高中生物專題5DNA和蛋白質技術課題1DNA的粗提取與鑒定課件

專題5DNA和蛋白質技術課題1DNA的粗提取與鑒定DNA的提取是現代生物技術進行中藥鑒別的最關鍵步驟?？侱NA的有效提取要求材料中的DNA盡可能少地降解。DNA的質量將直接關系到實驗的成敗。不同的研究目的對DNA的純度和量的要求不盡相同。課題背景課題1DNA的粗提取與鑒定課題2多聚酶鏈式反響擴增DNA片段課題3血紅蛋白的提取和別離課題目標嘗試對植物或動物組織中的DNA進行粗提取，了解DNA的物理化學性質，理解DNA粗提取以及DNA鑒定的原理。一、根底知識1.提取DNA的方法②DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些蛋白質那么溶于酒精。利用這一原理，可以將DNA與蛋白質進一步別離。〔1〕DNA的溶解性①在不同濃度的NaCl溶液中溶解度當氯化鈉的物質的量濃度為2mol／L時，DNA的溶解度最大，濃度為0.14mol／L時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出。在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低；在0.14mol/L時，DNA溶解度最??；當NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時，DNA的溶解度又逐漸增大。問題1.DNA在NaCl溶液中的溶解度如何變化？問題2.如何通過控制NaCl溶液的濃度使DNA在鹽溶液中溶解或析出？③洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響?！?〕DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性①蛋白酶能水解蛋白質，但是對DNA沒有影響。②大多數蛋白質不能忍受60~80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。2.DNA的鑒定①二苯胺染色法DNA與二苯胺〔沸水浴〕會染成藍色②甲基綠染色法甲基綠與DNA結合，呈綠色【典型例題】以下有關“DNA粗提取與鑒定”實驗的表達，正確的選項是〔〕〔多項選擇〕A．新鮮豬血、菜花等動植物材料均可用于DNA的粗提取B．植物材料需先用洗滌劑破壞細胞壁再吸水脹破C．DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液D．溶有DNA的NaCl溶液中加人二苯胺試劑，需沸水浴加熱后冷卻，再觀察顏色CD【方法點撥】1.新鮮豬血中大量成熟紅細胞內無DNA2.植物材料需先用纖維素酶和果膠酶破壞細胞壁再吸水脹破3.DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液1.實驗材料的選取二、實驗設計〔1〕選取原那么材料易得DNA含量豐富提取簡便〔2〕選材雞血細胞2.破碎細胞，獲取含DNA的濾液〔1)動物細胞參加蒸餾水，攪拌過濾后收集濾液〔2〕植物細胞參加洗滌劑和食鹽，攪拌研磨后過濾收集濾液3.去除濾液中的雜質方案一：30mL含DNA的濾液＋2mol/LNaCl→同方向攪拌，DNA溶解→參加蒸餾水→DNA析出→過濾得到過濾物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液問題1：濾液中的雜質可能有哪些細胞成分？核蛋白、多糖和RNA等雜質問題2：為什么反復地溶解與析出DNA，能夠除去雜質？用高濃度的鹽溶液能除去高鹽中不能溶解的雜質；用低鹽濃度使DNA析出，能除去在低鹽溶液中的雜質。方案二：30mL濾液＋嫩肉粉〔木瓜蛋白酶〕→靜置10～15分鐘→DNA濾液方案三：30mL濾液→60～75℃恒溫保溫10~15分鐘→過濾獲得DNA濾液問題3：方案二與方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解雜質蛋白質，使提取的DNA與蛋白質分開；方案三是利用DNA和蛋白質對高溫耐受性的不同，使蛋白質變性，與DNA別離。4.DNA的析出與鑒定〔1〕析出：濾液+同體積冷卻95%酒精

白色絲狀物〔2〕溶解：將白色絲狀物溶于2mol/L的NaCl溶液中DNA＋二苯胺藍色物〔3〕鑒定：沸水5min【典型例題】D【方法點撥】相關操作選取的試劑A破碎雞血細胞蒸餾水B溶解核內DNA2mol/LNaCl溶液C提取雜質較少的DNA冷卻的95%的酒精DDNA的鑒定雙縮脲試劑下表有關“DNA粗提取和鑒定”的相關操作中所選取的試劑，錯誤的選項是〔〕1.可以利用DNA在氯化鈉溶液中的溶解度不同，將DNA分子溶解或析出2.DNA不容易酒精，因此可以用95%的冷酒精提取雜質較少的DNA三、操作提示3.二苯胺試劑要現配現用，否那么會影響鑒定的效果。1.以雞血為實驗材料時，每100mL血液中需要參加3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2.參加洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否那么容易產生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。參加酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀?！菊n堂小結】〔2015江蘇卷.25〕圖1、2分別為“DNA的粗提取與鑒定”的實驗中局部操作步驟示意圖,以下表達正確的選項