農(nóng)藥分析課件

農(nóng)藥分析取樣理論與方法分析採樣的理論與方法基本概念採樣理論（samplingtheory）

是指如何進(jìn)行試樣採集的數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)理論。怎樣通過局部採樣在統(tǒng)計(jì)意義上盡可能代表總體，是採樣理論和方法所研究的內(nèi)容。分析化學(xué)中常用的採樣方法包括固體物質(zhì)的採樣方法、動態(tài)過程的採樣方法和品質(zhì)檢驗(yàn)的採樣方法。採樣常數(shù)（samplingconstants）為表徵實(shí)驗(yàn)室樣本的均衡性，或考慮樣本的分隔效應(yīng)，Ingamell和Visman分別定義了幾個採樣常數(shù)，以便更好的描述採樣特徵。

代表性採樣（representativesampling）

一般指特定的分析專案所涉及的採樣。如按照環(huán)保部門規(guī)定採集廢水。代表性採樣是分層採樣的特殊情況。這種情況可以對目標(biāo)成分提供總體均值的無偏估計(jì)。比如長江邊有由於個農(nóng)藥廠，採樣規(guī)定在工廠廢水排水口處進(jìn)行，或者在下遊0.5km處進(jìn)行。若在上游採樣或者下游無限遠(yuǎn)處進(jìn)行，就沒有代表意義。分層採樣（stratifiedsampling）分析對象可以劃分成若干採樣單元時，隨機(jī)採樣可以是總體的全體採樣，也可以是分層或分步採樣。分層採樣是事先將分析對象劃分成不同的部分或?qū)?，然後對不同的層次進(jìn)行隨機(jī)採樣。比如對學(xué)生視力情況的採樣，必須分為小學(xué)生、中學(xué)生和大學(xué)生幾個層次。如果不分層次，籠統(tǒng)的在所有學(xué)生中採樣，就不能說明實(shí)際問題。系統(tǒng)採樣（systematicsampling）系統(tǒng)採樣指為檢驗(yàn)?zāi)承┫到y(tǒng)假設(shè)而採集的試樣。如生產(chǎn)或其他過程中成分隨時間、溫度的變化而在空間變化。一般是間隔一定的區(qū)間（時間、空間、區(qū)域）採樣。間隔不一定是等距的，有時事先可預(yù)期總體成分是不均勻的，系統(tǒng)採樣要儘量減少這種不均勻性的影響。又比如分析中國人民的學(xué)歷層次，大學(xué)和貧困山區(qū)是絕對不一樣，大學(xué)和貧困地區(qū)在中國所占比例也不一樣，採樣時就要考慮在大學(xué)中採集多少點(diǎn)（樣），貧困地區(qū)採集多少點(diǎn)（樣）。最小採樣數(shù)目（

minimumnumberofsamples）採樣理論中，在給定採樣方差的條件下的最小採樣量，以品質(zhì)計(jì)。比如一噸產(chǎn)品，分析其合格率，如果誤差規(guī)定不超過0.1%，應(yīng)該至少取多少克，才能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)；如如果誤差規(guī)定不超過1%，或者5%，應(yīng)該至少取多少克，才能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)採樣等概率的從整體中採集試樣。將分析對象全體劃分成不同編號的部分，再根據(jù)亂數(shù)表進(jìn)行採樣。目標(biāo)總體：根據(jù)採樣與分析作出相應(yīng)結(jié)論的目標(biāo)對象。母總體：實(shí)際被採樣對象，二者很少一致。比如在中國1000所大學(xué)中調(diào)查學(xué)生的健康狀況，根據(jù)亂數(shù)表進(jìn)行採樣，實(shí)際只有100所大學(xué)被抽樣調(diào)查。目標(biāo)總體是1000所大學(xué)，母總體是100所大學(xué)。分析取樣的重要性分析取樣是分析測試工作的第一步。分析測試結(jié)果的可靠性與採樣是否正確直接相關(guān)。分析測試的目的就是要根據(jù)從局部試樣測得的數(shù)據(jù)來獲取有關(guān)對象全體的無偏信息。怎樣使局部採樣在統(tǒng)計(jì)意義上盡可能代表整體，是採樣方法和理論研究的內(nèi)容。分析式樣的理論要求分析試樣從統(tǒng)計(jì)上應(yīng)該滿足如下要求：1、試樣均值應(yīng)能提供總體均值的無偏估計(jì)。2、樣本分析結(jié)果應(yīng)能提供總體方差的無偏估計(jì)。3、在給定的時間與人力消耗下，採樣方法應(yīng)給出盡可能精密的上述估計(jì)。4、標(biāo)準(zhǔn)偏差s2=[Σ（xi-X）2]/（n-1）上式中，xi為單次分析值；X為分析平均值；n為樣品個數(shù)。當(dāng)n趨近∞時，s趨近於σ?？偡讲畹臉?gòu)成如果ns個樣本被分析了na次，總方差σ02=σs2/ns+σa2/（ns

na）

σs2和σa2分別表示採樣方差和分析方差。假設(shè)：σa2

=ασs2

上式變成：σ02=σs2/ns+（α/na）×（σs2/ns

）結(jié)論1、對於給定的α、ns和na，總方差隨採樣方差增加而增加；2、對於給定的總分析次數(shù)nans，如果不考慮成本，隨機(jī)採樣總是數(shù)越多越好。如6個樣本進(jìn)行2次分析比4個樣本進(jìn)行3次分析的總方差要小。3、隨機(jī)採樣的總方差α是的線性函數(shù)。Α是很小數(shù)，即分析測試的方差比採樣方差小得多時，（α/ns

）×（σs2/ns

）比起σs2/ns

來就可以忽略。即分析誤差下降到採樣誤差的1/3或更低時，寧可採用快速簡便的、精密度不高，但能與採樣誤差匹配的方法進(jìn)行。最小採樣數(shù)目估計(jì)利用小樣本採樣的各種方差所得估計(jì)值來進(jìn)行最小採樣數(shù)目估計(jì)是建立在t—統(tǒng)計(jì)（學(xué)生分佈）基礎(chǔ)上的.

μ=x±（ts0）/（n）1/2

s0是總標(biāo)準(zhǔn)偏差σ0的估計(jì)值.n=（ts0）2/（x-μ）2=（ts0）2/e02對參數(shù)t查表時先取n=∞

作為自由度來確定t值。用此t值根據(jù)n=（ts0）2/（x-μ）2=（ts0）2/e02計(jì)算出n的值後再查新的t值，如此迴圈，直到n收斂於一個常數(shù)。採樣常數(shù)Ingamell採樣常數(shù)為表徵混合得很好的實(shí)驗(yàn)室樣本的均勻性,Ingamell定義了採樣常數(shù)ks。ks=R2mR為相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，R=（ss/x）×

100,x為平均值，m為被分析樣本的品質(zhì)。ks的物理意義是保證採樣相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1﹪時的必須樣本品質(zhì)（ss/x=0.01，R=1，

ks=m）。上式可以改寫為：

R2

=ks/m；ks為常數(shù)，採樣的相對偏差與採樣品質(zhì)成反比。ks越小，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差越小，樣本混合程度越好。對於分層測定的非均勻樣本，不同層次當(dāng)有不同的Ingamell採樣常數(shù)。農(nóng)藥分析對象殘留分析1.受農(nóng)藥污染的產(chǎn)品部分：果、糧、菜，肉、禽、蛋、乳、中藥材，各種加工食品等。2.農(nóng)藥污染的環(huán)境部分：植物秸稈、土壤、水質(zhì)、大氣等。商品農(nóng)藥分析：有效成分分析。毒理分析*：動物的器官內(nèi)的農(nóng)藥及其代謝物分析環(huán)境保護(hù)：副產(chǎn)物、農(nóng)藥添加劑及代謝產(chǎn)物分析。

農(nóng)藥的採樣基本要求代表性,多樣性.產(chǎn)品不均衡性來自生產(chǎn)、運(yùn)輸、存放差異，形態(tài)與組成差異。少量式樣代表整批物料平均成分才使得取樣有意義。㈠液樣大槽：在不同深度取樣，然後混均勻小容器：每個容器取樣，然後混均勻㈡氣樣大氣：距地50—180cm高度採樣（與呼吸空氣同高度）煙道廢氣：空瓶或大注射器採樣。有害成分用吸收劑吸收濃縮後分析農(nóng)藥的採樣方法

㈢固體試樣原則1、大小塊按比例選取。2、總量越大，取樣量越多。3、按取樣單位取樣。100-200噸為一單位，堆成長方錐臺，如右上圖。倉庫、車、船採樣：每10、20或50包中取一包（參考總量、均勻度、價值、來源而定）再從每包不同位置取少量，得到原始樣。大車皮：四角、中心、底部取樣。取樣後破碎、研細(xì)、縮減。用於分析樣品20-30g

副本樣品30-100g（保存）縮減樣品用四方法樣品堆成圓臺，如圖，取對角線上兩份。反復(fù)四分法、至所需重量。取樣量q=kd2試樣最少量=經(jīng)驗(yàn)係數(shù)×粒度2（mm）粒度直徑越大，K值越大，試樣最少量越大。農(nóng)藥的採樣試樣處理篩分：用標(biāo)準(zhǔn)篩確定細(xì)粒與大塊比例篩號：每英寸上篩孔數(shù)（濕樣先烘乾後篩）100目篩：1600孔/cm2

孔徑0.15mm

篩法：由大孔到小孔、自然通過、不壓不拍。商品農(nóng)藥採樣法有國標(biāo)GB1605-79農(nóng)藥的採樣的代表性1、售出或購入商品農(nóng)藥代表平均品質(zhì)2、分析結(jié)果只代表本批品質(zhì)，應(yīng)注明廠名、品名、批號、生產(chǎn)日期、取樣日期。3、用規(guī)定取樣器、取樣管取樣。

4、原料200件以下按5%採樣，200以上按3%採樣。採樣位置：上、中、下各位置?？s分：每件取樣不少於0.1kg。5、

乳油與液體：儘量混均勻?；蛉≈亓炕蛉◇w積每批一樣，每樣不少於0.5kg6、粉劑：一次取夠、不縮分，不少於0.2kg（可濕性）

所有樣應(yīng)注意保存、防止失真。農(nóng)藥殘留分析採樣一、土壤採樣耕層土壤多點(diǎn)採樣、混合均勻。樣點(diǎn)選擇因素：面積大小、地形、地勢、灌溉條件、施藥狀況。樣點(diǎn)分佈：對角線、梅花形、棋盤式、蛇形、交叉間隔根際土：視不同作物、根系而異。一般以植株髓部為中心，莖圍為半徑確定範(fàn)圍；深度以縱向延伸端為限。

鬚根系（水稻、小麥）：d=15—20cm，土快連稻根取出。剝下根際土，多點(diǎn)混合。直根系（棉花）：倒圓錐形土壤，多點(diǎn)混合剖面土分析分析目的：觀察農(nóng)藥垂直分佈，滲漏及地下水源污染狀況。採樣方法：確定代表性樣點(diǎn)後挖長×寬×高=1×1.5×1.5m坑，由下至上逐層採樣，每層1—2kg。土壤樣品處理：風(fēng)乾、選取、貯存。剔除動植物殘?bào)w、石、沙後混均勻。四分法縮合，留1—2kg，裝樣、風(fēng)乾、標(biāo)籤。風(fēng)乾法：陰涼通風(fēng)處攤於盤或聚乙烯膜；半幹時碎、剔、薄層翻，細(xì)度60—40目。作物取樣禾本科作物：分析區(qū)采10—24點(diǎn)，5—10kg，混合均勻，縮合成1—2kg，風(fēng)乾、脫殼；破碎至40—60目，分別測殼、米（面）。果實(shí)採樣；一區(qū)內(nèi)采至少10顆樹之果；每樹分上、下、內(nèi)、外側(cè)均勻採摘大小相近之果實(shí)1—5kg，縮合，取3份，1—5kg/份，袋裝。記區(qū)、日期，快速分析或低溫冷藏。參考文獻(xiàn)1.四川農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)研究所編《農(nóng)藥分析》，石油化學(xué)工業(yè)出版社，1976，2.中國農(nóng)業(yè)研究院植物保護(hù)研究所，農(nóng)牧漁業(yè)部農(nóng)業(yè)檢定所，商業(yè)部農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料局合編《農(nóng)藥分析》，化學(xué)工業(yè)出版社，1988，33.默濤，陳鶴鑫、陸貽通編《農(nóng)藥殘留量分析方法》，上海科學(xué)技術(shù)出版社，1992，44.中華人民共和國國家進(jìn)出口商檢局編，《農(nóng)藥殘留量氣相色譜法》，中國對外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易出版社，1986，95.《農(nóng)藥殘留影響及其測定方法》，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1980，16.樊德方主編，《農(nóng)藥殘留量分析與檢測》上?？萍汲霭嫔?.《中國農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)彙編》植保與農(nóng)藥部分，中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，19988.塗思龍，張鳴鳳，鐘明主編《食品、醫(yī)藥、有機(jī)化學(xué)產(chǎn)品分析測試大全》，下，中國社會出版社，2000，5。參考文獻(xiàn)9.[美]M.B.Jacobss,李穎川譯,《食品化學(xué)分析》，輕工出版社,1966,-——農(nóng)藥殘留物測定10、[英]G.J.DicksandP.V.Nichalas,無錫輕工學(xué)院譯，《食品分析的氣相色譜法》，輕工出版社，1987。11、《AOAC分析方法手則》下冊（AssociationofofficialAnalyticalchemists）,1984,4th,中國光學(xué)學(xué)會光譜專業(yè)委員會評，1986，212、陳萬義主編，《農(nóng)藥生產(chǎn)與合成》，化學(xué)工業(yè)出版社，2002.613、（各種分析方法參考）《分析方法手則》1——5冊一冊：基礎(chǔ)知識與安全知識二冊：化學(xué)分析三冊：電化學(xué)與光化學(xué)分析杭大化學(xué)系分析化學(xué)教研室編四冊：

色譜分析五冊：色譜與核磁共振成都科技大學(xué)近代分析教研室14、周同惠主編，化學(xué)計(jì)量學(xué)，北京，化學(xué)工業(yè)出版社，2000。15、汪爾康主編，分析化學(xué)新進(jìn)展，北京，科學(xué)出版社。16、餘中建，李松蘭，張殿坤，現(xiàn)代有機(jī)分析，天津，天津科學(xué)出版社，1994期刊類《農(nóng)藥》瀋陽化工研究院主辦《世界農(nóng)藥》上海農(nóng)藥研究所主辦《農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)》，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)主辦

農(nóng)藥的分離與純化方法分離純化是農(nóng)藥分析必不可少的過程不管是商品農(nóng)藥樣品還是殘留農(nóng)藥樣品都不是純的農(nóng)藥成分。對於這些樣品的分析，首先要進(jìn)行一定的分離純化步驟，使農(nóng)藥和雜質(zhì)盡可能分離，達(dá)到分析結(jié)果準(zhǔn)確的目的。不同的農(nóng)藥樣品有不同的純化方法。選擇分離方法的依據(jù)是樣品中農(nóng)藥的性質(zhì)和雜質(zhì)的性質(zhì)差別來選擇分離純化的方法農(nóng)藥分析——分離、提純的方法和原理

農(nóng)藥分離的主要類別原藥分析：各種農(nóng)藥異構(gòu)體及有效成分含量。殘留分析：土、水、動植物體中農(nóng)藥殘留量分析。原藥的一般組成原藥（固體）：含填料，加工成粉劑，可濕粉劑顆粒時加入。加入目的：原藥粉，不易粉碎；農(nóng)藥藥效高,單位面積用量少，加入填料後易稀釋。加入成分：藥石、粘土、碳酸鹽類。原藥（液體）：含溶劑、助劑、乳化劑、非有效成分（合成副產(chǎn)物、降解成分等）。農(nóng)藥分析對象與特點(diǎn)原藥分析對象：主要對有效成分分析。原藥分析的特點(diǎn)：含量高，有固定的提純與分析方法。殘留分析對象：對人、畜、環(huán)境有害成分。殘留分析特點(diǎn)：殘留量少，組成複雜。要提取、富集，分離提純。分離提純與分析方法靈活多樣。共同點(diǎn)：基本原理和方法一致。分離提純（富集）——物理和化學(xué)方法；分析類別：定性分析、定量分析固體農(nóng)藥的純化方法簡介固體農(nóng)藥（有效成分）制標(biāo)準(zhǔn)樣時用重結(jié)晶法提純。提純原理：在某一種溶劑中，固體農(nóng)藥的溶解度隨溫度變化有較大的變化。在較高溫度時的飽和溶液趁熱過濾除不溶性雜質(zhì)。母液放冷，在較低溫度時農(nóng)藥以晶體析出，過濾，可溶性雜質(zhì)留在母液中而除去。（可反復(fù)重結(jié)晶直到提純農(nóng)藥熔點(diǎn)不變?yōu)橹梗?。重結(jié)晶的關(guān)鍵因素關(guān)鍵：選合適溶劑。重結(jié)晶溶劑具備條件：a.不與被提純成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)b.被提純物與雜質(zhì)要有顯著溶解度差c.被提純物在該溶劑中溶解度隨溫度變化變化大d.溶劑沸點(diǎn)適中（不高也不低）如沒有合適的純?nèi)軇﹦t用混合溶劑重結(jié)晶?；旌先軇┑倪x擇方法1、確定兩種溶劑可以互相混溶，而且一種是被提純農(nóng)藥的良好溶劑，一種是不良溶劑。如乙醇和水；苯和乙醇；丙酮和三氯甲烷等。2、取0.02g—0.03g樣品溶解於一定量（1mL）的良好溶劑中（試管），然後在不斷搖動下緩慢滴加不良溶劑，直到出現(xiàn)渾濁為止。3、記下不良溶劑的體積，計(jì)算得到混合溶劑的組成比例，通過重複試驗(yàn)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。重結(jié)晶的一般操作步驟1、製成飽和熱溶液（接近溶劑的沸點(diǎn)）2熱過濾（除不溶雜質(zhì)）。3、自然冷卻結(jié)晶4、過濾晶體與洗滌。5、乾燥6、標(biāo)準(zhǔn)品多次重結(jié)晶，直到m.p不變?yōu)橹怪亟Y(jié)晶操作要點(diǎn)1、製成飽和熱溶液視被提純物質(zhì)多少選用適當(dāng)容積的燒瓶，將被提純物質(zhì)放入燒瓶，裝好回流裝置。在不超過溶劑沸點(diǎn)的熱浴溫度下緩慢滴加溶劑，並攪動，使溶質(zhì)在接近容積沸點(diǎn)時剛好溶解，立刻停止滴加溶劑。記下溶劑的體積與溶質(zhì)的品質(zhì)。2（用保溫漏斗）熱過濾?；蛘邔岬牟际下┒泛蜑V紙用熱溶劑潤濕後減壓過濾。重結(jié)晶操作要點(diǎn)3、結(jié)晶：濾液自然冷卻結(jié)晶（易揮發(fā)溶劑或者易於吸潮的溶劑應(yīng)密閉結(jié)晶）。如果冷至室溫不結(jié)晶，則可以放入晶種或用玻棒擦容器器壁；或放入冰箱進(jìn)行結(jié)晶（注意冰箱溫度應(yīng)該在溶劑凝固點(diǎn)之上）。4、過濾與洗滌晶體：減壓過濾、用低溫、少量溶劑洗滌。注意：減壓過濾應(yīng)該在布氏漏斗完全沒有液滴滴下為止。5、乾燥a、低熔點(diǎn)固體、不吸潮物質(zhì)，可以在空氣中乾燥。b、高熔點(diǎn),熱穩(wěn)定的物質(zhì)用烘箱中乾燥c、熱不穩(wěn)定，或吸潮、空氣中不穩(wěn)定的物質(zhì)，低於m.p20—30℃，真空乾燥。乾燥程度與純度檢驗(yàn)檢驗(yàn)乾燥程度一般用恒重法檢驗(yàn)，即稱重後再乾燥一段時間，看重量是否發(fā)生變化。也可以用熔點(diǎn)法檢驗(yàn)乾燥程度。純度檢驗(yàn)一般用熔點(diǎn)法。一種是與標(biāo)準(zhǔn)樣品同時測熔點(diǎn)進(jìn)行比較；另一種是測一次熔點(diǎn)後再重結(jié)晶一次，再乾燥測熔點(diǎn)，兩次熔點(diǎn)不變化則物質(zhì)已經(jīng)提純。純度檢驗(yàn)還可以用薄層法檢驗(yàn)，液相色譜或者氣相色譜更好。液體農(nóng)藥分離提純方法

液體農(nóng)藥分離提純一般首先考慮蒸餾法蒸餾法原理：依液體混合物中各組分沸點(diǎn)不同而分離。關(guān)鍵：控制溫度緩慢上升，收集不同溫度範(fàn)的圍餾份。蒸餾方法分類：常壓蒸餾適用於b.p較低，在b.p時不分解的物質(zhì)。減壓蒸餾適用於b.p較高，或在b.p發(fā)生分解的物質(zhì)。水蒸氣蒸餾適用於不與水反應(yīng)，b.p較高的物質(zhì)。常壓蒸餾注意事項(xiàng)

１.正確裝置，不扭不歪，不漏２.溫度計(jì)水銀球位置３.加沸石４.容器中液體體積５.熱源選擇６.餾出速度v=2—３D/S液體的乾燥溶劑含水，乾燥劑脫水後再蒸餾（乾燥劑不可進(jìn)入蒸餾體系）（容量與速度）脫水劑（乾燥劑）種類及性能：CaO中、鹼性化合物可用，脫水力高。CaCl2鹵烴、烴、酯、醚可用（醇、酸不可用，發(fā)生反應(yīng)）脫水力高。Na2SO4多數(shù)溶劑可用，脫水能力不高。K2CO3鹼性化合物、醇、酯脫水力較高。P2O5鹵烴、烴（醇、酸不可用發(fā)生反應(yīng)），脫水力高。NaOH飽和烴、肼、胺（酸性物質(zhì)不可用）分子篩多數(shù)可用，脫水力高。減壓蒸餾原理減壓蒸餾的原理液體的沸點(diǎn)隨液面壓強(qiáng)降低而降低。減壓蒸餾前要對沸點(diǎn)和壓強(qiáng)進(jìn)行估算，可以通過如下途徑進(jìn)行估算。1、查T-P關(guān)係圖如右圖，從左到右三根線分別為A、B、C。A線上標(biāo)有減壓的沸點(diǎn)數(shù)據(jù)，B線是正常壓強(qiáng)沸點(diǎn)刻度，C線是壓強(qiáng)刻度（mmHg).ABC沸點(diǎn)低沸點(diǎn)低壓強(qiáng)小壓強(qiáng)大用

近似公式估算2、用

近似公式lgP=A+B/TP蒸汽壓;T絕對溫度;A、B為常數(shù)（可以通過化合物物理性質(zhì)手冊或者化工手冊查閱）減壓蒸餾裝置儀器：克萊森燒瓶、真空尾接管（單口接頭）帶橡皮套的毛細(xì)管、容積=1/2V、不用平底接受器減壓泵（水泵7-20mmHg）機(jī)械泵（油泵）0.1mmHg（要連接吸收裝置）裝置如右下圖減壓蒸餾裝置圖注意：負(fù)壓與正壓操作一樣要帶護(hù)目鏡防爆！減壓蒸餾操作步驟1、查蒸餾系統(tǒng)可否達(dá)應(yīng)有真空度

開始：關(guān)安全瓶活塞，擰緊毛細(xì)管上橡皮套螺絲夾，開動抽氣泵，看壓力計(jì)指示數(shù)據(jù)是否達(dá)到要求。

停止：慢慢打開安全瓶活塞，直到壓力與外界平衡為止,擰松毛細(xì)管上螺絲夾，關(guān)閉抽氣泵。2、加液料、關(guān)活塞、開抽氣、調(diào)毛細(xì)（氣泡與線）、達(dá)到所需壓力後（平衡、穩(wěn)定）再加熱。3、熱源溫度高於b.p20-30℃，壓力不穩(wěn)則調(diào)熱源，使餾出速度V=0.5—1D/S4、多組分蒸餾、餾出溫度上升時轉(zhuǎn)換接收器（使用多頭接受器）。5、蒸餾完後先撤除熱源、再慢慢開活塞壓力平衡後關(guān)氣泵與打開毛細(xì)管夾。

可旋轉(zhuǎn)多用接頭旋轉(zhuǎn)濃縮蒸餾法

用於提取液濃縮。壓力400—600mmHg,蒸餾瓶50—160轉(zhuǎn)/分。旋轉(zhuǎn)使溶劑在瓶壁形成一層薄膜，擴(kuò)大蒸餾面積，提高蒸餾速度。操作步驟：1、裝好儀器2、調(diào)熱浴溫度高於b.p10℃以上3、冷卻水接蛇形冷凝管（低於b.p20℃）4、接真空泵（不低於300mmHg）5、加熱、開自動加液旋塞，液自動流入蒸餾瓶（可隨時加料）。6、開動電機(jī)、使旋轉(zhuǎn)。結(jié)束：關(guān)電機(jī)

除熱源

關(guān)加液旋塞

壓力平衡後停止抽氣。

水蒸汽蒸餾水蒸氣蒸餾主要是用於那些沸點(diǎn)比較高，容易熱分解，或者與其他有機(jī)物性成不容易分離的糊狀物中的成分。水蒸氣蒸餾原理：混合體系中總的蒸汽壓等於各組分蒸汽分壓之和。當(dāng)被蒸餾體系接近100℃時，水的蒸汽壓接近1atm，故被蒸餾的物質(zhì)蒸汽可以和水蒸氣合計(jì)等於1atm，從而在接近100℃的溫度從混合物被蒸餾出來。被蒸餾物質(zhì)必須滿足的條件：不與水反應(yīng)；在100℃時不低與5mmHg的蒸汽壓水蒸氣蒸餾操作水蒸氣蒸餾操作與常壓蒸餾操作類似，其裝置比常壓蒸餾裝置多一個水蒸氣發(fā)生器。水蒸氣發(fā)生器T形管安全管三、柱層析柱層析技術(shù)是分離混合物的重要方法，簡單實(shí)用。架設(shè)一個帶活塞的玻璃柱，填入吸附劑，就可以用於分離混合物。柱色譜的幾種技術(shù)指標(biāo)直徑與長度比：1：10~1：40短而粗的柱子，分離快，分離效果差長而細(xì)的柱子，分離慢，分離效果好色譜柱的分離效果還與吸附劑和洗脫劑的選擇、柱子的裝填品質(zhì)有關(guān)。柱層析原理與分類簡介原理：當(dāng)混合物被束縛在色譜柱的固定相上後，流動相自上而下流經(jīng)固定相，帶動被分離組分向下移動。與固定相作用力大的組分在流動過程中留在了後面，與固定相作用力小的組分在流動過程中跑在了前面（略），混合物因而被分離。柱層析分類：吸附、分配、凝膠吸附色譜柱：吸附劑固體表面吸附各種成分。分配色譜柱：惰性載體表面塗高沸點(diǎn)液體，被分離物在淋洗劑與高沸點(diǎn)液體之間溶解分配。凝膠色譜柱：多凝膠填粒、淋洗，凝膠網(wǎng)眼大小篩分不同尺寸的分子吸附柱的裝填要求吸附劑要裝填均實(shí)，淋洗劑才會等速水準(zhǔn)下降，分離效果才會好。幹裝：吸附劑通過漏斗直接裝入盛有洗脫劑的色譜柱（邊裝邊敲），最後應(yīng)使吸附劑上有一薄層溶劑。為保持柱上有平整表面，最上層可加一些石英砂。濕裝：先裝洗脫劑於柱內(nèi)，加用淋洗劑調(diào)成糊狀的吸附劑，使慢慢沉降。最後應(yīng)使吸附劑上有一薄層溶劑。亦應(yīng)邊加邊敲。吸附劑的分類吸附劑種類：氧化鋁、矽膠、弗羅裏矽土、纖維素、氧化鎂、碳酸鈣、火性碳等為常用品種。吸附劑的要求：要對被吸附物有一定的作用，與被吸附物，淋洗劑無化學(xué)反應(yīng)。吸附能力：與顆粒粗細(xì)有關(guān)，粗則流速快，分離效果差；粗則流速慢，分離效果好。氧化鋁分為酸性、中性、鹼性三種酸性——１％HCl浸泡，蒸餾水洗至pH4—４.５，用於分離酸性物質(zhì)中性——pH為７.５左右，用於分離中性物質(zhì)鹼性——pH９—１０，用於分離鹼性物質(zhì)或烴類。吸附劑的活性吸附劑活性與含水量有關(guān)，含水量越低活性越高。如：氧化鋁依含水量分為五級，含水量分別為０；３％；６％；１０％；１５％矽膠五級對應(yīng)含水量為０；５％；１５％；２５％；３８％一般製備方法：３５０——４００℃烘至無水（３小時）加入相應(yīng)水量得相應(yīng)級別。吸附力與分子極性有關(guān)。極性越強(qiáng)吸附力越大。淋洗劑選擇極性遞增順序：Cl-Br-I-<C=C<-OCH3<<—CO2R<C=O<--CHO<-SH<-NH2<-OH<-CO2H吸附力與淋洗劑性質(zhì)有關(guān)。選淋洗劑時應(yīng)考慮被洗脫物質(zhì)的極性與溶解度。極性大的化合物用極性大的淋洗劑洗脫；極性小的化合物用小極性淋洗劑洗脫；幾種極性差別大的混合物用幾種不同極性的淋洗劑分批洗脫。亦可以用混合淋洗劑。淋洗劑洗脫能力淋洗劑洗脫能力依以下順序遞增：正己烷〈CCl4〈C6H5-CH3〈C6H6〈CH2Cl2〈CHCl3〈Et2O〈CH3CO2C2H5〈Me2CO〈C3H7OH〈MeOH〈H2O淋洗要點(diǎn)：連續(xù)不斷，不快不慢，吸附劑不露出液面。淋洗速度V=1—２滴/S為宜?？靹t交換不平衡；慢則具有大表面的吸附劑使某些成分破壞。淋洗曲線淋洗曲線：分段收集標(biāo)準(zhǔn)品洗脫液進(jìn)行含量分析，繪成的淋洗劑體積—樣品含量曲線。目的—使要收集的組分盡可能收集完全，對於無色化合物應(yīng)該用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分段收集洗脫液進(jìn)行含量分析，繪成曲線。依此確定淋洗過程應(yīng)收集的洗脫液體積，同時還可以確定淋洗所需溶劑。含量％淋洗劑體積常見吸附劑的處理中性氧化鋁：５５０℃活化４h，使用前130℃活化5h，可保一周，過期重新活化；８００℃時中性變鹼性。氧化鋁吸附色素最佳。矽膠：水玻璃加鹽酸，沉澱脫水得無定形多孔物質(zhì)。表面Si-OH稱矽醇，與不飽和化合物或極性基形成氫鍵而吸附；Si-O-Si氧橋可水解，稱溶解度，pH=９以上顯著，故不可用強(qiáng)鹼性淋洗液；矽膠層析性能與多孔骨架及坑穴體系密切相關(guān)，加熱有變。活化溫度不超過２００℃。130℃活化２h備用。用於有機(jī)氯農(nóng)藥分離。混合吸附劑柱用混合吸附劑裝柱柱可以用於純化多種雜質(zhì)的樣品。不同的農(nóng)藥樣品的提純用不同的混合柱。常見混合柱如下。活性碳—氧化鎂，用於有機(jī)磷農(nóng)藥分離?；钚蕴迹w維素，由於有機(jī)磷，有機(jī)氯農(nóng)藥分離。弗羅裏矽土—中性氧化鋁—酸性矽藻土，用於植物食品中有機(jī)氦農(nóng)藥淨(jìng)化；活性碳—中性氧化鋁，CHCl3淋洗由於提純有機(jī)磷農(nóng)藥。分配柱與凝膠滲透柱層析法分配柱層析法：把有機(jī)氯農(nóng)藥從極性小的農(nóng)藥樣品中分配到極性大的溶劑中去。主要分離含脂肪、蠟質(zhì)試樣的有機(jī)氯。凝膠滲透柱層析法：用凝膠sephadexLH-20作有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分離淨(jìng)化。被純化物質(zhì)的分子量範(fàn)圍：有機(jī)磷200-400；色素500-900。用118g葡聚糖LH-20裝柱。乙醇或丙酮淋洗；淋洗速度V=4.5ml/h。多數(shù)有機(jī)磷（殘留水準(zhǔn)0.05—0.005ppm）淋洗體積在305—428ml；回收率可達(dá)66-98%。薄層色譜薄層色譜是比柱色譜更加應(yīng)用廣泛的分離分析手段。薄層色譜用於分離提純具有簡單快速的特點(diǎn)。但是其分離容量不及柱色譜大，分離效果也不及柱色譜好。薄層分類：吸附與分配色譜，分配色譜又分正相色譜與反相色譜。正相：含水吸附劑（固定相），弱極性流動相，極性小的移動快。反相：鈍化吸附劑（固定相），強(qiáng)極性流動相，極性強(qiáng)的移動快。薄層吸附色吸附色譜固定相：矽膠、氧化鋁活化；加石膏為G型，不加為H型，加螢光劑為GF或HF正相分配色譜固定相：纖維素或用緩衝水溶液處理過的矽膠、或用極性有機(jī)溶劑處理過的矽膠。反相分配色譜固定相：用矽酮、石蠟等非極性溶劑處理過的矽膠或纖維素。薄層塗層：薄層自然晾乾後進(jìn)行活化?；罨瘻囟扰c時間：矽膠板105-120℃，1h；氧化鋁板：70℃，40min。吸附劑選擇吸附劑用途吸附劑用途矽膠吸附，分配氧化鋁吸附，分配矽藻土分配纖維素分配氫氧化鈣吸附聚醯胺吸附離子交換樹脂離子交換氧化鎂吸附，分配吸附劑粒度的要求：5-50μm。粒度太大推進(jìn)快，影響分離；粒度太小則展開慢，出現(xiàn)拖尾或橫向擴(kuò)散過度。製備薄層板的參數(shù)薄層板規(guī)格：20×20cm，20×15cm，10×20cm，10×15cm，7.5×20cm，7.5×15cm，5×20cm，5×15cm。制板：皂液洗淨(jìng)，烘乾備用。漿液與活化矽膠G:水=1:2（W∶W），110-130℃，1h氧化鋁G:水=1:1—1:3（W∶W），80-100℃，30min矽藻土G:水=1:2（W∶W），110℃，30min纖維素粉:95%乙醇（丙酮）=1:5—1:6（W∶W），100℃，3-5min聚醯胺:甲醇=1:4—1:6（W∶W），60-70℃，1h。薄層板的製備制漿：按照比例將吸附劑和相應(yīng)的液體加入燒杯，攪拌均勻。鋪板：一般將均勻漿液適量倒在薄板上，兩手指夾薄板兩側(cè)，旋轉(zhuǎn)傾斜，讓漿液在薄板上流均勻，也可以適度敲擊震盪，使?jié){液流平?；蛘邔砂遒N緊，插入漿液中，在提起，讓多餘漿液流下，一次可以製備兩塊板。還有用塗布器鋪板的。薄板鋪好後置平臺自然晾乾，活化備用。展開劑選擇展開劑選擇標(biāo)準(zhǔn)，與淋洗劑標(biāo)準(zhǔn)一致。官能團(tuán)極性如下：H—＜—Cl＜—C2H5＜—CH=CH2＜—OCH3＜—NO2＜—NMe2＜—COCH3＜—CO2R＜＞C=O＜—CHO＜—SH＜—NH2＜—NHCOR＜—OH＜—CONH2＜—CO2H一般單一展開劑沒有很好的適合的極性，多用相容的展開劑混合，以調(diào)節(jié)展開劑極性。被分離物質(zhì)、淋洗（展開劑）及固定相的極性選擇關(guān)係用右下圖指導(dǎo)選擇展開體系。圓弧內(nèi)三角形可以繞圓心轉(zhuǎn)動，其三個角頂點(diǎn)分別指向三類物質(zhì)的極性區(qū)限。如果沒有適當(dāng)?shù)牧鲃酉?，可以採用混合溶劑調(diào)節(jié)極性?；【€A代表吸附劑的活性，順箭頭方向增大?；【€B代表展開劑的極性，順箭頭方向增大?；【€C代表被分離物質(zhì)極性，順箭頭方向增大。三角形的三個角所指位置就是三者的關(guān)係一般薄層色譜實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)：點(diǎn)樣—展開—顯色—計(jì)算Rf值點(diǎn)樣：在距薄板下沿1cm處的水平線上毛細(xì)管的液滴與薄層表面相切，切忌玻璃管戳破薄層，可以重複點(diǎn)樣。展開：薄層板下沿水準(zhǔn)插入層析缸，展開劑一定不能淹沒樣點(diǎn)，層析缸內(nèi)要充滿展開劑蒸汽，層析缸要蓋蓋子，展開劑呈水平線上升，接近薄層上沿時為止。顯色：大多數(shù)被展開物質(zhì)沒有顏色，要進(jìn)行物理或者化學(xué)方法顯色。薄層從層析缸取出，在展開劑前沿作一記號，待展開劑揮發(fā)幹後顯色。物理方法：紫外燈照射；碘蒸汽薰蒸等?；瘜W(xué)方法：可以產(chǎn)生有色物質(zhì)的反應(yīng)。幾種點(diǎn)樣方法直接點(diǎn)點(diǎn)樣：離下沿1.5-2.0cm處，毛細(xì)管分次點(diǎn)樣d≤0.3cm（凸出液滴與薄層表面相切）。間接點(diǎn)樣：打孔器打?yàn)V紙片2-3mm直徑。試液點(diǎn)滿濾紙片，晾乾；打孔器打薄層2-3mm直徑的孔，濾紙片嵌入。製備薄層可以將試樣液用打孔器打下的吸附劑吸收，幹後填入孔中；也可以在薄層上挖一條溝槽，試樣液用吸附劑吸收，幹後填入溝槽（展開後是平行帶狀）薄板置於密閉的層析缸中展開分離。要確保薄板平行放置，樣點(diǎn)在展開劑液面之上。等溫吸附線與分離效果的關(guān)係在恒溫下以展開相濃度為橫坐標(biāo)，吸附相濃度為縱坐標(biāo)作圖，得到等溫吸附曲線。曲線中，A物質(zhì)斜率大，說明被吸附作用強(qiáng)，展開速度就慢，Rf值就小。Ⅰ是理想狀況，顯色後是標(biāo)準(zhǔn)圓斑；Ⅱ和Ⅲ出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象，分離效果也不好。、ⅠⅡⅢ有機(jī)磷農(nóng)藥的極性農(nóng)藥分子的極性是影響分離效果的重要因素。硫酮型農(nóng)藥小於硫醇型農(nóng)藥的極性二硫代型小於磷酸酯、磷醯胺型共軛雙鍵增多則增強(qiáng)分子極性；甲基同系物大於乙基同系物極性影響Rf的因素薄層厚度吸附劑種類、活度、展開劑極性、展層的飽和度展開方法：一般不加黏合劑，薄板水準(zhǔn)展開。單向上行一次展開，傾角70-80°Rf值接近的物質(zhì)要多次單向展開。每次可用同一展開劑，也可不同的展開劑。雙向展開法：用正方形薄板，展開劑一次走到上沿後取出風(fēng)乾，旋轉(zhuǎn)90°後再展開邊緣效應(yīng)：溶劑前沿線一般朝下彎造成Rf不準(zhǔn)，且使色斑大小及形狀不規(guī)則顯色是配合薄層進(jìn)行鑒別。掃集共蒸餾法分離原理：將試樣用注射器注入事先填入的無吸附性的填充劑（玻璃棉、玻璃珠、海砂等）的淨(jìng)化柱內(nèi)，在規(guī)定溫度下，農(nóng)藥和溶劑蒸汽隨氮?dú)饬鬟M(jìn)冷凝管，冷凝後進(jìn)入接收器。脂肪、色素不能汽化的雜質(zhì)沉積在柱內(nèi)填充劑上，使雜質(zhì)得以分離。本法可用於有機(jī)磷、有機(jī)氮農(nóng)藥的分離提純。構(gòu)成部件：柱溫箱、溫度控制器、載氣流量控制器、自動淋洗裝置、淨(jìng)化柱、冷凝管、冷阱、收集器。低溫冷凍分離法食品中農(nóng)藥殘留的分析，取樣後殘留農(nóng)藥與大量的脂肪、蠟質(zhì)混合在一起，給分離造成困難。由於動植物組織中的脂肪、蠟質(zhì)可以在低溫下於丙酮溶液中生成沉澱，將樣品用丙酮反復(fù)萃取，萃取液經(jīng)過冷凍，過濾而分離掉脂肪、蠟質(zhì)沉澱，而農(nóng)藥留在丙酮中。冷凍溫度一般在-70℃液相萃取法萃取原理：一組互不相溶的溶劑中溶有某一成分溶質(zhì)。這種溶質(zhì)以一定比例（濃度比）在兩相中分配。兩相中分配比稱分配係數(shù)。利用同組溶劑中各物質(zhì)分配係數(shù)不同或同種物質(zhì)在不同溶劑組中分配系數(shù)不同而分開。（選擇合適溶劑，反復(fù)分配）等容一次分配：一組等容互不相溶的溶劑中加入某一溶質(zhì)，平衡後弱極性溶劑中農(nóng)藥比值是P；強(qiáng)極性溶劑中比值是Q;顯然P+Q=1，兩相濃度比為P/Q。等容多次分配與不等容分配取幾份等體積強(qiáng)極性溶劑在1份弱極性溶劑中萃取幾次後，弱極性溶劑中溶質(zhì)含量是Pn,強(qiáng)極性溶劑中溶劑含量是1-Pn

。不等容一次分配：設(shè)弱極性溶劑體積是強(qiáng)極性體積的α倍。依定義，一次分配後弱極性溶劑中含量是αP，強(qiáng)極性溶劑中含量為Q；弱極性溶劑中所含農(nóng)藥占農(nóng)藥總量比例為：αP/（Q+αP）。用此比例式可以計(jì)算兩相的農(nóng)藥含量。設(shè)P=0.7Q=0.3因兩相濃度比不變。設(shè)0.7的相用2倍體積，則有0.7的液相中含有2×0.7/（0.3+2×0.7）=1.4/1.7乙腈提取樣品中的殘留農(nóng)藥果蔬，特別是新鮮果蔬樣品，含有大量水分，極性小的有機(jī)溶劑不能萃取其中的微量殘留農(nóng)藥。首先用與水互溶的乙腈萃取，萃取液再用極性小的有機(jī)溶劑（不溶於水）萃取乙腈中的農(nóng)藥。萃取液中加入濃的Na2SO4溶液以降低農(nóng)藥在其中溶解度；用CH2Cl2加入正己烷增加農(nóng)藥在有機(jī)相溶解度，加入中等酸度緩衝液防農(nóng)藥水解。分離操作取100—125ml提取液，於500mL容量瓶中，加10mlCH2Cl2，20mLpH=6的磷酸鹽緩衝溶液，200mL正己烷，搖動1min；再加入50mL蒸餾水，50mL飽和Na2SO4溶液再搖2min；分層去水後有機(jī)相用100ml水/次洗兩次；輕輕旋轉(zhuǎn)減少乳化租用，分水後Na2SO4乾燥，濃縮後經(jīng)柱層析，作氣相色譜分析。注意：乙腈溶於水，農(nóng)藥不溶於水，加大水量使乙腈失去溶解農(nóng)藥的能力。適用農(nóng)藥種類用此法一次性回收率達(dá)60—100%的含氯農(nóng)藥有：2，4—滴甲酯劑，艾氏劑、甲體六六六、乙體六六六、丙體六六六、丁體六六六、硫丹、異狄氏劑、七氯、氯殺蟎、丙菌清、P，P`—滴滴滴、P，P`—滴滴E、O，P`—滴滴銻、三氯殺蟎醇、狄氏劑、環(huán)氧七氯、六氯苯、碳?xì)潇`、甲氧滴滴銻、滅蟻靈、蟎卵酯、五氯硝基苯、乙滴銻、氯蟎碸、三氯殺蟎碸用上法回收的有機(jī)磷農(nóng)藥穀硫磷、三硫磷、地亞農(nóng)、氮線磷、乙拌磷、殺蟲螟松、亞胺硫磷、馬拉硫磷、甲基一六0五、一六0五、三九一一、磷胺、皮蠅硫磷用於液—液萃取的體系還有乙腈/CHCl3、丙酮/石油醚、丙酮、CH2Cl2注意萃取過程中會發(fā)生乳化現(xiàn)象，乳化會使結(jié)果偏低或達(dá)不到提純效果，因此需要採取抑制或消除乳化措施：1、飽和Na2SO4溶液破乳

2、1：1H2SO4破乳（限酸穩(wěn)定的農(nóng)藥）

3、高速離心破乳

4、加草酸鉀、甲酸、丙酮等試劑破乳化學(xué)淨(jìng)化法殘留農(nóng)藥提取液干擾分析成分很大程度是脂肪與色素?；瘜W(xué)淨(jìng)化法是使雜質(zhì)與某種試劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)除掉或者消除干擾。最常用的化學(xué)淨(jìng)化法是用酸處理對酸穩(wěn)定的農(nóng)藥或用堿處理對堿穩(wěn)定的農(nóng)藥來除雜。酸淨(jìng)化：用濃H2SO4或濃H2SO4與發(fā)煙硫酸（1：1）混合液在分液漏斗中處理萃取液，可以除脂肪、色素。除雜原理：不飽和脂肪，色素中含有C=C，可以和濃H2SO4加成生，成可溶於濃H2SO4的化合物而除去。硫酸除雜注意事項(xiàng)注意：對酸不穩(wěn)定的農(nóng)藥如有機(jī)磷、氨基甲酸酯不可用。酸體積與提取液體積之比為1：10；一般淨(jìng)化兩次。石油醚中脂肪含量超過4%時，乙、丁體六六六結(jié)果偏低；提取液脫水不完全或潮天加發(fā)煙H2SO4效果較好；防乳化：第一次淨(jìng)化輕搖，第二次淨(jìng)化猛搖，已乳化可以加水消乳堿淨(jìng)化法除雜對艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑用堿淨(jìng)化方法：KOH—助濾劑柱淨(jìng)化。一層KOH一層含水14-17%的助濾劑，一層氧化鎂一層助濾劑裝柱。用石油醚淋洗，而耐堿農(nóng)藥有很好的回收率。在分析魚肉蛋、奶粉中的七氯、環(huán)氧七氯、艾氏劑、P.P一滴滴伊?xí)r可以用10%的乙醇鉀分解淨(jìng)化，但處理時間不超過30min，溫度不超過65℃艾氏劑、狄氏劑、七氯色譜技術(shù)

色譜法的分類

一、按照固定相與流動相物態(tài)分氣相色譜：GC（GSC；GLC）液相色譜：（LSC；LLC）超臨界流體色譜：（SFC）二、按照固定相使用形式分柱色譜平面色譜：在平面介質(zhì)上進(jìn)行組分分離的技術(shù)薄層色譜：（TLC）薄層板和薄層棒紙上色譜：（PC）圓形紙上色譜三、按照分離機(jī)理分類1、吸附色譜2、分配色譜3、離子交換色譜：（IC）利用離子交換樹脂作固定相分離離子型化合物的色譜法。用高效掖相色譜技術(shù)和離子交換樹脂柱，用含有某種特定例子的水溶液作流動相，在降低流動相背景信號的前提下進(jìn)行離子分離；或通過調(diào)節(jié)流動相的pH值以抑制試樣作粉的電離，從而分離離子化合物：（離子抑制色譜）。4、離子排除色譜：（IEC）利用離子交換樹脂對電解質(zhì)與非電解質(zhì)的斥力不同而達(dá)到分離的色譜法。最常用的是粒徑=15μm高效凝膠型磺化苯乙烯/二乙烯苯離子交換樹脂（強(qiáng)酸型）。樹脂溶漲後在小球中溪流的水是穩(wěn)定的水相，小球間是流動的水相。離子交換樹脂在兩個水相間起半透膜作用。試樣中與離子交換樹脂的離子帶相同電荷的離子被排斥在固定水相之外，弱酸一分子存在被固定水相滯留；非離子組分不被滯留，在兩相間進(jìn)行分配，按照祖墳與樹脂官能團(tuán)作用力大小不同分開。5、離子對色譜法：（IPC）在流動相中加入與所要分離的組分相反電荷的離子（稱為離子對，即離子試劑），與組分形成離子對，從而改變組分的保留值和分離度。6、凝膠色譜：空間排除色譜、分子排除色譜、分子篩色譜、液體排除色譜、體積排除色譜等（GPC）。用於大分子分離，生化中水嘴流動相成為凝膠過濾色譜；合成高聚物中用有機(jī)物作流動性成為凝膠滲透色譜。親和色譜生物體內(nèi)生物分子之間都具有親和力，能形成可逆絡(luò)合物，利用這種可逆絡(luò)和與解離原理進(jìn)行色譜分離，即把配基鍵和在不溶於水的惰性載體上成為親和物從而進(jìn)行提純的技術(shù)。如酶與基質(zhì)、抑制劑、變構(gòu)效應(yīng)劑或輔酶；激素與細(xì)胞受體；維生素與結(jié)合蛋白；基團(tuán)與核酸；抗體與抗原；外源凝集素與紅細(xì)胞表面的抗原等都具有親和力。按照色譜的動力學(xué)過程分為1、洗脫法組分在固定相和流動性反復(fù)的進(jìn)行分配和再分配，或吸附與解吸。由於各組分的分配係數(shù)不同或吸附係數(shù)不同而分離。2、頂替法（置換法）直接用流動性作為頂替劑，試樣進(jìn)入色譜柱後反復(fù)平衡。流動相在在固定相上的溶度或吸附力比試樣強(qiáng)和試樣中各組分的溶度與吸附力差異而分離。前沿法（迎頭法）用試樣本身或溶解在溶劑中作為流動性。流動性通過色譜柱是按照組分在固定相上的溶度或吸附力差別順序流出。最後流出的與通入試樣的組分相同。只用於簡單混合物的分離。氣相色譜（GC）分離原理：載氣（如N2）通過進(jìn)樣器將樣品帶往色譜柱進(jìn)行分離，空氣和H2進(jìn)入檢測器燃燒升溫。色譜柱和檢測器溫度由控溫儀控制。樣品經(jīng)檢測後信號進(jìn)入放大器放大，進(jìn)入記錄儀記錄。

氣相色譜法分類：氣—固

（GSC）只用於分離低分子物質(zhì)氣—液（GLC）氣源：提供載氣（N2）H2

、空氣（燃燒）氣流進(jìn)化及控制流量系統(tǒng)死時間tM：不被吸附成分通過色譜住停留的時間；保留時間tR被吸附成分通過色譜住停留的時間；調(diào)整保留時間t’R=tR-tM由於吸附不被吸附成分多停的留時間死體積VM=tM.F（流速×?xí)r間）保留體積

VR=tR.F調(diào)整保留體積VR’=t.’RF=VR-VM相對保留值α=t’R（2）/t’R（1）

組分1對組分2相對保留值分配係數(shù)K=Cs/Cm被分離組分在固相和在流動相的濃度之比。色譜區(qū)域?qū)挾龋航M分在色譜柱中譜帶擴(kuò)張函數(shù)。表示方法：標(biāo)準(zhǔn)偏差σ標(biāo)準(zhǔn)偏差0.607倍峰高處峰寬的一半。半峰寬度

Y1/2（半寬度、區(qū)域?qū)挾龋┓甯咭话胩幍膶挾??；€寬度Y色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上的餓切線在基線上的截距。

Y=4σ

；Y1/2=2.354σ

分配容量k=vl/vg柱內(nèi)液體所占體積/柱內(nèi)氣體所占體積。

組分分離效果受動力學(xué)與熱力學(xué)因素影響。動力學(xué)因素：氣相擴(kuò)散與固（液）相傳質(zhì)熱力學(xué)因素：相對保留值、反應(yīng)在該溫度下組分在兩相分配過程與分配係數(shù)（與樣品和固定相的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有關(guān)）。A、B兩組分分離的必要條件：1.兩組分分配係數(shù)必須有差異。2.區(qū)域擴(kuò)展的速率小於區(qū)域分離速率。3.保證快速分離的前提下提供足夠長的色譜柱。色譜定性、定量分析定性分析確定色譜圖上每一個峰所代表的物質(zhì)。在色譜條件一定時，任何一種物質(zhì)都有確定的保留值。通過比較以知物與未知物的保留參數(shù)可以確定時什麼物質(zhì)。定量分析

fihfiA分別是峰高和麵積校正因數(shù)。對稱的峰，用手工測量AI=1.065

hIY1/2

不對稱的峰AI=1/2hI（Y0.15+Y0.85）hIY0.15

和Y0.85是峰高0.15和0.85出的寬度。絕對校正因數(shù)與相對校正因數(shù)絕對校正因數(shù)指某組分I通過檢測器的量與檢測器對I組分回應(yīng)信號之比：fiA=

AI/mi；fih=mi/

hI相對校正因數(shù)指某組分I與基準(zhǔn)組分s的絕對校正因數(shù)之比。fisA=

miAs/AIms

；fish=mihs/mshI一般文獻(xiàn)是指相對校正因數(shù)。定量方法外標(biāo)法：

將欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配成系列濃度，進(jìn)行色譜分析，以峰高或面積對濃度作圖製作標(biāo)準(zhǔn)曲線，試樣進(jìn)行分析後，在曲線上查得峰面積或峰高後可以求得其百分含量。內(nèi)標(biāo)法

當(dāng)只須測定試樣中某幾個組分，或試樣中所有組分不可能全部出峰時，用內(nèi)標(biāo)法。準(zhǔn)確稱取樣品，加入一定量某種物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)，然後進(jìn)行色譜分析。根據(jù)被測物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)在色譜圖上相應(yīng)峰面積（或峰高）和相對校正因數(shù)求出某組分的含量。mi/ms=

AIfisA/AsfssA

；mi

=

AIfisAms/AsfssAmi%=（mi/m）×100%=（

AIfisAms/AsfssA）歸一法

歸一是把式樣中所有組分得含量之和按100%計(jì)算，以它們相應(yīng)的色譜峰面積或峰高為定量參數(shù)，通過下列公式計(jì)算各組分含量。mi%=（AIfisA/∑fisAmi）×100%或mi%=（hIfish/∑fishmi）×100%氣相色譜儀結(jié)構(gòu)1.氣路系統(tǒng)：載氣/氫氣、氮?dú)?、氦氣和氬氣。氣路結(jié)構(gòu)/減壓閥、淨(jìng)化器、穩(wěn)壓閥、壓力錶、流量計(jì)。2.進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣器、汽化室。3.分離系統(tǒng)：色譜柱/填充柱；內(nèi)徑2—4mm，長度1—10m。柱形有U形和螺旋形。螺旋形直徑與柱內(nèi)徑之比為15：1—25：1?？招拿?xì)管柱材質(zhì)為玻璃或石英，內(nèi)徑一般為0.2—0.5mm，長度為30—300m，螺旋形。色譜柱分離效果與柱長、柱形、柱徑、固定相和柱填料製備技術(shù)及操作條件有關(guān)。氣相色譜儀結(jié)構(gòu)4.溫控系統(tǒng)：用來設(shè)定、控制和測量色譜柱爐溫、汽化室、檢測室得溫度。溫度直接影響色譜柱的選擇性、分離效果和檢測器靈敏度及穩(wěn)定性。5.檢測系統(tǒng)：檢測器將載氣中組分轉(zhuǎn)變成易於測量的（電）信號。微分型檢測器分為濃度型（熱導(dǎo)池、電子捕獲檢測器器）和品質(zhì)型（氫火焰離子化檢測器）。檢測器性能指標(biāo)

靈敏度：輸入單位被檢測物質(zhì)時引起的輸出信號S=ΔR/Δm。濃度型：S=Ac1F0/c2m其中：A峰面積（cm2），c1為記錄器靈敏度（mv/cm），c2

為記錄器走紙速度（cm/min），F(xiàn)0為出口流動相速度（mL/min），m為進(jìn)入檢測器的品質(zhì)。氣體樣品Sg單位為mv.mL/mL；液體樣品Sl=60Ac1/c2m，Sl單位為mv.mL/mg，60 是時間分換算成秒的因數(shù)。檢測限D(zhuǎn)=2RN/S恰能產(chǎn)生2倍噪音的信號檢測器線性範(fàn)圍用濃度上下限比值表示：107/10=106檢測器熱導(dǎo)池檢測器（TCD）：結(jié)構(gòu)簡單、性能穩(wěn)定、線性範(fàn)圍寬。氫火焰離子化檢測器（（FID）：結(jié)構(gòu)簡單靈敏度高、死體積小、回應(yīng)快、線性範(fàn)圍寬、穩(wěn)定性好（永久性氣體不產(chǎn)生信號）。檢測器電子捕獲檢測器（ECD）：只對於具有電負(fù)性的物質(zhì)，如含有鹵素、S、P、N的物質(zhì)有回應(yīng)。β—放射源為負(fù)極，不鏽剛為正極。脈衝電壓使β—放射源放射β—射線，將載氣電離出低能電子並且向正極運(yùn)動形成恒定基流，電負(fù)性物質(zhì)俘獲低能電子降低基流，產(chǎn)生負(fù)信號—倒峰。火焰光度檢測器（FPD）又叫硫磷檢測器，是對含硫、磷有機(jī)化合物具有高度選擇性和高靈敏度的檢測器。離子交換色譜法離子交換色譜種類1、多孔樹脂細(xì)網(wǎng)（凝膠型）和粗網(wǎng)（大孔型）。前者溶漲後為多孔樹脂，孔徑大小決定於樹脂交連度。常見的是苯乙烯與二乙烯苯共聚物，具有比較細(xì)小的空和伸到內(nèi)部的溝、管道。優(yōu)點(diǎn)具有較高的試樣容量；弱點(diǎn)孔徑小傳質(zhì)慢，柱效低不耐高壓，超限後降壓也不復(fù)原。

大孔樹脂孔徑不均勻，解決傳質(zhì)慢問題。2、薄殼樹脂在玻璃微珠（≈30μm）的表面形成薄的（≈1μm）離子交換樹脂層。具有優(yōu)點(diǎn)離子只出入表面，樹脂不需要較高的交連度，柱效高，分離速率快；可以製備均勻和任意厚度的樹脂層；化學(xué)組分和樹脂交連度沒有限制；選用適當(dāng)玻璃珠可以製備一定粒度範(fàn)圍的薄殼樹脂；機(jī)械強(qiáng)度好，耐壓，薄殼層不易剝離；可以直接用幹樹脂填充色譜柱。弱點(diǎn)容量低，用靈敏度高的檢測器。3、表面多孔薄殼樹脂在玻璃微珠表面先蓋一層較為惰性的樹脂層作為載體，然後在比較大的孔（80～200μm）上沉積交換樹脂。試樣容量比薄殼樹脂更小，但是表面積對體積比值更高，柱效高，但是強(qiáng)度不如薄殼樹脂，有時會脫落。4、刷子行樹脂在玻璃珠的表面鍵合刷子型的有機(jī)餘基，如烷基或芳基，以及引入離子交換基團(tuán)。由於玻璃微珠表面積小，試樣容量小，但可以用有機(jī)溶劑做流動相。如果用多孔矽膠代替玻璃微珠，並在引入離子交換基團(tuán)後進(jìn)行矽烷化可以增加容量。樹脂交換量與矽膠表面積成正比，顆粒小的柱效高，分離時間短。樹脂耐壓，流動相成分改變時體積不變。但是矽膠在pH≥8.5時開始溶解，故不能用於鹼性強(qiáng)的溶液作流動相。1975年Small提出用電導(dǎo)檢測器的離子交換色譜法首次實(shí)現(xiàn)了有機(jī)和無機(jī)陰離子的快速分離檢測。用離子交換樹脂要有強(qiáng)的滲透性。不用離子交換樹脂的用含己基硫酸鹽或辛基硫酸鹽的洗脫液動態(tài)塗漬的柱子分離陽離子；辛基或十六烷基季銨鹽用於分離陰離子。經(jīng)典離子交換色譜在樹脂粒度、交換容量、分離柱內(nèi)徑與長度及分離時間都大於現(xiàn)代離子家換色譜。現(xiàn)代檢測手段先進(jìn)及用泵輸送流動相流速穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。離子對色譜法離子對色譜分為正相與反相。正相是極性大的固定相，採用極性小的流動相，極性小的組分先流出，極性大的組分慢流出。反相色譜採用疏水型非極性化學(xué)鍵合相，用極性大的流動性。極性大的組分先流出，極性小的組分或流出。如十八烷基矽膠鍵合相或苯基矽膠鍵合相，流動性用低濃度的離子對試劑水溶液或能溶於水的有機(jī)溶劑，如甲醇或乙醇等與水組成的混合溶劑。能夠有效的分離有機(jī)酸堿和兩性化合物，廣泛用於分離羧酸、磺酸、酚、胺、季銨鹽、氨基酸、多肽、核酸及其衍生物。離子對試劑陽離子型伯銨鹽、仲銨鹽、叔銨鹽、季銨鹽陰離子型無機(jī)物鹵離子、磷酸氫根離子、磷酸二氫根離子、高氯酸根離子、硫酸根離子、硝酸根離子。有機(jī)物甲酸離子、乙酸離子、丙酸根離子、檸檬酸氫根離子、苯甲酸離子、水楊酸根離子、苦味酸離子、硫酸氫酯離子、磺酸根離子等水是反相離子對色譜法中流動相的主要組成部分，固定相是非極性鍵合相，組分與離子對試劑結(jié)合後改變組分離子的親水性或疏水性，改變了保留值。利用碳鏈較長的磺酸鹽可以增大保留值，利用磷酸二氫根可增大親水性。保留值隨離子對試劑濃度增大而增大碳鏈長的離子對試劑由於表面活性劑作用，保留值增大有一個極限值。流動相的pH值影響弱電解質(zhì)的電離平衡，pH值上升，弱酸電離度增大，陰離子濃度增加，與離子對試劑作用增強(qiáng)。分離兩性化合物時，用陰離子對實(shí)際必須使兩性離子帶正電，既流動相的pH值應(yīng)該小於它們的等電點(diǎn)；用陽離子對試劑必須使兩性離子帶負(fù)電，即流動相的pH值應(yīng)大於它們的等電點(diǎn)。，反相離子對色譜機(jī)理各種機(jī)理1、與試劑結(jié)合後改變了疏水性，影響了在固定相和流動相之間的分配係數(shù)，從而改變了色譜行為。2、疏水型性離子對可逆吸附在非極性固定相表面後與祖墳發(fā)生動態(tài)離子交換，即形成具有離子交換能力的表層。帶相反電荷組分的離子與離子對試劑的平衡離子發(fā)生交換。離子對碳鏈長的組分，交換劑的覆蓋面大，保留值長。3、離子相互作用非極性固定相的表面先吸附流動相中部分親脂性的帶正或負(fù)電荷的離子對形成第一正、或負(fù)電層。為了維持電中性外面吸附了相反電荷的其他離子，形成第二相反電荷層。固定相的表面吸附帶負(fù)或正電荷的組分離子使第一層增加負(fù)、或正電荷。為了維持電中性，就從流動相中拉入帶相反電荷的離子，結(jié)果離子被成對的吸附在固定相表面上，但不是形成離子對。因?yàn)楦鞣N組分的離子與過渡性表面的疏水作用和雙電層的靜電引力不同因而表現(xiàn)不同的保留值。凝膠色譜凝膠色譜法是一種化學(xué)惰性的高度多孔的非離子型凝膠小球作為固定相。特點(diǎn)分離原理分子篩原理，大分子先流出、小分子依次流出。凝膠色譜法適宜於分離非離子型的，分子量大於2000的高分子化合物天然高分子化合物，如蛋白質(zhì)、核酸可以很好的被分離一般式樣可以用娘叫滲透色譜法進(jìn)行試分離，一了界試樣的複雜程度和分子量的分佈範(fàn)圍色譜峰容量小，不能分離分子量近似或相同的物質(zhì)凝膠色譜固定相固定相的要求在pH值很寬的範(fàn)圍內(nèi)是化學(xué)惰性。本身中性，不含可離解基團(tuán)。分離過程不發(fā)生離子交換。溶漲度受交連度影響，交連度越低溶漲度越大，對大分子滲透性越強(qiáng)。機(jī)械強(qiáng)度要好，否則使用過程變形，增大阻力，減少流速以至阻塞。固定相種類葡聚糖凝膠SephadexG蔗糖經(jīng)微生物發(fā)酵後製成的有葡萄糖殘基構(gòu)成的分子量大的聚合物。經(jīng)提純後用鹽酸降解為分子量平均為104～20×104葡聚糖。用乙醇分級沉澱，在鹼性溶液中與環(huán)氧氯丙烷，生成由甘油交連的葡聚糖醚的不溶性三維強(qiáng)親水結(jié)構(gòu)。G後面的數(shù)字表示沒10kg幹葡聚糖凝膠溶漲吸水量如SephadexG—200表示1g幹凝膠吸水20mL左右。SephadexG系列可以經(jīng)受高溫消毒，對水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸都穩(wěn)定。強(qiáng)酸型醚鍵水解。長時間與氧化劑接觸骨架會破壞。SephadexG的分級方法是用微球直徑表示。適用於水、甲醇、DMSO作流動相。主要用於分離蛋白質(zhì)、核酸、酶和多糖。分離範(fàn)圍從1000以下到8×105，固流比0.8～

1.8，不能承受壓力SephadexLH—20，LH表示親脂溶劑和親水溶劑均能溶漲?？梢苑蛛x不溶於水的的物質(zhì)。聚丙烯醯胺凝膠由丙烯醯胺與N，N’—亞甲基雙丙烯醯胺共聚而成。後者為交連劑。交連劑的比例越大，產(chǎn)品的孔徑越小。商品名Bio—GelP。加水自然溶漲，P後的數(shù)字乘1000表示肽與蛋白質(zhì)的排除極限。性質(zhì)與SephadexG很相似，可以不被微生物腐蝕，耐酸鹼性不如前者。吸水量與SephadexG有近似值。規(guī)格劃分較細(xì)。甲基丙烯酸聚乙二醇凝膠甲基丙烯酸單酯與雙甲基乙二醇酯共聚物。改變配比可以改變孔徑、比表面積和羥基官能團(tuán)數(shù)目。商品名Spheron,各種型號。具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性與機(jī)械強(qiáng)度，可以在高流速下使用，溶漲後體積變化小。內(nèi)部結(jié)構(gòu)是大網(wǎng)狀幹凝膠和氣溶膠的混合物。瓊脂糖凝膠瓊脂糖是由1，3—連接的β—吡喃半乳糖殘基和3，6—脫水，α—

半乳糖1，4—交替交連而成，糖鏈呈雙螺旋狀，鏈間有氫鍵連系，縱橫交錯成多孔狀結(jié)構(gòu)。商品名Sepharose和Bio—GelA等，製成微球。前者一溶漲狀態(tài)，懸浮在0.02℅的疊氮化鈉（防腐劑）溶液中，後者懸浮在0.02℅的疊氮化鈉的0.001mol/L三羥甲基氨基甲烷和EDTA中，一充分水合形式供應(yīng)。不能脫水乾燥，否則不能復(fù)原。分級範(fàn)圍相同是可以代替SephadexG和Bio—GelP，不可用於破壞氫鍵的物質(zhì)。其他凝膠小孔球形矽膠滲鹽後高溫焙燒而成?；瘜W(xué)惰性、熱穩(wěn)定性、機(jī)械強(qiáng)度好。使用溫度高、使用壽命長。粗粒多孔矽膠的柱效比交連聚苯乙烯凝膠的低。微粒多孔矽膠是高效高速凝膠，多孔矽膠平均力度為10～

200nm，排除極限為10～

106。多孔玻璃珠商品有Bioglass系列和CPG[controlledporeglass控孔玻璃]系列。特點(diǎn)是孔徑均勻，孔徑不受流動相的化學(xué)性質(zhì)、pH值和離子強(qiáng)度影響不被微生物腐蝕、機(jī)械強(qiáng)度好、高壓高速使用以及可以用熱硝酸清洗，500℃

蒸汽消毒。交連聚苯乙烯凝膠苯乙烯與二乙烯苯共聚物。適宜於凝膠滲透色譜用。商品Poragel的微孔尺寸很小，排除極限分子量是14000。大孔交連聚苯乙烯凝膠Styragel和Bio—BeadSM系列是大孔幹凝膠和氣溶膠混合體，具有良好的色譜特性，化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，溶漲後體積變化很小。除丙酮和乙醇等強(qiáng)極性溶劑外，其他有機(jī)溶劑均可以作流動相。另有大空聚苯乙烯凝膠是將凝膠骨架磺化到一定程度，商品名Aquapak,可以用水作流動相，但是有離子交換作用，影響凝膠色譜特性，可用離子強(qiáng)度高的液體作流動相可以消除影響。聚乙二醇凝膠商品名FractogelPGM2000,對分離親脂性和親水性的物質(zhì)都有用。丙烯醯胺/瓊脂糖凝膠商品名Ultrogel是顆粒堅(jiān)硬的微球，在水中溶漲，機(jī)械強(qiáng)度好。親和色譜法基本原理被提純物質(zhì)與載體形成親和物，然後用不同pH值的淋洗液洗脫。親和十分牢固的大分子用強(qiáng)酸、強(qiáng)鹼洗脫。洗脫後迅速中和稀釋、透析，恢復(fù)大分子的天然活性。也可以加入特種配基將結(jié)合牢固的配基置換出來。特點(diǎn)簡單快速回收率高，一次可以將粗品純化千百倍。用於提純蛋白質(zhì)、酶、酶抑制劑、抗體、抗原、基因、激素、核酸等。製備親和物載體的條件均勻、有一定硬度、不溶解於水；易為大分子滲透的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；具有相當(dāng)數(shù)量可以供交連的基團(tuán)；沒有吸附性；有足夠的化學(xué)穩(wěn)定性；不受微生物腐蝕或酶解。摸前還沒有完全滿足以上條件的載體。較好的是瓊脂凝膠、交連葡聚糖、聚丙烯醯胺凝膠、多孔玻璃微球。最常用瓊脂凝膠。紙上色譜紙上色譜源自19世紀(jì)中葉，20世紀(jì)初成為毛細(xì)管分離法?，F(xiàn)代紙上色譜是1941年提出，用於氨基酸分離。固定相一般是纖維素上吸附的水分，流動相為與水互不相溶的有機(jī)溶劑；也可以用紙吸附甲醯胺、緩衝溶液作固定相。操作試樣用點(diǎn)樣管點(diǎn)在濾紙一端，紙條直立在密閉槽裏，槽底部放有展開溶劑，帶有試樣的一端浸在展開劑中在毛細(xì)作用下展開劑向上展開帶動試樣中組分向上行。試樣中的組分在兩相中進(jìn)行分配而分離開。當(dāng)展開劑前沿上升一定高度，取出紙條，風(fēng)乾展開劑，用噴霧器噴上顯色劑後被分離組分就顯示出色斑。如果一次分離多個試樣，可以用大濾紙點(diǎn)好試樣後訂成圓筒，直立在展開槽中展開。點(diǎn)樣前可以將濾紙挖成柵欄狀，可以避免展開過程中試樣橫向擴(kuò)散。下行法展開是將展開劑放在展開槽上部，濾紙條跨越容器口下垂，展開劑滲入濾紙條後借重力下垂展開。圓形濾紙展開法用一圓形濾紙，圓心開一小孔，插如一棉芯或紙芯。在紙芯外用鉛筆畫同心圓，將式樣點(diǎn)在同心圓圓周上。將圓形濾紙平放在培養(yǎng)皿上。紙芯插入培養(yǎng)皿內(nèi)的展開劑內(nèi)。在濾紙上再蓋一個同樣大小的培養(yǎng)皿。展開後各組分是一系列同心圓。圓形紙色譜法比一般紙色譜法快分離效果好。但是裏圓心越遠(yuǎn)同心圓越大，因此檢出靈敏度低。薄層色譜法—

淋洗中組分的離子在流動相的作用下離開固定相表面，雙電荷平衡破壞。為了維持電中型，對離子對等的離開固定相表面。極性強(qiáng)的對離子趨向於形成離子鍵，非極性強(qiáng)的對離子通過動態(tài)離子交換的趨勢大。提高反相離子對色譜的分離效能條件非極性鍵合相鍵合最大的可以提高組分離子的保留值鍵合相中碳鏈長的可以增加固定相的親脂性使用濃度大的和疏水性強(qiáng)的離子對試劑可以提高組分離子的保留值選擇適當(dāng)?shù)木徯n溶液流動相中有機(jī)溶劑與水的配比小的有利於提高離子對的疏水性柱溫低一利於分離，提高柱溫可以降低組分離子的保留值氣相色譜分析實(shí)例氣相色譜法測定葡萄中烯唑醇農(nóng)藥的殘留量

烯唑醇(diniconazole)又稱力克菌、特普唑，是具有保護(hù)和治療作用的三唑類內(nèi)吸殺菌劑和甾醇脫甲基化抑制劑，可預(yù)防各類作物葉部和穗部病害，具有廣譜殺菌作用。主要儀器和試劑

ShimadzuGC—17A氣相色譜儀，配備ECD和CR2A數(shù)據(jù)處理器。

烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品：純度＞99％。準(zhǔn)確稱取烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)品O．1000g，用少量丙酮溶解後，用正己烷定容至l00mL，配成l.00g/L的烯唑醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再根據(jù)檢測要求用正己烷稀釋成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。色譜分析條件

色譜柱：OV—170l石英毛細(xì)管柱，30m×O.53mmi.d．×1．μm(膜厚)。柱溫為220℃，進(jìn)樣口溫度為270℃，檢測器溫度為300℃；載氣為氮?dú)?99．999％)，流速20mL／min，尾吹100kPa；外標(biāo)法定量；進(jìn)樣量：1μL。實(shí)驗(yàn)步驟提?。簩⑵咸褬悠酚媒M織搗碎機(jī)搗碎，稱取均勻試樣5g(精確到0.0lg)於30mL離心管中，加入5mL丙酮，在混勻器上混勻lmin，以2500r／min的速率離心3min，將上清液倒人另一50mL離心瓶中，殘?jiān)?×5mL丙酮處理，合併提取液。

淨(jìng)化：在提取液中加入l0mL50g/L硫酸鈉水溶液和7mL正己烷，於混勻器上混勻lmin，以2500r／min的速率離心3min後，用尖嘴吸管將有機(jī)相取到另一試管中，提取液再用2×7mL正己烷提取，合併提取液並於45℃空氣流下濃縮至近幹，用2mL丙酮—正己烷(體積比為1：1)溶液溶解殘?jiān)?。將固相萃取小柱自上而下的按SupelcleanEN—VI—CarbSPE小柱(3mL)、SupelcleanLC—ALUMN—INANSPE小柱(3mL)的順序串聯(lián)接好，安裝在真空抽濾裝置上，用8mL丙酮—正己烷(體積比為1：1)溶液淋洗小柱；然後在固相萃取小柱下放好收集管，將2mL樣品提取液加到小柱上，再用4×2mL丙酮—正己烷(體積比為1：1)溶液洗滌試管並一起轉(zhuǎn)移至小柱中。收集洗脫液(保持洗脫流速為2mL／min)。將洗脫液於45℃空氣流下吹幹，用1．0mL正己烷溶解殘?jiān)徇M(jìn)行GG-ECD測定。

液相色譜分析實(shí)例中藥材中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的反相高效液相色譜法儀器與藥品：島律LC—10AT泵，SPD—10Avp陣列二極體檢測器，C1sss—10Avp5工作站，SIL—10A自動進(jìn)樣器。DWF—100型電動植物粉碎機(jī)；CSF—1A型超聲波發(fā)生器；LD5—2A型離心機(jī)；ZFQ—922型旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器；玻璃層析柱(25cm×1．5cm，頭尖)。涕滅威(aldicarb)、呋喃丹(carbofuran)和西維因(carbaryl)農(nóng)藥對照品純度均大於99％。三七、白芍、西洋參藥材各3批；當(dāng)歸藥材3批丙酮(1000mL加lg高錳酸鉀重蒸餾)、二氯甲烷(重蒸餾)，無水硫酸鈉均為分析純；中性層析用氧化鋁(100—200目)，(550℃活化5h，冷卻後，加水使含水量為3．0％減活，加水後振搖至不結(jié)塊。

色譜條件YWG—C18(250mm×4.6mm）5μL加YwG—C18預(yù)柱；柱溫：室溫；流動相：乙脂—水(38：62)；流量：1．OmL/min；進(jìn)樣量：20μL；檢測波長：200nm(檢測涕滅威、呋喃丹)，220nm(檢測西維因)按上述色譜條件．提取

將自然晾乾的田七、西洋參、白芍和當(dāng)歸(當(dāng)歸切片後再用矽膠乾燥)切片後，用植物粉碎機(jī)粉碎，各取通過2號篩的樣品粉末約2．0g．精密稱定，置50mL量瓶中。加丙酮，超聲波振盪提取3次(40，20，20ML)，提取時間分別為30，10。10min，

合併丙酮提取液．離心10min(4000r/min)，傾其上清液於250mL圓底燒瓶中，在40℃水浴中減壓濃縮至近幹，然後用空氣輕吹至幹。即刻用2％氯化鈉溶液30mL分次將殘?jiān)耆浦?0mL分液漏斗中用二氯甲烷萃取5次(20ml，15mL×4)，每次至少振搖1min。萃取液通過裝有