XG核酸檢測(cè)過程中無內(nèi)參的原因分析

2022XG核酸檢測(cè)過程中無內(nèi)參的原因分析（全文）核酸檢測(cè)是新型冠狀病毒確診和篩查的重要手段，也是常見的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法之一，并且它是目前能較早確定是否感染病毒以及早發(fā)現(xiàn)和早治療最有效的檢測(cè)方法。核酸檢測(cè)陽性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于新型冠狀病毒的核酸檢測(cè)過程中樣本的采集、保存、轉(zhuǎn)運(yùn)，樣本核酸的提取和擴(kuò)增檢測(cè)、結(jié)果的判讀均須嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。通過一段時(shí)間的核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室工作的經(jīng)歷，逐漸的發(fā)現(xiàn)了一些影響檢測(cè)結(jié)果的細(xì)節(jié)問題。其中最令人頭痛的是基因檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)束以后，在結(jié)果判讀的時(shí)候發(fā)現(xiàn)檢測(cè)樣本沒有內(nèi)參。通?？梢园l(fā)生個(gè)別孔沒有內(nèi)參，也有整板都沒有內(nèi)參的情況。內(nèi)參，其實(shí)就是內(nèi)參基因，它是實(shí)時(shí)熒光定量PCR[1]中的內(nèi)參基因，通常是一段與靶序列共同擴(kuò)增的非靶序列分子，因此能夠?qū)颖镜臋z測(cè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，是核酸檢測(cè)質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。內(nèi)參主要分為內(nèi)源性內(nèi)參和外源性內(nèi)參。目前應(yīng)用較多的核酸檢測(cè)試劑盒主要為內(nèi)源性內(nèi)參。內(nèi)源性內(nèi)參是人體的管家基因，在人的各組織和細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定，因此也可以通過采集的鼻咽拭子等標(biāo)本獲取。由于與樣本中的靶基因經(jīng)歷完全相同的處理程序，因此可以監(jiān)控新冠核酸檢測(cè)的全流程，包括采樣、保存運(yùn)輸、樣本提取、擴(kuò)增等過程。在進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)，如果內(nèi)參有曲線，絕大多數(shù)情況下說明，采樣運(yùn)輸、提取及擴(kuò)增沒有問題。反之，如果內(nèi)參沒有曲線，無論目的基因是否有曲線，說明核酸檢測(cè)的整個(gè)過程中某個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)了問題，核酸檢測(cè)結(jié)果是不可信的，容易造成假陰性［2］。即進(jìn)行核酸檢測(cè)的時(shí)候“有內(nèi)參不一定行，但無內(nèi)參一定不行”。需要查找到原因后重新進(jìn)行檢測(cè)。內(nèi)源性內(nèi)參無曲線為實(shí)驗(yàn)中常見的異常結(jié)果之一，通過查閱資料和實(shí)踐經(jīng)歷，對(duì)沒有內(nèi)源性內(nèi)參的原因總結(jié)有以下幾個(gè)方面：一、采樣環(huán)節(jié)新冠病毒感染人體之后，首先會(huì)在呼吸道系統(tǒng)中進(jìn)行繁殖，因此醫(yī)護(hù)人員可以通過使用拭子刮取受檢者鼻咽部的組織和分泌物，然后將拭子頭部折斷，放進(jìn)合格的病毒保存液［3］中保存、運(yùn)輸，最后送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸檢測(cè)。如果采樣部位和方法不達(dá)標(biāo)，可能采集不到或者采集到不足量的人體組織和細(xì)胞，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果沒有內(nèi)參。同時(shí)，如果進(jìn)行環(huán)境和物體表面的核酸檢測(cè)的時(shí)候，因?yàn)榄h(huán)境中和物體表面通常不會(huì)有大量的人體組織和細(xì)胞，達(dá)不到核酸檢測(cè)的拷貝數(shù)，可能檢測(cè)結(jié)果也不會(huì)有內(nèi)參，這種情況是正常的。二、保存運(yùn)輸環(huán)節(jié)獲得患者樣本后，需盡快進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)本采集后室溫放置不超過4小時(shí)，應(yīng)在2-4h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。如無法立即檢測(cè)需要轉(zhuǎn)運(yùn)的樣本，應(yīng)按照說明書的要求，采用干冰等制冷方式進(jìn)行保存，嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定包裝運(yùn)輸，并送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。如果標(biāo)本保存不當(dāng)，造成核酸降解，也會(huì)造成無內(nèi)參的情況。三、核酸提取環(huán)節(jié)1、加樣前樣本沒有充分震蕩混勻，病毒保存液中的基因濃度不均一，可能造成加樣時(shí)核酸濃度不足。2、向裂解板中加樣本時(shí)漏加或者加串孔。3、提取儀上的各個(gè)試劑板的順序或者方向擺放錯(cuò)誤，也包括不同提取儀之間的試劑板用串。4、提取前磁珠未充分混勻以及未安裝使用磁棒套。5、各提取試劑在儀器上準(zhǔn)備好以后沒有運(yùn)行，一段時(shí)間后直接將洗脫板卸下，送到擴(kuò)增環(huán)節(jié)。6、提取儀發(fā)生故障等。四、基因擴(kuò)增環(huán)節(jié)1、反應(yīng)液配置不合格或者試劑反復(fù)凍融，造成反應(yīng)液失效。2、反應(yīng)孔中漏加反應(yīng)液。3、反應(yīng)孔中漏加提取液。4、反應(yīng)孔中混入酒精、核酸清除劑等。5、程序操作的時(shí)候點(diǎn)錯(cuò)核酸列或者選錯(cuò)擴(kuò)增程序等等。6、實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀發(fā)生故障?！究偨Y(jié)】幾個(gè)小時(shí)的核酸檢測(cè)是一個(gè)非常漫長(zhǎng)的過程，整個(gè)過程中的每一個(gè)操作環(huán)節(jié)都有可能影響檢測(cè)結(jié)果，所以每個(gè)環(huán)節(jié)都應(yīng)該規(guī)范化管理，嚴(yán)格按照操作規(guī)程來進(jìn)行。出現(xiàn)樣本內(nèi)參異常結(jié)果時(shí)也應(yīng)細(xì)心觀察、耐心分析，查找原因，最終保證核酸檢測(cè)的質(zhì)量?！緦＜尹c(diǎn)評(píng)】醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)是一種光榮而神圣的職業(yè)，扎實(shí)的專業(yè)理論基礎(chǔ)、嫻熟的實(shí)踐操作技術(shù)和認(rèn)真負(fù)責(zé)的工作態(tài)度還是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。在工作中，還會(huì)遇到很多的麻煩、困難、特殊情況，需要具備靈活清醒的頭腦，沉著穩(wěn)重、臨危不亂的心態(tài)，始終有一顆愛心，多一份細(xì)心。新冠疫情對(duì)我們檢驗(yàn)人員來說，無論是心理上還是身體上都是一次大考。面對(duì)疫情我們每一位檢驗(yàn)人都在默默付出，沒有退縮，迎難而上。當(dāng)疫情來臨，他們24小時(shí)工作不停，用快速準(zhǔn)確的結(jié)果為疫情防控提供可靠依據(jù)；他們就是檢驗(yàn)科醫(yī)生，離病毒最近的無名英雄。摘掉罩面屏后的檢驗(yàn)科醫(yī)生們只有一個(gè)樸素的心愿，那就是且盼疫情消弭、春暖花開，你我恢復(fù)日常，神州繁華與共?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】［1］郭曉波，藺京，來春艷，等.新型冠狀病毒與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR核酸檢測(cè)［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2020(3):3.⑵張瑞，李金明.如何減少新型冠狀病毒