食品衛(wèi)生檢測(cè)技術(shù)課件

緒論

緒論

第一節(jié)

食品衛(wèi)生檢測(cè)技術(shù)的內(nèi)容

一、食品衛(wèi)生理化檢測(cè)技術(shù)的內(nèi)容介紹了食品衛(wèi)生理化檢驗(yàn)樣品的采集、制備、保存和預(yù)處理以及檢驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)處理等，重點(diǎn)介紹了食品中有害元素、農(nóng)藥獸藥殘留量、微生物毒素、食品中添加劑的檢測(cè)技術(shù)和分析步驟。

二、食品衛(wèi)生微生物檢測(cè)技術(shù)的內(nèi)容概述了食品細(xì)菌學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，詳細(xì)介紹了食品中菌落總數(shù)、大腸菌群、致病菌、霉菌的檢測(cè)技術(shù)和步驟。此外，還介紹了食品衛(wèi)生檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程、報(bào)告格式等。緒論第二節(jié)食品衛(wèi)生檢測(cè)的目的和任務(wù)

一、食品衛(wèi)生檢測(cè)的目的為了保持食品的安全性，預(yù)防食品變質(zhì)，防止有害物質(zhì)經(jīng)由食品而危害人類，保護(hù)人類健康。

二、食品衛(wèi)生檢測(cè)的任務(wù)通過食品衛(wèi)生檢測(cè)，判斷和鑒定食品的衛(wèi)生質(zhì)量，提出書面報(bào)告。為生產(chǎn)和銷售安全、衛(wèi)生、符合標(biāo)準(zhǔn)的食品提供可靠的科學(xué)依據(jù)，確保人體按正常劑量和以正常方式攝入的食品不會(huì)導(dǎo)致急、慢性中毒或感染疾病及產(chǎn)生危及攝入者本身及其后代健康的隱患。緒論第三節(jié)食品衛(wèi)生檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)隨著人們食品衛(wèi)生意識(shí)的不斷增強(qiáng)和食品科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，以及對(duì)外食品貿(mào)易的需要，我國(guó)食品衛(wèi)生檢測(cè)工作已經(jīng)提高到一個(gè)及其重要的地位。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，食品衛(wèi)生檢測(cè)技術(shù)得到不斷完善和更新，許多高靈敏度、高分辨率、新型高效的分析儀器越來越多地應(yīng)用于食品衛(wèi)生檢測(cè)，為食品衛(wèi)生檢測(cè)提供了更有力的手段。緒論第四節(jié)《食品衛(wèi)生檢測(cè)技術(shù)》課程的學(xué)習(xí)要求

1．要在學(xué)好分析化學(xué)、儀器分析、食品微生物、食品生物化學(xué)、食品營(yíng)養(yǎng)與衛(wèi)生等專業(yè)基礎(chǔ)課的基礎(chǔ)上學(xué)習(xí)這門課；2．要熟悉國(guó)家有關(guān)食品衛(wèi)生的法律法規(guī)。3．要以應(yīng)用能力的提高為主，對(duì)課程內(nèi)容要深刻理解、熟練掌握、準(zhǔn)確判斷，注重理論聯(lián)系實(shí)際，強(qiáng)化操作技能的實(shí)驗(yàn)和實(shí)訓(xùn)。

食品添加劑的測(cè)定

食品添加劑的測(cè)定

第一節(jié)概述

一、食品添加劑的概念及分類

1.食品添加劑的概念為了改善食品的品質(zhì)及色、香、味，各類食品添加劑被廣泛用于食品加工中?！吨腥A人民共和國(guó)食品衛(wèi)生法》對(duì)食品添加劑的定義是：“為改善食品的品質(zhì)和色、香、味，以及為防腐和加工的需要而加入食品中的化學(xué)合成或天然物質(zhì)?！睆纳鲜龆x可知，添加劑是出于技術(shù)目的而有意識(shí)加到食品中的物質(zhì)。顯然它不包括食品中的污染物。當(dāng)前食品添加劑已經(jīng)進(jìn)入到糧油、肉禽、果蔬加工等各個(gè)領(lǐng)域，也是烹飪行業(yè)必備的配料，并已進(jìn)入家庭的一日三餐。如方便面中含有的BHA（丁基羥基茴香醚）、BHT（二丁基羥基甲苯）等抗氧化劑，味精、肌苷酸等風(fēng)味劑，磷酸鹽等品質(zhì)改良劑。醬油中的防腐劑苯甲酸鈉、食用色素。飲料中含有酸味劑如檸檬酸、甜味劑如甜菊苷等。為此食品中添加劑的測(cè)定已成為食品分析中的重要內(nèi)容。食品添加劑的測(cè)定

2.食品添加劑的分類食品添加劑的種類繁多，我國(guó)較為常用的有300多種。食品添加劑的分類可按其來源、功能等劃分。按來源分為天然食品添加劑和化學(xué)合成添加劑。按其功能和用途，可將食品添加劑分為22類，它們是：酸度調(diào)節(jié)劑；抗結(jié)劑；消泡劑；抗氧化劑；漂白劑；膨松劑；膠姆糖基礎(chǔ)劑；著色劑；護(hù)色劑；乳化劑；酶制劑；增味劑；面粉處理劑；被膜劑；水分保持劑；營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑；防腐劑；凝固劑；甜味劑；增稠劑；香料；其他。食品添加劑的測(cè)定

二、食品添加劑的安全使用和管理對(duì)加工食品的要求，首先是無毒、無害、有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，同時(shí)也要求一定的色、香、味、形態(tài)及結(jié)構(gòu)。為此，在食品生產(chǎn)中，經(jīng)常使用各種添加劑。作為食品添加劑必須有一定的要求：（1）食品添加劑本身應(yīng)經(jīng)過充分的毒理學(xué)鑒定程序，證明

在使用限量范圍內(nèi)對(duì)人體無害。（2）食品添加劑進(jìn)入人體后最好能參與人體正常代謝，或在正常解毒過程，排泄過程中排出體外，不在人體內(nèi)積累、分解或形成對(duì)人體有害的物質(zhì)。（3）食品添加劑對(duì)食品的營(yíng)養(yǎng)成分不應(yīng)有破壞作用，也不應(yīng)影響食品的質(zhì)量及風(fēng)味。食品添加劑的測(cè)定

（4）食品添加劑必須有一定的工藝功效，具有保持食品營(yíng)養(yǎng)，防止腐敗變質(zhì)、增強(qiáng)感觀性狀、提高產(chǎn)品質(zhì)量的作用，應(yīng)在較低限量?jī)?nèi)產(chǎn)生顯著效果。（5）使用方便、安全、易于貯存、運(yùn)輸與處理。

（6）添加于食品后能被分析鑒定出來。隨著食品工業(yè)的迅速發(fā)展，正確使用食品添加劑以保證食品質(zhì)量，保證人民身體健康，以及研制、開發(fā)、推廣無毒或低毒的食品添加劑就有著更重要的意義。而食品添加劑的檢測(cè)就起到了監(jiān)督、保證與促進(jìn)的作用。食品添加劑的測(cè)定添加劑作為食品工業(yè)的重要組成部分，雖然它只在食品中添加0.01%～0.1%，卻對(duì)改善食品的性狀、提高食品的檔次等發(fā)揮著極其重要的作用。食品添加劑的應(yīng)用可歸納如下。①提高食品的保藏性能，延長(zhǎng)保質(zhì)期，防止微生物引起的腐敗和由氧化引起的變質(zhì)。據(jù)報(bào)道，各種生鮮食品在采收后由于不能及時(shí)加工或加工不當(dāng)損失約20％～30％。加入防腐劑和抗氧化劑可降低其損失，并延長(zhǎng)食品保存期。②改善食品的感官性狀，如食品的色、香、味、形、質(zhì)地等。這些是衡量食品品質(zhì)的常用指標(biāo)。③有利于食品的加工操作，適應(yīng)機(jī)械化、連續(xù)化大生產(chǎn)。如在豆腐中加凝固劑可大規(guī)模生產(chǎn)盒裝豆腐。食品添加劑的測(cè)定

從某種意義上說，沒有現(xiàn)代化的食品添加劑，就沒有現(xiàn)代化的食品工業(yè)。作為人為引進(jìn)食品中的外來成分，添加劑的使用也存在著安全性問題。除上述有益作用外，也會(huì)有一定的危害性。①無論是人工合成還是天然提取，添加劑在生產(chǎn)階段，因工藝問題使產(chǎn)品不純凈而帶入少量的有害雜質(zhì)。②某些食品添加劑長(zhǎng)期低劑量攝食可能帶來危害。如亞硝酸鈉一直被作為肉類制品的護(hù)色劑，除了可使肉類制品呈現(xiàn)鮮亮的紅色外，還具有防腐作用，抑制多種厭氧性細(xì)菌，因而在肉制品的加工保藏中占有重要意義。然而，隨著科學(xué)的發(fā)展，人們不但認(rèn)識(shí)到其本身具有較大的毒性，而且還可以與仲胺類物質(zhì)反應(yīng)生成對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有致癌作用的亞硝胺。在尚未找到更好的替代亞硝酸鈉的理想替代品之前，應(yīng)降低其使用量、嚴(yán)格控制用量，以降低危害。食品添加劑的測(cè)定

③某些非營(yíng)養(yǎng)食品添加劑的使用，可導(dǎo)致低營(yíng)養(yǎng)密度食品的增加，會(huì)影響食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。如人們常提及的垃圾食品。④人們非常關(guān)注的食品摻假問題，雖然并非都是由食品添加劑引起，但諸如用色素對(duì)質(zhì)量低劣或腐敗的食品著色等問題，卻與食品添加劑密切相關(guān)。中國(guó)《食品添加劑衛(wèi)生管理辦法》規(guī)定“禁止以掩蓋食品腐敗或以摻雜摻假、偽造為目的而使用食品添加劑”。食品添加劑的測(cè)定

為保證食品的質(zhì)量，避免因添加劑的不當(dāng)使用造成不合格食品進(jìn)入家庭。在食品的生產(chǎn)、檢驗(yàn)、管理中對(duì)食品添加劑的測(cè)定是十分必要的。中國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定了各類食品添加劑的適用范圍、最大使用量（參見有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)）。

三、食品添加劑檢測(cè)方法添加劑的種類多，功能各異，經(jīng)常測(cè)定的項(xiàng)目有：甜味劑、防腐劑、發(fā)色劑、漂白劑、著色劑、抗氧化等。測(cè)定中須先將上述添加劑從復(fù)雜的食品混合物中分離出來，再根據(jù)其物理、化學(xué)性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行測(cè)定。常用的方法有紫外分光光度法、薄層層析法、高效液相色譜法等。食品添加劑的測(cè)定第二節(jié)甜昧劑的測(cè)定

一、糖精鈉的檢測(cè)糖精鈉俗稱糖精，是廣泛使用的一種人工甜味劑，常用食品如醬菜、冰激凌、蜜餞、糕點(diǎn)、餅干、面包等均可以糖精鈉作甜味劑以提高其甜度。糖精鈉被攝食后，在人體內(nèi)不分解、不吸收，將隨尿排出，不能供給熱能，無營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，對(duì)其使用的安全性至今尚未有定論。在其產(chǎn)品檢驗(yàn)中，經(jīng)常出現(xiàn)含量超標(biāo)的現(xiàn)象。糖精鈉的定量分析方法有高效液相色譜法、薄層色譜法、離子選擇電極法及紫外分光光度法等。其中目前使用較多的是高效液相色譜法。食品添加劑的測(cè)定（一）高效液相色譜法

1．測(cè)定原理試樣加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)節(jié)pH至近中性，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。

2．試劑（1）甲醇經(jīng)濾膜（0.5μm）過濾。（2）氨水1+1。（3）乙酸銨溶液0.02mol/L。稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL溶解，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。食品添加劑的測(cè)定（4）糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液準(zhǔn)確稱取0.0851g經(jīng)120℃烘干4h后的糖精鈉（C6H4CONNaSO2·2H2O），加水溶解定容至100mL。糖精鈉含量1.0mg/mL，作為貯備溶液。（5）糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液吸取糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液10mL放入100mL容量瓶中，加水至刻度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，該溶液每毫升相當(dāng)于0.10mg的糖精鈉。

3．儀器高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器。食品添加劑的測(cè)定4．分析步驟（1）樣品處理①汽水稱取5.00～10.00g，放入小燒杯中，微溫?cái)嚢璩ザ趸迹冒彼?+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)?shù)捏w積，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。②果汁類稱取5.00～10.00g，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)?shù)捏w積，離心沉淀，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾。③配制酒類稱取10.00g，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至20mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。食品添加劑的測(cè)定

（2）高效液相色譜參考條件。

色譜柱

YWG-C184.6mm×250mm，10μm不銹鋼柱。

流動(dòng)相

甲醇-乙酸銨溶液（0.02mol/L）（5+95）。

流速

lmL/min。

檢測(cè)器

紫外檢測(cè)器，230nm波長(zhǎng)，0.2AΜF(xiàn)S

（3）測(cè)定取樣品處理液和標(biāo)準(zhǔn)使用液各10μL（或相同體積）注入高效液相色譜儀進(jìn)行分離，以其標(biāo)準(zhǔn)溶液峰的保留時(shí)間為依據(jù)進(jìn)行定性，以其峰面積求出樣液中被測(cè)物質(zhì)的含量，供計(jì)算。食品添加劑的測(cè)定5．結(jié)果計(jì)算

式中X―樣品中糖精鈉含量，g/kg；

m1―進(jìn)樣體積中糖精鈉的質(zhì)量，mg；

V1―樣品稀釋總體積，mL；

V2―進(jìn)樣體積，mL；

m2―樣品質(zhì)量，g。

結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的兩位有效數(shù)。允許差相對(duì)誤差≤10%。食品添加劑的測(cè)定（二）薄層色譜法

1．測(cè)定原理在酸性條件下，食品中的糖精鈉用乙醚提取、濃縮、薄層色譜分離、顯色后，與標(biāo)準(zhǔn)比較，進(jìn)行定性和半定量測(cè)定。

2、試劑（1）乙醚不含過氧化物（2）無水硫酸鈉（3）無水乙醇及乙醇（95％）（4）聚酰胺粉200目（5）鹽酸1+1食品添加劑的測(cè)定

（6）展開劑

①正丁醇+氨水十無水乙醇（7+1+2）；②異丙醇+氨水十無水乙醇（7+1+2）

（7）顯色劑

溴甲酚紫溶液（0.4g/L）。稱取0.04g溴甲酚紫，用乙醇（50％）溶解，加氫氧化鈉溶液（4g/L）1.1mL調(diào)制pH為8，定容至100mL

（8）硫酸銅溶液100g/L。稱取10g硫酸銅（CμSO4.5H2O），用水溶解并稀釋至100mL

（9）氫氧化鈉溶液40g/L

（10）糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取0.0851g經(jīng)120℃干燥4h后的糖精鈉，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇（95％）稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于lmg糖精鈉。食品添加劑的測(cè)定

3．儀器（1）玻璃紙生物制品透析袋紙或不含增白劑的市售玻璃紙（2）玻璃噴霧器（3）微量注射器（4）紫外光燈波長(zhǎng)253.7nm（5）薄層板10cm×20cm或20cm×20cm（6）展開槽

4．分析步驟（1）試樣提取。①飲料、冰棍、汽水取10.0mL均勻試樣（如試樣中含有二氧化碳，先加熱除去；如試樣中含有酒精，加4％氫氧化鈉溶液使其呈堿性，在沸水浴中加熱除去），置于100mL分液漏斗中，加2mL鹽酸（1+1），用30mL、20mL、20mL乙醚提取3次。合并乙醚提取液，用5mL鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過無水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加2.0mL乙醇溶解殘留物，密塞保存，備用。食品添加劑的測(cè)定

②醬油、果汁、果醬等稱取20.0g或吸取20.0mL均勻試樣，置于100mL容量瓶中，加水至約60mL，加20mL硫酸銅溶液（100g/L），混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液（40g/L），加水至刻度，混勻，靜置30min，過濾，取50mL濾液置于150mL分液漏斗中，加2mL鹽酸（1+1），用30mL、20mL、20mL乙醚提取3次。合并乙醚提取液，用5mL鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過無水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加2.0mL乙醇溶解殘留物，密塞保存，備用。食品添加劑的測(cè)定

③固體果汁粉等

稱取20.0g磨碎的均勻試樣，置于200mL容量瓶中，加100mL水，加溫使溶解、放冷，加20mL硫酸銅溶液（100g/L），混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液（40g/L），加水至刻度，混勻，靜置30min，過濾，取50mL濾液置于150mL分液漏斗中，加2mL鹽酸（1+1），用30mL、20mL、20mL乙醚提取3次。合并乙醚提取液，用5mL鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過無水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加2.0mL乙醇溶解殘留物，密塞保存，備用。食品添加劑的測(cè)定

④糕點(diǎn)、餅干等蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉多的食品

稱取25.0g均勻試樣，置于透析用玻璃紙中，放入大小適當(dāng)?shù)臒瓋?nèi)，加50mL氫氧化鈉溶液（0.8g/L）。調(diào)成糊狀，將玻璃紙口扎緊，放入盛有200mL氫氧化鈉溶液（0.8g/L）的燒杯中，蓋上表面皿，透析過夜。量取125mL透析液（相當(dāng)12.5g試樣），加約0.4mL鹽酸（1+1）使成中性，加20mL硫酸銅溶液（100g/L），混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液（40g/L），混勻，靜置30min，過濾。取120mL（相當(dāng)10g試樣），置于250mL分液漏斗中，加2mL鹽酸（1+1），用30mL、20mL、20mL乙醚提取3次，合并乙醚提取液，用5mL鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過無水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加2.0mL乙醇溶解殘留物，密塞保存，備用。

食品添加劑的測(cè)定

（2）薄層板制備

稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7.0mL水，研磨3～5min，立即涂成0.25～0.30mm厚的l0cm×20cm的薄層板，室溫干燥后，在80℃下干燥1h。置于干燥器中保存。（3）點(diǎn)樣

在薄層板下端2cm處，用微量注射器點(diǎn)10μL和20μL的樣液兩個(gè)點(diǎn)，同時(shí)點(diǎn)3.0μL、5.0μL、7.0μL、10.0μL糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，各點(diǎn)間距1.5cm。

（4）展開與顯色

將點(diǎn)好的薄層板放入盛有展開劑（正丁醇+氨水+無水乙醇或異丙醇+氨水+無水乙醇）的展開槽中，展開劑液層約0.5cm，并預(yù)先已達(dá)到飽和狀態(tài)。展開至l0cm，取出薄層板，揮干，噴顯色劑，斑點(diǎn)顯黃色，根據(jù)試樣點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的比移值進(jìn)行定性，根據(jù)斑點(diǎn)顏色深淺進(jìn)行半定量測(cè)定。

食品添加劑的測(cè)定5．計(jì)算

式中X—試樣中糖精鈉的含量，g/kg（或g/L）；

m1—測(cè)定用樣液中糖精鈉的質(zhì)量，mg；

m—試樣質(zhì)量（或體積），g（或mL）；

V1—試樣提取液殘留物加入乙醇的體積，mL；

V2—點(diǎn)板液體積，mL。食品添加劑的測(cè)定（三）離子選擇電極測(cè)定法

1．原理糖精選擇電極是以季銨鹽所制PVC薄膜為感應(yīng)膜的電極，它和作為參比電極的飽和甘汞電極配合使用以測(cè)定食品中糖精鈉的含量。當(dāng)測(cè)定溫度、溶液總離子強(qiáng)度和溶液接界電位條件一致時(shí)，測(cè)得的電位遵守能斯特方程式，電位差隨溶液中糖精離子的活度（或濃度）改變而變化。被測(cè)溶液中糖精鈉含量在0.02～1mg/mL范圍內(nèi)。電極值與糖精離子濃度的負(fù)對(duì)數(shù)成直線關(guān)系。

2．試劑乙醚使用前用鹽酸（6mol/L）飽和無水硫酸鈉鹽酸（6mol/L）取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL，使用前以乙醚飽和。食品添加劑的測(cè)定氫氧化鈉溶液（0.06mol/L）取2.4g氫氧化鈉加水溶解并稀釋至1000mL。硫酸銅溶液（100g/L）稱取硫酸銅（CuSO4·5H2O）10g溶于100mL水中。氫氧化鈉溶液（40g/L）氫氧化鈉溶液（0.02mol/L）將上述[2.（4）]稀釋而成。磷酸二氫鈉[c（NaH2PO4·2H2O）=lmol/L]溶液取78g磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）溶解后于500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。磷酸氫二鈉[c（Na2HPO4·12H2O）二lmol/L]取89.5g磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）于250mL容量瓶中溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻?？傠x子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液87.7mL磷酸二氫鈉溶液（1mol/L）與12.3mL磷酸氫二鈉溶液（1mol/L）混合即得。糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取0.0851g經(jīng)120℃干燥4h后的糖精鈉結(jié)晶移入100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻備用。此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg糖精鈉（C6H4CONNaSO2·2H2O）。食品添加劑的測(cè)定3．儀器精密級(jí)酸度計(jì)或離子活度計(jì)或其它精密級(jí)電位計(jì)，準(zhǔn)確到±lmV。糖精選擇電極217型甘汞電極具雙鹽橋式甘汞電極，下面的鹽橋內(nèi)裝入含1％瓊脂的氯化鉀溶液（3mol/L）。磁力攪拌器透析用玻璃紙半對(duì)數(shù)紙食品添加劑的測(cè)定4．分析步驟（1）樣品提?、?液體樣品濃縮果汁、飲料、汽水、汽酒、配制酒等。準(zhǔn)確吸取25mL均勻試樣（汽水、汽酒等需先除去二氧化碳后取樣），置于250mL分液漏斗中，加2mL鹽酸（6mol/L），用20，20，10mL乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5mL經(jīng)鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層，乙醚層轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，用少量乙醚洗滌原分液漏斗合并入容量瓶，并用乙醚定容至刻度，必要時(shí)加入少許無水硫酸鈉，搖勻，脫水備用。食品添加劑的測(cè)定

②含蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉量高的食品

糕點(diǎn)、餅干、醬菜、豆制品、油炸食品，稱取20.00g切碎樣品，置透析用玻璃紙中，加50mL氫氧化鈉溶液（0.02mol/L），調(diào)勻后將玻璃紙口扎緊，放人盛有200mL氫氧化鈉溶液（0.02mol/L）的燒杯中，蓋上表面皿，透析24h，并不時(shí)攪動(dòng)浸泡液。量取125mL透析液，加約0.4mL鹽酸（6mol/L）使成中性，加20mL硫酸銅溶液混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液（40g/L），混勻。靜置30min，過濾。取100mL濾液于250mL分液漏斗中，以下按①自“加2mL鹽酸（6mol/L）”起依法操作。

食品添加劑的測(cè)定

③蜜餞類稱取10.00g切碎的均勻樣品，置透析用玻璃紙中，加50mL氫氧化鈉溶液（0.06mol/L），調(diào)勻后將玻璃紙?jiān)o，放入盛有200mL氫氧化鈉溶液（0.06mol/L）的燒杯中，透析、沉淀、提取按②操作。④糯米制食品。稱取25.00g切成米粒狀的小塊均勻樣品，按②操作。（2）測(cè)定①標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mL糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（相當(dāng)于0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mg糖精鈉），分別置于50mL容量瓶中，各加5mL總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液，加水至刻度，搖勻。食品添加劑的測(cè)定將糖精選擇電極和甘汞電極分別與測(cè)量?jī)x器的負(fù)端和正端相連接，將電極插入盛有水的燒杯中，按其儀器的使用說明書調(diào)節(jié)至使用狀態(tài)，在攪拌下用水洗至電極起始電位（例如某些電極起始電位達(dá)-320mV）。取出電極用濾紙吸干。將上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按低濃度到高濃度逐個(gè)測(cè)定，得其在攪拌時(shí)的平衡電位值（-mV）。在半對(duì)數(shù)紙上以毫升（毫克）為縱坐標(biāo)；電位值（-mV）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②樣品的測(cè)定準(zhǔn)確吸取20mL上述[（4）①]項(xiàng)下的乙醚提取液置于50mL燒杯中，揮發(fā)至干殘?jiān)?，?mL總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液。小心轉(zhuǎn)動(dòng)，振搖燒杯使殘?jiān)芙?，將燒杯?nèi)容物全部定量轉(zhuǎn)移入50mL容量瓶中，原燒杯用少量水多次漂洗后，并入容量瓶中，最后加水至刻度搖勻。依法測(cè)定其電位值（-mV），查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得測(cè)定液中糖精鈉毫克。食品添加劑的測(cè)定

（3）計(jì)算

式中

X——樣品中糖精鈉的含量，g/kg或g/L；

m1——測(cè)定液中糖精鈉的質(zhì)量，mg；

V1——乙醚提取液的體積，mL；

V2——分取乙醚提取液的體積，mL；

m2——樣品的質(zhì)量或體積，g或mL。結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的兩位有效數(shù)。食品添加劑的測(cè)定

二、甜蜜素的測(cè)定甜蜜素的化學(xué)名為環(huán)己基氨基磺酸鈉，特點(diǎn)是甜味好，后苦味比糖精低。甜度不高，約為蔗糖的30倍，故用量大，易超標(biāo)使用。

（一）氣相色譜法1.測(cè)定原理在硫酸介質(zhì)中環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜法進(jìn)行定性和定量。

2．試劑正己烷；氯化鈉；色譜硅膠（或海砂）；50g/L亞硝酸鈉溶液；100g/L硫酸溶液；環(huán)己基氨基磺酸鈉溶液（含環(huán)己基氨基磺酸鈉大于98％。精確稱取1.0000g環(huán)己基氨基磺酸鈉，加水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉10mg）。食品添加劑的測(cè)定3．儀器漩渦混合器；離心機(jī)；氣相色譜儀（附氫火焰離子化檢測(cè)器）；10μL微量注射器。色譜條件如下：色譜柱長(zhǎng)2m，徑3mm，Μ形不銹鋼柱。固定相ChromosorbWAWDMCS80～100目，涂以10％SE-30。

測(cè)定條件柱溫80℃；氣化溫度150℃；檢測(cè)溫度150℃；流速為氮?dú)?0mL/min，氫氣30mL/min，空氣300mL/min。

4．樣品處理(1)液體樣品搖勻后直接稱取。含二氧化碳的樣品先加熱除去；含酒精的樣品加40g/L氫氧化鈉溶液調(diào)至堿性，于沸水浴中加熱除去，制成試樣。(2)固體樣品蜜餞類樣品將其剪碎制成試樣。食品添加劑的測(cè)定5．操作方法(1)試樣制備①液體試樣稱取20.0g試樣于l00mL帶塞比色管，置冰浴中。②固體試樣稱取2.0g已剪碎的試樣于研缽中，加少許色譜硅膠（或海砂）研磨至成干粉狀，經(jīng)漏斗倒入l00mL容量瓶中，加水沖洗研缽，并將洗液一并轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加水至刻度，不時(shí)搖動(dòng)，1h后過濾，即得試樣，準(zhǔn)確吸取20mL于l00mL帶塞比色管，置冰浴中。食品添加劑的測(cè)定

(2)測(cè)定①標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備準(zhǔn)確吸取1.00mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于l00mL帶塞比色管中，加水20mL，置冰浴中，加入5mL50g/L亞硝酸鈉溶液、5mLl00g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動(dòng)。然后準(zhǔn)確加入10mL正己烷、5g氯化鈉，搖勻后置旋渦混合器上振動(dòng)lmin（或振搖80次），待靜止分層后吸出己烷層于10mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離。每毫升己烷提取液相當(dāng)于lmg環(huán)己基氨基磺酸鈉，將標(biāo)準(zhǔn)提取液進(jìn)樣1～5μL于氣相色譜儀中，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。食品添加劑的測(cè)定

②樣品管加入5mL50g/L亞硝酸鈉溶液、5mL100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10mL正己烷、5g氯化鈉，搖勻后置漩渦混合器上振動(dòng)lmin（或振搖80次），待靜止分層后吸出己烷層于10mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離。然后將試樣提取液同樣進(jìn)樣l~5μL，測(cè)得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)線用中查出相應(yīng)含量。食品添加劑的測(cè)定

6．結(jié)果計(jì)算

式中X—樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量，g/kg；m—樣品質(zhì)量，g；

V—進(jìn)樣體積，μL；10—正己烷加入量，mL；

A—測(cè)定用試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉的量，μg。

精密度和允許誤差重復(fù)測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差＜7%。兩次平行測(cè)定相對(duì)允許誤差絕對(duì)誤差≤10%，平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留二位小數(shù)。食品添加劑的測(cè)定（二）分光光度法

1．測(cè)定原理在硫酸介質(zhì)中環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，與磺胺重氮化后再與鹽酸萘乙二胺偶合生成紅色染料，在550nm波長(zhǎng)測(cè)其吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

2.試劑三氯甲烷甲醇透析劑稱取0.5g二氯化汞和12.5氯化鈉于燒杯中，以0.0lmol/L鹽酸溶液定容至100mL食品添加劑的測(cè)定亞硝酸鈉溶液10g/L

硫酸溶液100g/L

尿素溶液100g/L，臨用時(shí)新配或冰箱保存鹽酸溶液100g/L

磺胺溶液10g/L，稱取1g磺胺溶于10％鹽酸溶液中，最后定容至100mL

鹽酸萘乙二胺溶液1g/L

環(huán)己基氨基磺酸鈉溶液精確稱取0.1000g環(huán)己基氨基磺酸鈉，加水溶解，最后定容至100mL。此液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉1mg。臨用時(shí)將環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋放10倍，此液每毫升含環(huán)己基氨基磺酸鈉0.1mg。食品添加劑的測(cè)定3．儀器分光光度計(jì)：漩渦混合器：離心機(jī)：透析紙。

4．試樣處理同氣相色譜法。

5．操作方法（1）提?、僖后w試樣稱取10.0g試樣于透析紙中，加l0mL透析劑，將透析紙口扎緊，放入盛有l(wèi)00mL水的200mL廣口瓶?jī)?nèi)，加蓋，透析20～24h得透析液。②固體試樣準(zhǔn)確吸取10.0mL經(jīng)氣相色譜法②處理后的試樣提取液于透析紙中，以下操作按本法①項(xiàng)進(jìn)行。食品添加劑的測(cè)定

（2）測(cè)定。①取兩支50mL帶塞比色管，分別加入l0mL透析液和l0mL標(biāo)準(zhǔn)液，于0～3℃冰浴中，加入lmL10g/L亞硝酸鈉溶液、lmL100g/L硫酸溶液，搖勻后放入冰水中不時(shí)搖動(dòng)，放置1h。取出后加15mL三氯甲烷，置旋渦混合器上振動(dòng)lmin，靜置后吸去上層清液，再加15mL水，振動(dòng)lmin，靜置后吸去上層清液，加l0mLl00g/L尿素溶液、2mLl00g/L鹽酸溶液，再振動(dòng)5min，靜置后吸去上層清液，加15mL水，振動(dòng)lmin.，靜置后吸去上層清液，分別準(zhǔn)確吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加入5mL三氯甲烷作參比管。食品添加劑的測(cè)定

于各管中加入15mL甲醇、lmL10g/L磺胺，置冰水中15min，取出恢復(fù)常溫后加入lmLlg/L鹽酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在15～30℃下放置20～30min，用1cm比色皿于波長(zhǎng)550nm處測(cè)定吸光度，測(cè)得吸光度A及As。②另取2支50mL帶塞比色管，分別加入l0mL水和l0mL透析液，除不加10g/L亞硝酸鈉外，其他按①項(xiàng)進(jìn)行，測(cè)得吸光度及A0。食品添加劑的測(cè)定

6．結(jié)果計(jì)算

式中X——樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量，g/kg；

m——樣品質(zhì)量，g；V——透析液用量，mL；

C——標(biāo)準(zhǔn)管濃度，μg/mL；

As——標(biāo)準(zhǔn)液吸光度；

——水的吸光度；

A——試料透析液吸光度；

A0——不加亞硝酸鈉的試料透析液吸光度。食品添加劑的測(cè)定第三節(jié)防腐劑的測(cè)定

一、苯甲酸的測(cè)定苯甲酸俗稱安息香酸，是最常用的防腐劑之一。因?qū)ζ浒踩陨杏袪?zhēng)議，認(rèn)為它可能有蓄積中毒現(xiàn)象，故有逐步被山梨酸鹽類防腐劑取代的趨勢(shì)。苯甲酸（鈉）的測(cè)定有氣相色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法和滴定法等。

（一）氣相色譜法

1.測(cè)定原理樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸，用附氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。食品添加劑的測(cè)定2．試劑乙醚不含過氧化物。石油醚沸程30～60℃。鹽酸1+l。

無水硫酸鈉。氯化鈉酸性溶液40g/L，于氯化鈉溶液（40g/L）中加少量鹽酸（1+1）酸化。苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取苯甲酸0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶劑溶解并稀釋至刻度（此溶液每毫升相當(dāng)于2.0mg苯甲酸）。苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液吸取適量的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶劑稀釋至每毫升相當(dāng)于50μg、100μg、150μg、200μg、250μg苯甲酸。食品添加劑的測(cè)定3．儀器氣相色譜儀，具有氫火焰離子化檢測(cè)器。

4．操作方法（1）樣品提取稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置于25mL帶塞量筒中，加0.5mL鹽酸（1+1）酸化，用15mL、l0mL乙醚提取兩次，每次振搖lmin，靜置分層后將上層乙醚提取液吸入另一個(gè)25mL帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化鈉酸性溶液（40g/L）洗滌兩次，靜置15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中，用乙醚洗量筒及硫酸鈉層，洗液并入容量瓶。加乙醚至刻度，混勻。準(zhǔn)確吸取5mL乙醚提取液于5mL帶塞刻度試管中，置40℃水浴上揮干，加入2mL石油醚-乙醚（3+1）混合溶劑溶解殘?jiān)?，備用。食品添加劑的測(cè)定

（2）色譜參考條件①色譜柱玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)2m，內(nèi)裝涂以5％DEGS+1％H3PO4固定液的60～80目ChromosorbWAW。②氣流速度載氣為氮?dú)猓?0mL/min（氮?dú)夂涂諝?、氫氣之比按各儀器型號(hào)不同選擇各自的最佳比例條件）。③溫度進(jìn)樣口230℃；檢測(cè)器230℃；柱溫170℃。（3）測(cè)定進(jìn)樣2μL標(biāo)準(zhǔn)系列中各濃度標(biāo)準(zhǔn)使用液于氣相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度苯甲酸的峰高，以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰高值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)進(jìn)樣2μL樣品溶液。測(cè)得峰高與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。食品添加劑的測(cè)定5．結(jié)果計(jì)算

式中X——樣品中苯甲酸的含量，g/kg；

m1——測(cè)定用樣品液中苯甲酸的質(zhì)量，μg；

V1——加入石油醚-乙醚（3+1）混合溶劑的體積，mL；

V2——測(cè)定時(shí)進(jìn)樣的體積，μL；

m2——樣品的質(zhì)量，g；5——測(cè)定時(shí)乙醚提取液的體積，mL；25——樣品乙醚提取液的總體積，mL。

若測(cè)定苯甲酸鈉的含量，可將上述苯甲酸的含量乘以1.18。食品添加劑的測(cè)定（二）高效液相色譜法

1．測(cè)定原理試樣加溫除去二氧化碳和乙醇，調(diào)節(jié)pH至近中性，過濾后進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。

2．試劑甲醇經(jīng)0.5μm濾膜過濾。氨水l+1。

乙酸銨溶液0.02mol/L。稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL溶解，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。食品添加劑的測(cè)定

碳酸氫鈉溶液20g/L。

苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液準(zhǔn)確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液（20g/L）5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，苯甲酸含量為1mg/mL，作為貯備溶液。甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液吸取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，該溶液每毫升相當(dāng)于0.10mg的苯甲酸。

3．儀器高效液相色譜儀（帶紫外檢測(cè)器）。食品添加劑的測(cè)定4．操作方法（1）試樣處理。①汽水稱取5.00～10.0g試樣，放入小燒杯中，微溫?cái)嚢璩ザ趸?，用氨水?+1）調(diào)pH約7。加水定容至10～20mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。②果汁類稱取5.00～10.0g試樣，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)?shù)捏w積，離心沉淀，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾。③配制酒類稱取10.0g試樣，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水（1+1）調(diào)pH約7，加水定容至適當(dāng)體積，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。食品添加劑的測(cè)定

（2）高效液相色譜參考條件。柱YWG-C184.6mm×250mm，10μm不銹鋼柱流動(dòng)相甲醇-乙酸銨溶液（0.02mol/L）（5+95）

流速lmL/min

進(jìn)樣量10μL

檢測(cè)器紫外檢測(cè)器，230nm波長(zhǎng)，0.2AUFS（3）測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。食品添加劑的測(cè)定

5．結(jié)果計(jì)算

式中X——試樣中苯甲酸含量，g/kg；——進(jìn)樣體積中苯甲酸的質(zhì)量，mg；

V2——進(jìn)樣體積，mL；

V1——試樣稀釋液總體積，mL；

m——試樣質(zhì)量，g。食品添加劑的測(cè)定

二、山梨酸（鉀）的測(cè)定山梨酸俗名花楸酸，化學(xué)名稱為2，4-己二烯酸。山梨酸及其鉀鹽作為酸性防腐劑，在酸性介質(zhì)中對(duì)霉菌、酵母菌、好氧性細(xì)菌有良好的抑制作用，可與這些微生物酶系統(tǒng)中的巰基結(jié)合使之失活。但對(duì)厭氧的芽孢桿菌、乳酸菌無效。山梨酸是一種不飽和脂肪酸，在機(jī)體內(nèi)可參與正常的新陳代謝，是目前被認(rèn)為最安全的一類食品防腐劑。山梨酸（鉀）的測(cè)定方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、分光光度法等。其中氣相色譜法、高效液相色譜法測(cè)定山梨酸（鉀），其原理、樣品制備、所用試劑、儀器及操作都與苯甲酸的測(cè)定完全相同，只是將苯甲酸的標(biāo)準(zhǔn)貯備液及標(biāo)準(zhǔn)使用液換為山梨酸（鉀）。具體操作見本節(jié)苯甲酸的測(cè)定。下面介紹分光光度法。食品添加劑的測(cè)定1．測(cè)定原理提取樣品中山梨酸及其鹽類，經(jīng)硫酸-重鉻酸鉀氧化成丙二醛，再與硫代巴比妥酸形成紅色化合物，其顏色深淺與丙二醛含量成正比，可于530nm處比色定量。

2．試劑①重鉻酸鉀-硫酸溶液1/60mol/L重鉻酸鉀與0.15mol/L硫酸以1:1混合備用。②硫代巴比妥酸溶液準(zhǔn)確稱取0.5g硫代巴比妥酸于100mL容量瓶中，加20mL水，加10mLlmol/L氫氧化鈉溶液，搖勻溶解后再加lmol/L鹽酸，以水定容（臨時(shí)用配制，6h內(nèi)使用）。

③山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取250mg山梨酸鉀于250mL容量瓶中，用蒸餾水溶解并定容（本溶液山梨酸含量為lmg/mL，使用時(shí)再稀釋為0.1mg/mL）。食品添加劑的測(cè)定3．儀器分光光度計(jì)；組織搗碎機(jī)；10mL比色管。

4．操作方法（1）樣品處理稱取100g樣品，加200mL水于組織搗碎機(jī)中搗成勻漿。稱取勻漿100g，加水200mL繼續(xù)搗lmin，稱取10g于250mL容量瓶中定容，搖勻，過濾備用。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制吸取0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL山梨酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液于250mL容量瓶中，用水定容。分別吸取2.0mL于相應(yīng)的10mL比色管中，加2mL重鉻酸鉀硫酸溶液，于100℃水浴中加熱7min，立即加入2.0mL硫代巴比妥酸，繼續(xù)加熱10min，立刻用冷水冷卻，于530nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3）試樣測(cè)定吸取式樣處理液2mL于10mL比色管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制操作，于530nm處測(cè)吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。食品添加劑的測(cè)定

5．結(jié)果計(jì)算

式中X1——山梨酸鉀含量，g/kg；

X2——山梨酸含量，g/kg；

c——試液中含山梨酸鉀的濃度，mg/mL；

m——稱取勻漿相當(dāng)于試樣質(zhì)量,g；1.34——山梨酸與山梨酸鉀之間的換算系數(shù)。食品添加劑的測(cè)定第四節(jié)護(hù)色劑的測(cè)定

一、亞硝酸鹽的測(cè)定——鹽酸萘乙二胺法鹽酸萘乙二胺法又稱格里斯試劑比色法，介紹如下。

1．測(cè)定原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化，再與N-1-萘基乙二胺偶合形成紫紅色染料，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。

2．試劑①亞鐵氰化鉀溶液稱取106.0g亞鐵氰化鉀[K4Fe（CN）6·3H2O]，用水溶解，并稀釋至1000mL。②乙酸鋅溶液稱取220.0g乙酸鋅[Zn（CH3COO）2·2H2O]，加30mL冰醋酸溶于水，并稀釋至1000mL。食品添加劑的測(cè)定

③飽和硼砂溶液稱取5.0g硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O），溶于100mL熱水中，冷卻后備用。④對(duì)氨基苯磺酸溶液4g/L。稱取0.4g對(duì)氨基苯磺酸，溶于100mL20％鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。⑤鹽酸萘乙二胺溶液2g/L。稱取0.2g鹽酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混勻后，置棕色瓶中，避光保存。⑥亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取0.1000g于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于200μg的亞硝酸鈉。⑦亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于5.0μg的亞硝酸鈉。食品添加劑的測(cè)定3．儀器小型絞肉機(jī)；分光光度計(jì)。

4．操作方法（1）樣品處理稱取5.0g經(jīng)絞碎混勻的樣品，置于50mL燒杯中，加12.5mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，以70℃左右的水約300mL將試樣洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加熱15min，取出后冷卻至室溫，然后一面轉(zhuǎn)動(dòng)，一面加入5mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5mL乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質(zhì)。加水至刻度，搖勻，放置0.5h，除去上層脂肪，清液用濾紙過濾，棄去初濾液30mL，濾液備用。食品添加劑的測(cè)定

（2）測(cè)定吸取40.0mL上述濾液于50mL帶塞比色管中，另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、7.5μg、10μg、12.5μg亞硝酸鈉），分別置于50mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2mL對(duì)氨基苯磺酸溶液（4g/L），混勻，靜置3～5min后各加入lmL鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L），加水至刻度，混勻，靜置15min。用2cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，同時(shí)做試劑空白。食品添加劑的測(cè)定

5．結(jié)果計(jì)算

式中X——樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg；

m——樣品質(zhì)量，g；

——測(cè)定用樣液中亞硝酸鹽的質(zhì)量，μg；

V1——樣品處理液總體積，mL；

V2——測(cè)定用樣液體積，mL。食品添加劑的測(cè)定

二、硝酸鹽的測(cè)定——鎘柱法

1．測(cè)定原理樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，溶液通過鎘柱，使其中的硝酸根離子還原成亞硝酸根離子，在弱酸性條件下，亞硝酸根與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紅色染料，測(cè)得亞硝酸鹽總量，用總量減去亞硝酸鹽含量即得硝酸鹽含量。

2．試劑氨緩沖溶液（pH＝9.6～9.7）量取20mL鹽酸，加50mL水，混勻后加50mL氨水，再加水稀釋至1000mL，混勻。食品添加劑的測(cè)定稀氨緩沖液

量取50mL氨緩沖溶液，加水稀釋至500mL，混勻。

鹽酸0.1mol/L。

硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取0.1232g于110～120℃干燥恒重的硝酸鈉，加水溶解，移入500mL容量瓶中，并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于200μg亞硝酸鈉。

硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液

臨用時(shí)吸取硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2.50mL，置于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于5μg亞硝酸鈉。

亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液

見亞硝酸鹽測(cè)定（鹽酸萘乙二胺法）。食品添加劑的測(cè)定3．儀器鎘柱。（1）海綿狀鎘的制備投入足夠的鋅皮或鋅棒于500mL硫酸鎘溶液（200g/L）中，經(jīng)3～4h，當(dāng)其中的鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘余鋅棒，使鎘沉底，傾去上層清液，以水用傾瀉法多次洗滌。然后移入組織搗碎機(jī)中，加500mL水，搗碎約2s，用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上，取20～40目之間的部分。（2）鎘柱的裝填如圖6-1所示。用水裝滿鎘柱玻璃管，并裝入2cm高的玻璃棉作墊，將玻璃棉壓向柱底時(shí)，應(yīng)將其中所包含的空氣全部排出，在輕輕敲擊下加入海綿狀鎘至8～10cm高，上面用lcm高的玻璃棉覆蓋，上置一貯液漏斗，末端要穿過橡皮塞與鎘柱玻璃管緊密連接。食品添加劑的測(cè)定

圖6-1鎘柱裝填示意圖1-貯液漏斗，內(nèi)徑35mm，外徑37mm；2-進(jìn)液毛細(xì)管，內(nèi)徑0.4mm，外徑6mm；3-橡皮塞；4-鎘柱玻璃管，內(nèi)徑12mm，外徑16mm；5，7-玻璃棉；6-海綿狀鎘；8-出液毛細(xì)管，內(nèi)徑2mm，外徑8mm食品添加劑的測(cè)定

如無上述鎘柱玻璃管時(shí)，可以25mL酸式滴定管代用。當(dāng)鎘柱填裝好后，先用25mL鹽酸（0.1mol/L）洗滌，再以水洗兩次，每次25mL，鎘柱不用時(shí)用水封蓋，隨時(shí)都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層中夾有氣泡。鎘柱每次使用完畢后，應(yīng)先以25mL鹽酸（0.1mol/L）洗滌，再以水洗兩次，每次25mL，最后用水封蓋鎘柱。（3）鎘柱還原效率的測(cè)定吸取20mL硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，加入5mL稀氨緩沖液，混勻后，吸取20mL于50mL燒杯中，加5mL氨緩沖溶液，混合后注入貯液漏斗中，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液，當(dāng)貯液漏斗中的溶液流完后，再加5mL水置換柱內(nèi)留存的溶液。食品添加劑的測(cè)定將全部收集液如前再經(jīng)鎘柱還原一次，第二次流出液收集于100mL容量瓶中，繼以水流經(jīng)鎘柱洗滌三次，每次20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。取10.0mL還原后的溶液（相當(dāng)10μg亞硝酸鈉）于50mL比色管中，加入2mL對(duì)氨基苯磺酸溶液（4g/L），混勻，靜置3～5min后各加入lmL鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L），加水至刻度，混勻，靜置15min。用2cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，同時(shí)做試劑空白。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測(cè)得結(jié)果，與加入量一致，還原效率應(yīng)大于98％為符合要求。食品添加劑的測(cè)定

（4）計(jì)算式；

式中X——還原效率；

m——測(cè)得亞硝酸鹽的質(zhì)量，μg；10——測(cè)定用溶液相當(dāng)亞硝酸鹽的質(zhì)量，μg。

4．操作方法（1）試樣處理見亞硝酸鹽測(cè)定（鹽酸萘乙二胺法）。（2）測(cè)定先以25mL稀氨緩沖液沖洗鎘柱，流速控制在3～5mL/min（以滴定管代替的可控制在2～3mL/min）。食品添加劑的測(cè)定

吸取20mL處理過的樣液于50mL燒杯中，加5mL氨緩沖溶液，混合后注入貯液漏斗，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液，當(dāng)貯液漏斗中的樣液流完后，再加5mL水置換柱內(nèi)留存的樣液。將全部收集液如前再經(jīng)鎘柱還原一次，第二次流出液收集于100mL容量瓶中，繼以水流經(jīng)鎘柱洗滌三次，每次20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。食品添加劑的測(cè)定

亞硝酸鈉總量的測(cè)定：吸取10~20mL還原后的樣液于50mL比色管中。另吸取0.00mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、7.5μg、10μg、12.5μg亞硝酸鈉），分別置于50mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2mL對(duì)氨基苯磺酸溶液（4g/L），混勻，靜置3~5min后各加入lmL鹽酸萘乙二胺溶液（2g/L），加水至刻度，混勻，靜置15min。用2cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，同時(shí)做試劑空白。食品添加劑的測(cè)定

5．結(jié)果計(jì)算

式中X——試樣中硝酸鹽的含量，mg/kg；

m——試樣的質(zhì)量，g；

m1——經(jīng)鎘粉還原后測(cè)得亞硝酸鈉的質(zhì)量，μg

m2——直接測(cè)得亞硝酸鹽的質(zhì)量，μg；1.232——亞硝酸鈉換算成硝酸鈉的系數(shù)；

V1——測(cè)總亞硝酸鈉的試樣處理液總體積，mL；

V2——測(cè)總亞硝酸鈉的測(cè)定用樣液體積，mL；

V3——經(jīng)鎘柱還原后樣液總體積，mL；

V4——經(jīng)鎘柱還原后樣液的測(cè)定用樣液體積，mL；

V5——直接測(cè)亞硝酸鈉的試樣處理液總體積，mL；

V6——直接測(cè)亞硝酸鈉的試樣處理液的測(cè)定用樣液體積，mL。食品添加劑的測(cè)定

第五節(jié)漂白劑的測(cè)定

一、概述二、亞硫酸鹽和二氧化硫的測(cè)定測(cè)定二氧化硫和亞硫酸鹽的方法有鹽酸副玫瑰苯胺光度法、中和滴定法、蒸餾法、高效液相色譜法和極譜法等。（一）鹽酸副玫瑰苯胺光度法

1．測(cè)定原理亞硫酸鹽與四氯汞鈉反應(yīng)生成穩(wěn)定的配合物，再與甲醛及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成紫紅色配合物，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。食品添加劑的測(cè)定氨基磺酸銨溶液：12g/L。稱取1.2g氨基磺酸銨于50mL燒杯中，用水轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，定容。甲醛溶液：2g/L。吸取0.55mL無聚合沉淀的甲醛（36％），加水定容至100mL，混勻。淀粉指示液：稱取1g可溶性淀粉，用少許水調(diào)成糊狀，緩緩傾入100mL沸水中，隨加隨攪拌，煮沸，放冷備用。該指示液臨時(shí)現(xiàn)配。亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀[K4Fe（CN）6·3H2O]，加水溶解并稀釋至100mL。食品添加劑的測(cè)定乙酸鋅溶液：稱取22g乙酸鋅[Zn（CH3COO）2·2H2O]溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，加水稀釋至100mL。

鹽酸副玫瑰苯胺溶液：稱取0.1g鹽酸副玫瑰苯胺（C19H18N2Cl.4H2O）于研缽中，加少量水研磨使溶解并稀釋至100mL，取出20mL，置于100mL容量瓶中，加鹽酸（1+1），充分搖勻后使溶液由紅變黃，如不變黃再滴加少量鹽酸至出現(xiàn)黃色，再加水稀釋至刻度，混勻備用（如無鹽酸副玫瑰苯胺可用鹽酸品紅代替）。食品添加劑的測(cè)定鹽酸副玫瑰苯胺精制方法：稱取20g鹽酸副玫瑰苯胺于400水中，用50mL鹽酸（1+5）酸化，徐徐攪拌，加4～5g活性炭，加熱煮沸2min。將混合物倒入大漏斗中，過濾（用保溫漏斗趁熱過濾）。濾液放置過夜，出現(xiàn)結(jié)晶，然后再用布氏漏斗抽濾，將結(jié)晶再懸浮于1000mL乙醚-乙醇（10:1）的混合液中，振搖3～5min，以布氏漏斗抽濾，再用乙醚反復(fù)洗滌至醚層不帶色為止，于硫酸干燥器中干燥，研細(xì)后貯于棕色瓶中保存。碘溶液：c（1/2I2）＝0.100mol/L。稱取12.7g碘用水定容至100mL，混勻。硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.1000mol/L。食品添加劑的測(cè)定

二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液。（1）配制稱取0.5g亞硫酸氫鈉，溶于200mL四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。（2）標(biāo)定吸取10.0mL亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液于250mL碘量瓶中，加100mL水，準(zhǔn)確加入20.00mL碘溶液（0.05mol/L）、5mL冰醋酸，搖勻，放置于暗處2min后迅速以0.1000mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色，加0.5mL淀粉指示液，繼續(xù)滴定至無色。另取100mL水，準(zhǔn)確加入0.05mol/L碘溶液20.0mL、5mL冰醋酸，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。食品添加劑的測(cè)定按下式計(jì)算二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：

式中X——二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg/mL；

V1——測(cè)定用亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；

V2——試劑空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；

c——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾濃度，mol/L；32.03——lmL硫代硫酸鈉（0.1000mol/L）標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，mg/mmol。

二氧化硫使用液：臨用前將二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液以四氯汞鈉吸收液稀釋成每毫升當(dāng)于2μg二氧化硫。氫氧化鈉溶液：20g/L。

硫酸：1+71。食品添加劑的測(cè)定3．儀器分光光度計(jì)。

4．操作方法（1）樣品處理。①水溶性固體樣品如白砂糖等，可稱取約10.00g均勻樣品（樣品量可視二氧化硫含量而定），以少量水溶解，置于l00mL容量瓶中，加入4mL氫氧化鈉溶液（20g/L），5min后加入4mL硫酸（1+71），然后加入20mL四氯汞鈉吸收液，以水稀釋至刻度。②其他固體樣品如餅干、粉絲等，可稱取5.0～10.0g研磨均勻的樣品，以少量水濕潤(rùn)并移入l00mL容量瓶中，然后加入20mL四氯汞鈉吸收液浸泡4h以上，若上層溶液不澄清可加入亞鐵氰化鉀溶液及乙酸鋅溶液各2.5mL，最后用水稀釋至l00mL刻度，過濾后備用。食品添加劑的測(cè)定

③液體樣品如葡萄酒等，可直接吸取5.0～10.0mL樣品，置于100mL容量瓶中，以少量水稀釋，加20mL四氯汞鈉吸收液搖勻，最后加水至刻度混勻，必要時(shí)過濾備用。（2）測(cè)定吸取0.5～5.0mL上述樣品處理液于25mL帶塞比色管中。另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0.0μg、0.4μg、0.8μg、1.2μg、1.6μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg二氧化硫）分別置于25mL帶塞比色管中。于樣品及標(biāo)準(zhǔn)管中各加入四氯汞鈉吸收液至10mL，然后再加入lmL氨基磺酸銨溶液（12g/L）、1mL甲醛溶液（2g/L）及l(fā)mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液搖勻，放置20min。用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)550nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。食品添加劑的測(cè)定5．結(jié)果計(jì)算

式中X——樣品中二氧化硫的含量，g/kg；

Al——測(cè)定用樣液中二氧化硫的含量，μg；

m1——樣品質(zhì)量，g；

V——測(cè)定用樣液的體積，mL。

（二）蒸餾法1．測(cè)定原理在密閉容器中對(duì)樣品進(jìn)行酸化并加熱蒸餾，釋放出其中的二氧化硫，釋放物用乙酸鉛溶液吸收。吸收后用濃鹽酸酸化，再以碘標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，由消耗的碘標(biāo)準(zhǔn)溶液的量計(jì)算樣品中二氧化硫含量。食品添加劑的測(cè)定2．試劑鹽酸：1+1。濃鹽酸用水稀釋1倍。乙酸鉛溶液：20g/L。稱取2g乙酸鉛，溶于少量水中并稀釋至100mL。

碘標(biāo)準(zhǔn)溶液。淀粉指示液：10g/L。稱取1g可溶性淀粉，用少許水調(diào)成糊狀，緩緩傾入100mL沸水中，隨加隨攪拌，煮沸2min，放冷，備用。此溶液應(yīng)臨用時(shí)配制。

3．儀器全玻璃蒸餾器；碘量瓶；酸式滴定管。食品添加劑的測(cè)定4．操作方法（1）樣品處理固體樣品用刀切或剪刀剪成碎末后混勻，稱取約5.00g均勻樣品（樣品量可視含量高低而定）。液體樣品可直接吸取5.0～10.0mL樣品，置于500mL圓底蒸餾燒瓶中。（2）測(cè)定①蒸餾將稱好的樣品置入圓底燒瓶中，加入250mL水，裝入冷凝裝置，冷凝管下端應(yīng)插入碘量瓶中的25mL乙酸鉛（20g/L）吸收液中，然后，在蒸餾瓶中加入10mL鹽酸（1+1），立即蓋塞加熱蒸餾。當(dāng)蒸餾液約200mL時(shí)，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾1min。用少量蒸餾水沖洗插入乙酸鉛溶液中的裝置部分。在檢測(cè)樣品的同時(shí)要做空白試驗(yàn)。食品添加劑的測(cè)定

②滴定在取下的碘量瓶中依次加入10mL濃鹽酸、lmL淀粉指示液（10g/L）。搖勻之后用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.005mol/L）滴定至變藍(lán)且在30s內(nèi)不退色為止。5．結(jié)果計(jì)算

式中X——樣品中二氧化硫總含量，g/kg；

V1——滴定樣品所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.01mol/L）的體積，mL；

V2——滴定試劑空白所用碘標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.01mol/L）的體積，mL；

m——樣品質(zhì)量，g；0.032——lmL碘標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（1/2I2）＝1.0mol/L]相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量，g/mmol；0.01——碘標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L。食品添加劑的測(cè)定第六節(jié)著色劑的測(cè)定

一、概述二、食用合成著色劑的測(cè)定（一）高效液相色譜法1、原理食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時(shí)間定性，與峰面積比較進(jìn)行定量。

2．試劑正己烷鹽酸乙酸甲醇：經(jīng)濾膜（0.5μm）過濾。聚酰胺粉（尼龍6）：過200目篩。乙酸銨溶液：0.02mol/L。稱取1.54g乙酸銨，加水至1000mL溶解，經(jīng)濾膜（0.45μm）過濾。食品添加劑的測(cè)定

氨水：取2mL氨水，加水至100mL混勻。氨水-乙酸銨溶液：0.02mol/L。取氨水0.5mL加乙酸銨溶液（0.02mol/L）至1000mL混勻。甲醇-甲酸溶液：6+4。取甲醇60mL，甲酸40mL混勻。檸檬酸溶液：取20g檸檬酸（C6H8O7·H2O）加水至100mL，溶解混勻。無水乙醇-氨水-水溶液：7+2+1。取無水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL混勻。三正辛胺正丁醇溶液：5％。取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL混勻。飽和硫酸鈉溶液。硫酸鈉溶液：2g/L。pH＝6的水：水加檸檬酸溶液調(diào)pH＝6。食品添加劑的測(cè)定合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100％質(zhì)量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、赤蘚紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)各0.100g，置于100mL容量瓶中，加pH＝6的水到刻度，配成水溶液（1.00mg/mL）。

合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)上述溶液加水稀釋20倍，經(jīng)0.45μm濾膜過濾。配成每毫升相當(dāng)50.0μg的合成著色劑。

3．儀器高效液相色譜儀，帶紫外檢測(cè)器，254nm波長(zhǎng)。食品添加劑的測(cè)定4．操作方法（1）樣品處理。①橘子汁、果味水、果子露汽水等稱取20.0～40.0g放入100mL燒杯中。含二氧化碳樣品加熱驅(qū)除二氧化碳。②配制酒類稱取20.0～40.0g放入100mL燒杯中，加入小碎瓷片數(shù)片，加熱驅(qū)除乙醇。③硬糖、蜜餞類、淀粉軟糖等稱取5.00～10.00g，粉碎樣品，放入100mL小燒杯中，加水30mL，溫?zé)崛芙猓魳悠啡芤簆H較高，用檸檬酸溶液調(diào)pH至6左右。④巧克力豆及著色糖衣制品稱取5.00～10.00g，放入100mL小燒杯中，用水反復(fù)洗滌色素，至巧克力豆無色素為止，合并色素漂洗液為樣品溶液。食品添加劑的測(cè)定

（2）色素提取。①聚酰胺吸附法樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH＝6，加熱至60℃，將1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用60℃pH＝4的水洗滌3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3～5次（含赤蘚紅的樣品用b.法處理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL。經(jīng)膜（0.45μm）過濾，取10μL進(jìn)高效液相色譜儀。食品添加劑的測(cè)定

②液-液分配法（適用于含赤蘚紅的樣品）將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中，加2mL鹽酸、三正辛胺正丁醇溶液（5%）10～20mL。振搖提取，分取有機(jī)相，重復(fù)提取，直到有機(jī)相無色，合并有機(jī)相，用飽和硫酸鈉溶液洗兩次，每次10mL，分取有機(jī)相，放蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至10mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混勻，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液層（含水溶性酸性色素），用正己烷洗兩次，氨水層加乙酸調(diào)成中性，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水定容至5mL。經(jīng)濾膜（0.45μm）過濾，取10mL進(jìn)高效液相色譜儀。食品添加劑的測(cè)定

（3）高效液相色譜參考條件。柱：YWG-C1810μm不銹鋼柱4.6mm（內(nèi)徑）×250mm。

流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液（pH＝4）。

梯度洗脫：甲醇20%～35