié)果應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。如有不合格項，允許加倍抽樣對不合格項進(jìn)行復(fù)驗，若仍不合格，則判定產(chǎn)品為不合格，產(chǎn)品不得出廠。6.6.2型式檢驗時，若有2項不合格，判為不合格；若有1項不合格，允許加倍抽樣進(jìn)行復(fù)驗。復(fù)驗合格，判定為合格；若加倍檢驗中仍有一項不合格，則判定該批產(chǎn)品不合格。7標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期7.1標(biāo)志7.1.1銷售包裝上應(yīng)至少標(biāo)有以下內(nèi)容：——產(chǎn)品名稱；——產(chǎn)品批號；——商品責(zé)任單位名稱及地址；——產(chǎn)品凈重；——產(chǎn)品生產(chǎn)日期和復(fù)檢期；——執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號；——產(chǎn)品合格標(biāo)識。7.1.2包裝箱上的包裝儲運(yùn)圖示標(biāo)志按GB/T191的規(guī)定選擇使用。7.1.3標(biāo)志應(yīng)清晰