POCT檢測(cè)技術(shù)與相關(guān)儀器樣本

4.1POCT概述

4.1.1POCT概念、基本原理及重要技術(shù)

POCT是指在病人旁邊分析病人標(biāo)本分析技術(shù)，或者說只要測(cè)試不在主實(shí)驗(yàn)室做，并且它是一種可移動(dòng)系統(tǒng)，就可以稱為POCT?！癙OCT”構(gòu)成涉及：地點(diǎn)、時(shí)間（point)、保健、照顧（care）、檢查、實(shí)驗(yàn)（testing），point-of-caretesting英文字面意思是在受治療者現(xiàn)場(chǎng)保健檢查。

POCT基本原理是：把老式辦法中有關(guān)液體試劑浸潤(rùn)于濾紙和各種微孔膜吸水材料中，成為整合干燥試劑塊，然后將其固定于硬質(zhì)型基質(zhì)上，成為各種形式診斷試劑條；或把老式分析儀器微型化，操作辦法簡(jiǎn)樸化，使之成為便攜式和手掌式設(shè)備；或?qū)⑸鲜鰞烧哒蠟榻y(tǒng)一系統(tǒng)。

POCT重要技術(shù)涉及：

（1）簡(jiǎn)樸顯色（干化學(xué)法測(cè)定）技術(shù)將各種反映試劑干燥、固定在紙片上，加上檢查標(biāo)本（全血、血清、血漿、尿液等）后產(chǎn)生顏色反映，用肉眼觀測(cè)定性或儀器檢測(cè)(半定量)。

（2）多層涂膜（干化學(xué)法測(cè)定）技術(shù)多層涂膜技術(shù)是從感光膠片制作技術(shù)移植而來。將各種反映試劑依次涂布在片基上，制成干片，用儀器檢測(cè)，可以準(zhǔn)擬定量。

（3）免疫金標(biāo)記技術(shù)膠體金顆粒具備高電子密度特性，金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)標(biāo)記處大量匯集時(shí)，肉眼可見紅色或粉紅色斑點(diǎn)，這一反映可以通過銀顆粒沉積被放大。該類技術(shù)重要有斑點(diǎn)免疫滲濾法（DIGFA）和免疫層析法（ICA）。

（4）免疫熒光技術(shù)通過檢測(cè)板條上激光激發(fā)熒光，定量檢測(cè)以pg/ml為單位檢測(cè)板條上單個(gè)或各種標(biāo)志物。檢測(cè)系統(tǒng)普通由熒光讀數(shù)儀和檢測(cè)板構(gòu)成。檢測(cè)板多用層析法，分析物在移動(dòng)過程中形成免疫復(fù)合物，通過檢測(cè)區(qū)域、質(zhì)控區(qū)域熒光信號(hào)值不同與分析物不同濃度成一定比例，獲得定標(biāo)曲線，可檢測(cè)未知樣本中分析物濃度。

（5）生物傳感器技術(shù)運(yùn)用離子選取電極，底物特異性電極，電導(dǎo)傳感器等特定生物檢測(cè)器進(jìn)行分析檢測(cè)。該類技術(shù)是酶化學(xué)、免疫化學(xué)、電化學(xué)與計(jì)算機(jī)技術(shù)結(jié)合產(chǎn)物。

（6）生物芯片技術(shù)生物芯片是最新發(fā)展起來新技術(shù)。其特點(diǎn)是在小面積芯片上同步測(cè)定各種項(xiàng)目。生物芯片可分基因芯片、蛋白質(zhì)芯片和細(xì)胞芯片。它們具備高敏捷度、分析時(shí)間短、能同步檢測(cè)項(xiàng)目多等特點(diǎn)。

（7）紅外和遠(yuǎn)紅外分光光度技術(shù)此類技術(shù)慣用于經(jīng)皮檢測(cè)儀器，用于檢測(cè)血液中血紅蛋白、膽紅素、葡萄糖等成分。此類床邊檢查儀器可持續(xù)監(jiān)測(cè)病人血液中目成分，無需抽血，可避免抽血也許引起交叉感染和血液標(biāo)本污染，減少每次檢查成本和縮短報(bào)告時(shí)間。

（8）其她技術(shù)

4.1.2POCT特點(diǎn)及與老式實(shí)驗(yàn)室檢查不同

POCT重要特點(diǎn)就是，可以迅速地獲得可靠檢查成果，從而提高病人臨床醫(yī)療效果。簡(jiǎn)樸說，實(shí)驗(yàn)儀器小型化，操作辦法簡(jiǎn)樸化，成果報(bào)告即時(shí)化。

表19-1臨床實(shí)驗(yàn)室與POCT重要不同點(diǎn)

比較項(xiàng)目臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)試POCT周轉(zhuǎn)時(shí)間慢快標(biāo)本鑒定復(fù)雜簡(jiǎn)樸標(biāo)本解決普通需要不需要血標(biāo)本血清、血漿多為全血校正頻繁不頻繁試劑需要配制隨時(shí)可用消耗品相對(duì)少相對(duì)多檢測(cè)儀復(fù)雜簡(jiǎn)樸對(duì)操作者規(guī)定專業(yè)人員普通人亦可以敏捷度相對(duì)高相對(duì)低每個(gè)實(shí)驗(yàn)耗費(fèi)低高實(shí)驗(yàn)成果質(zhì)量高普通

4.1.3POCT儀分類

按照用途來分，可以分為血液分析儀、迅速血糖檢測(cè)儀、電解質(zhì)分析儀、血?dú)夥治鰞x、藥物應(yīng)用監(jiān)測(cè)儀、抗凝測(cè)定儀、心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)儀、甲狀腺激素檢測(cè)儀、酶聯(lián)免疫檢查儀、放射免疫分析儀等種類繁多儀器。

依照其大小和重量，可以將監(jiān)測(cè)離體血液標(biāo)本分析儀，分為桌面（benchtop）型、便攜型、手提式及手提式一次性使用型。近來，一種被稱為CDPOCT已經(jīng)問世，其在類似CD圓盤中具有各種生物傳感器，具備診斷檢查功能，通過原則或定制閱讀器獲取監(jiān)測(cè)成果，有人又稱之為CD實(shí)驗(yàn)室。

依照所用一次性裝置來分，可有單一或多墊試劑條、卡片式裝置、生物傳感器裝置、微制造裝置以及其她多孔材料等各種裝置。

4.1.4POCT臨床應(yīng)用

隨著各種POCT技術(shù)及檢測(cè)儀器使用，使得POCT既可在醫(yī)院內(nèi)，也可在醫(yī)院外進(jìn)行。某些特殊項(xiàng)目甚至在家里或在某些特殊場(chǎng)合（如室外、現(xiàn)場(chǎng)）均可檢測(cè)，極大地以便了病人和某些特殊人群需要。

(1)糖尿病診治方面應(yīng)用

各種迅速血糖儀、各種無創(chuàng)傷性血糖檢測(cè)儀使用使報(bào)告時(shí)間(TAT)大大縮短，是臨床、患者家庭最慣用檢測(cè)儀器；全定量免疫熒光檢測(cè)儀檢測(cè)糖尿病患者糖化血紅蛋白與尿微量白蛋白等指標(biāo)，有助于初期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病，有助于患者病情預(yù)計(jì)與長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)；傳感器有關(guān)檢測(cè)儀可檢測(cè)患者血?dú)饧半娊赓|(zhì)等指標(biāo)；干化學(xué)分析儀可檢測(cè)患者血液中各種生化指標(biāo)。

(2)心血管疾病方面應(yīng)用

急性心肌梗死（AcuteMyocardialInfarction，AMI）發(fā)病急，嚴(yán)重影響到患者生命安全。POCT運(yùn)用可使AMI患者得到及時(shí)診斷和治療。金標(biāo)定量檢測(cè)儀、全定量免疫熒光檢測(cè)儀、迅速CRP檢測(cè)儀等可檢測(cè)特異性血清初期標(biāo)志物如肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白（Mb）、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、D-二聚體、腦鈉肽(BNP)、CRP；運(yùn)用干片式血凝分析儀進(jìn)行凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定、活化某些凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)定；干化學(xué)分析儀可檢測(cè)血液中門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）等生化指標(biāo)檢測(cè)；傳感器有關(guān)分析儀可檢測(cè)患者血?dú)饧半娊赓|(zhì)等指標(biāo)。

(3)感染性疾病中應(yīng)用

診斷用蛋白芯片技術(shù)、免疫金標(biāo)記技術(shù)有關(guān)POCT使用，可使不具備細(xì)菌培養(yǎng)條件基層醫(yī)院、民營(yíng)診所、社區(qū)保健所進(jìn)行微生物迅速檢測(cè)，也可用于醫(yī)院中手術(shù)前傳染病四項(xiàng)檢測(cè)（HBsAg、HCV、HIV、TP）、內(nèi)鏡檢查前病毒性肝炎篩選等。

(4)發(fā)熱性疾病方面應(yīng)用

迅速CRP檢測(cè)儀使用，將CRP與血常規(guī)成果聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)鑒別發(fā)熱患者感染病原體性質(zhì)（細(xì)菌或病毒）比單一檢測(cè)更具特異性。

(5)ICU病房?jī)?nèi)應(yīng)用

在ICU病房，當(dāng)前臨床上已使用有：用于體外監(jiān)測(cè)電化學(xué)感應(yīng)器，可周期性地控制患者血?dú)?、電解質(zhì)、紅細(xì)胞壓積和血糖等；用于體內(nèi)監(jiān)測(cè)生物傳感器，將其安裝在探針或?qū)Ч鼙谏?，置于?dòng)脈或靜脈管腔內(nèi)，通過監(jiān)視器可定期獲取待測(cè)指標(biāo)數(shù)據(jù)。

(6)兒科診斷中應(yīng)用

適合小朋友診斷行為需要輕便、易用、無創(chuàng)傷或創(chuàng)傷性小、樣品需求量少、無需預(yù)解決、迅速得出結(jié)論等要素，以縮短就診周期，還需要關(guān)注父母滿意度。POCT能較好地達(dá)到上述規(guī)定。POCT另一特點(diǎn)是診斷病情時(shí)父母可始終陪伴在孩子身邊，隨時(shí)理解檢查數(shù)據(jù)含義，更好地與醫(yī)護(hù)人員交流，有助于患兒疾病診治。

(7)循證醫(yī)學(xué)中應(yīng)用

從循證醫(yī)學(xué)角度來評(píng)價(jià)，POCT彌補(bǔ)了老式臨床實(shí)驗(yàn)室流程啰嗦局限性。循證醫(yī)學(xué)（Evidencebasedmedicine，EBM）是遵循當(dāng)代最佳醫(yī)學(xué)研究證據(jù)，并將證據(jù)應(yīng)用于臨床對(duì)患者進(jìn)行科學(xué)診治決策一門學(xué)問。POCT所用實(shí)驗(yàn)儀器體積小、攜帶以便、容易使用，操作人員可以在實(shí)驗(yàn)室外任何場(chǎng)合進(jìn)行，迅速、以便地獲取患者某些與疾病有關(guān)數(shù)據(jù)，這正是循證醫(yī)學(xué)所要達(dá)到重要目——有據(jù)可循。

(8)醫(yī)院外應(yīng)用

各種免疫金標(biāo)技術(shù)有關(guān)POCT儀、傳感器技術(shù)有關(guān)POCT儀、干化學(xué)技術(shù)有關(guān)POCT儀，由于以便、迅速等特點(diǎn)，可在家庭自我保健、社區(qū)醫(yī)療、醫(yī)師診所、醫(yī)務(wù)室、體檢中心、救護(hù)車上、事故現(xiàn)場(chǎng)(甚至戰(zhàn)場(chǎng)）、出入境檢疫、禁毒、戒毒中心、公安部門和運(yùn)動(dòng)員尿液檢測(cè)等醫(yī)院外許多部門和場(chǎng)合廣泛應(yīng)用。

4.1.5POCT存在問題與發(fā)展前景

1.POCT存在問題

（1）質(zhì)量保證問題。各種POCT分析儀精確度和精密度各不相似，并且沒有統(tǒng)一室內(nèi)和室間嚴(yán)格質(zhì)量控制，無法保證分析系統(tǒng)質(zhì)量。當(dāng)前尚未有嚴(yán)格質(zhì)量保證體系和管理規(guī)范，導(dǎo)致浮現(xiàn)實(shí)驗(yàn)成果質(zhì)量不易保證現(xiàn)象。非檢查操作人員如醫(yī)師和護(hù)士等工作人員沒有通過恰當(dāng)培訓(xùn)，不熟悉設(shè)備性能和局限性，都是導(dǎo)致POCT產(chǎn)生質(zhì)量不穩(wěn)定重要因素。

由于POCT在使用和管理中不規(guī)范導(dǎo)致對(duì)病人依然存在潛在危險(xiǎn)，因而許多國(guó)家和地區(qū)均頒布了權(quán)威POCT使用原則。

在英國(guó)，發(fā)布了諾丁漢女王醫(yī)學(xué)中心修訂后POCT使用原則。在美國(guó)，NCCLS于1995年刊登了AST2-P文獻(xiàn)，簡(jiǎn)介關(guān)于評(píng)價(jià)和實(shí)行床邊體外診斷檢查信息。隨后，美國(guó)POCT部門又忙于修訂符合臨床實(shí)驗(yàn)室管理法規(guī)，特別是1月頒布新“質(zhì)量體系”規(guī)定。結(jié)合美國(guó)NCCLS近幾年刊登其她多篇與POCT質(zhì)量管理關(guān)于文獻(xiàn)，可以發(fā)現(xiàn)，POCT質(zhì)量在美國(guó)正日趨得到保障。文獻(xiàn)對(duì)關(guān)于實(shí)驗(yàn)室承認(rèn)、POCT儀使用、操作人員培訓(xùn)、質(zhì)量評(píng)估、辦法學(xué)評(píng)價(jià)、成果記錄及報(bào)告等均有明確規(guī)定。在國(guó)內(nèi)，POCT使用發(fā)展較快，但管理相對(duì)滯后。但是，近來國(guó)內(nèi)也已經(jīng)出臺(tái)了《關(guān)于POCT管理辦法（試行草案）》。其中對(duì)POCT組織管理、POCT人員培訓(xùn)、對(duì)POCT專用儀器承認(rèn)、POCT質(zhì)量保證籌劃、POCT操作規(guī)范方面、人員安全性及廢物解決、床邊檢查操作程序、成果報(bào)告、以及費(fèi)用方面問題等均有詳細(xì)規(guī)定與闡明。

（2）循證醫(yī)學(xué)評(píng)估問題。POCT儀器及檢查成果自身來說，尚缺少循證醫(yī)學(xué)評(píng)估．

（3）費(fèi)用問題。POCT單個(gè)檢查費(fèi)用，高于常規(guī)性檢查。

（4）報(bào)告書寫不規(guī)范，也是當(dāng)前POCT存在一種問題。

2.POCT發(fā)展前景

為了適應(yīng)實(shí)際需要，抱負(fù)POCT儀器應(yīng)當(dāng)是構(gòu)造機(jī)靈、體積小、容易使用、不需要額外人工解決標(biāo)本、不需要非常精準(zhǔn)加樣，成果精確、并能自動(dòng)保存所有記錄微型移動(dòng)系統(tǒng)。

應(yīng)用無創(chuàng)性/少創(chuàng)性技術(shù)POCT儀器將是POCT另一種發(fā)展方向。

生物芯片技術(shù)有關(guān)POCT因其具備高敏捷度、分析時(shí)間短、同步能檢測(cè)項(xiàng)目多等特點(diǎn)，也是POCT發(fā)展一種重要趨勢(shì)。

4.2POCT慣用技術(shù)及有關(guān)儀器

4.2.1POCT儀基本構(gòu)造與功能

POCT儀器，普通外形小巧，構(gòu)造不像中心實(shí)驗(yàn)室大型儀器那么復(fù)雜（最重要是沒有復(fù)雜液路系統(tǒng)），儀器基本構(gòu)造涉及：

（1）電源開關(guān)。

（2）狀態(tài)燈。

（3）電池。由于POCT儀器使用地點(diǎn)非常廣泛，因此都自帶電源——配備電池。

（4）(熱敏)打印機(jī)、顯示屏。顯示屏和打印機(jī)用于輸出成果。

（5）鍵盤。鍵盤屬于輸入設(shè)備。

（6）樣本測(cè)量室（閱讀儀及光源等）。樣本測(cè)量室光源，可以是普通檢測(cè)光源，也也許是激發(fā)光光源。閱讀儀可以協(xié)助控制、簡(jiǎn)化某些分析反映，還可以整合數(shù)據(jù)解決、存儲(chǔ)功能。例如，校正曲線計(jì)算法所使用校正曲線，質(zhì)量控制限度和成果數(shù)據(jù)存儲(chǔ)等。帶有微解決器閱讀儀甚至可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行校正，然后解釋成果。

（7）條形碼/密碼牌閱讀器。由于一次性分析裝置普通是獨(dú)立包裝，每個(gè)外包裝上都帶有獨(dú)特條碼，其中包具有試劑各種信息；有儀器還帶有密碼牌，用于校準(zhǔn)及質(zhì)量控制。因此，POCT儀普通都配備條形碼/密碼牌閱讀器。

（8）內(nèi)置數(shù)據(jù)解決及儲(chǔ)存中心。作為閱讀器補(bǔ)充而浮現(xiàn)內(nèi)置數(shù)據(jù)解決及儲(chǔ)存中心，增長(zhǎng)了儲(chǔ)存質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)或患者數(shù)據(jù)及其她數(shù)據(jù)解決功能。

（9）一次性分析裝置（帶有樣本感應(yīng)器或限流閥以及樣本注入口等）。一次性裝置又可以提成單一或多墊試劑條（涉及單層、多層試紙墊）、酶層析裝置、免疫橫流（層析）分析裝置、卡片式裝置、微制造裝置、生物傳感器裝置等。

4.2.2多層涂膜技術(shù)有關(guān)POCT分析系統(tǒng)基本構(gòu)造與功能

(1)多層涂膜技術(shù)制成干片構(gòu)造，如圖19-1

干片中涂層按其功能分4層：分布層（有時(shí)又提成擴(kuò)散層和遮蔽或凈化劑層）、試劑層、批示劑層、支持層。

分布層是一層高密度孔聚合物。分布層作用不但可以阻留細(xì)胞、結(jié)晶和其她小顆粒，還可以讓大分子（如蛋白質(zhì)）滯留。分布層中朝下一面加入反光物質(zhì)如Ti02和BaS04來掩蓋病人標(biāo)本中有色物質(zhì)，使反射光度計(jì)不受其影響。同步這些反光化合物也給干片底層批示劑層提供反射背景。

試劑層試劑層重要功能是提供能實(shí)現(xiàn)化學(xué)反映所需環(huán)境，提供化學(xué)反映所需干試劑，把標(biāo)本中待測(cè)成分轉(zhuǎn)變成可定量物質(zhì)，同步去除干擾。

批示劑層其目是生成一種可以定量且與待測(cè)物含量直接成比例產(chǎn)物。批示劑層中色原含量用反射光度計(jì)讀取。

支持層起物理固定作用，同步容許測(cè)量光通過，并對(duì)通過光不產(chǎn)生任何干擾作用。

(3)影響因素及質(zhì)量控制

干片及配套試劑解決過程和儲(chǔ)存、儀器光路變化等均會(huì)引起成果偏差。

儀器普通規(guī)定6個(gè)月一次定標(biāo)，每日一次質(zhì)控。儀器使用質(zhì)控品為VITROS原裝配套質(zhì)控品及專用稀釋液。為保證成果精確性，還應(yīng)注意儀器維護(hù)，重要是光路清潔和校正以及干片儲(chǔ)藏盒內(nèi)干燥劑和保濕劑及時(shí)更換等。

4.2.3免疫金標(biāo)記技術(shù)有關(guān)POCT儀基本構(gòu)造與功能

斑點(diǎn)金免疫滲濾法已被廣泛應(yīng)用于臨床各種定性指標(biāo)測(cè)定，此類辦法所測(cè)項(xiàng)目大多為定性或半定量成果，不需要特殊儀器。

金標(biāo)定量檢測(cè)儀器，屬于復(fù)合型免疫層析技術(shù)，以金膠?；蛑槟z粒等有色粒子作標(biāo)記物，層析條通過各種材料復(fù)合而成。金標(biāo)定量檢測(cè)儀器硬件某些普通由電腦、輸入輸出接口、模數(shù)轉(zhuǎn)換器、掃描控制電路、光電轉(zhuǎn)換電路、背景補(bǔ)償電路、顯示屏等構(gòu)成。為了保存測(cè)試成果，配有微型打印機(jī)。由于抗原抗體結(jié)合及膠體金材料都很貴，不也許象化學(xué)試劑那樣，做成大面積顯色，同步背景有水、血、膠體金等，且在滲入過程中不均勻等因素，因而必要設(shè)計(jì)特殊光學(xué)系統(tǒng)（如反射型光纖傳感器），才干解決金標(biāo)定量測(cè)試問題。反射型光纖傳感器由入射光纖和接受光纖構(gòu)成。測(cè)試時(shí)，檢測(cè)卡固定，電腦控制機(jī)械掃描系統(tǒng)，使光纖傳感器從背景(硝酸纖維素膜區(qū))向測(cè)試線掃描。免疫層析法檢測(cè)試劑條構(gòu)造見圖19-4.1，免疫層析實(shí)驗(yàn)原理見圖19-4.2。光源發(fā)出光經(jīng)發(fā)送光纖射向被測(cè)體表面，反射光由接受光纖收集，并傳送到光探測(cè)器轉(zhuǎn)換成電信號(hào)輸出。此外該儀器還設(shè)計(jì)了一系列軟件，以提高檢測(cè)成果可靠性和精準(zhǔn)性。如依照水滲入規(guī)律，編制特殊軟件，補(bǔ)償滲入不均勻引起干擾信號(hào)；依照不同測(cè)試條、不同批號(hào)，編制軟件嚴(yán)格控制測(cè)試時(shí)間；依照朗伯-比爾定律及有關(guān)數(shù)學(xué)知識(shí)，將光密度值與濃度關(guān)系用數(shù)學(xué)模型來表達(dá)，并輸入電腦，每次測(cè)定期，電腦即可自動(dòng)將光密度值轉(zhuǎn)換成濃度值并顯示。

圖19-4.1免疫層析法檢測(cè)試劑條構(gòu)造

對(duì)檢測(cè)成果質(zhì)量保證,還涉及某些尋常工作。由于該儀器應(yīng)用是光學(xué)原理，測(cè)量環(huán)境光照變化、測(cè)量筆尖密封性變化及其她物理?xiàng)l件（溫度、水等液體）變化均會(huì)對(duì)成果產(chǎn)生干擾。正擬定標(biāo)是保證儀器重復(fù)精準(zhǔn)讀數(shù)必要環(huán)節(jié)。對(duì)不同測(cè)量條件和筆尖各種變化也許引起各種誤差調(diào)節(jié)，可以通過定標(biāo)（散射光調(diào)節(jié)和空白調(diào)零程序）來完畢。試劑盒內(nèi)含陽性定值范疇質(zhì)控物，用于試劑穩(wěn)定性及實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制。

4.2.4免疫熒光測(cè)定技術(shù)有關(guān)POCT儀器檢測(cè)原理和構(gòu)造

檢測(cè)系統(tǒng)由一種熒光讀數(shù)儀和檢測(cè)板構(gòu)成。檢測(cè)板采用層析技術(shù)，分析物在移動(dòng)過程中形成免疫復(fù)合物。通過檢測(cè)區(qū)域、質(zhì)控區(qū)域熒光信號(hào)值不同與分析物不同濃度成一定比例，獲得定標(biāo)曲線，從曲線上可計(jì)算出未知樣本中分析物濃度。如檢測(cè)HbA1c使用是免疫競(jìng)爭(zhēng)法。當(dāng)檢測(cè)緩沖液與加入了溶血緩沖液后全血混勻時(shí)，熒光標(biāo)記抗HbA1c抗體與血樣中HbA1c結(jié)合，然后當(dāng)該樣本混合液加入到檢測(cè)板加樣孔后，樣本中HbA1c和固定在檢測(cè)板上糖化血紅蛋白則會(huì)與檢測(cè)抗體（熒光標(biāo)記抗體）競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合，反映平衡后，樣本中HbA1c越多，固定在檢測(cè)板上糖化血紅蛋白與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合機(jī)會(huì)就越少，最后讀出檢測(cè)板所示熒光強(qiáng)度。熒光信號(hào)強(qiáng)弱與HbA1c量成反比。儀器內(nèi)部有兩個(gè)光學(xué)系統(tǒng)。熒光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)HbA1c濃度；另一種光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)總血紅蛋白濃度。儀器將這兩個(gè)參數(shù)轉(zhuǎn)換為比值（％）顯示在屏幕上，就是HbA1c相對(duì)濃度（占總Hb比率）。測(cè)定HbA1c檢測(cè)板具有一種固化了HbA1c檢測(cè)線和一種固化了抗生物素蛋白質(zhì)控線(見圖19-5)。

時(shí)間辨別熒光免疫測(cè)定基本原理是以鑭系元素銪（Eu）獒合物作熒光標(biāo)記物，運(yùn)用此類熒光物質(zhì)有長(zhǎng)熒光壽命特點(diǎn)，延長(zhǎng)熒光測(cè)量時(shí)間，待短壽明自然本底熒光完全衰退后再進(jìn)行測(cè)定，所得信號(hào)完全為長(zhǎng)壽命鑭系獒合物熒光，從而有效地消除了非特異性本底熒光干擾。此外在反映體系中加入增強(qiáng)液，使熒光信號(hào)增強(qiáng)，有助于熒光測(cè)量。

4.2.5葡萄糖酶電極傳感器有關(guān)POCT儀器檢測(cè)原理及注意事項(xiàng)

電化學(xué)酶?jìng)鞲衅鞣ㄎ⒘垦杆傺菧y(cè)試儀，采用生物傳感器原理將生物敏感元件酶同物理或化學(xué)換能器相結(jié)合，對(duì)所測(cè)定對(duì)象作出精準(zhǔn)定量反映，并借助當(dāng)代電子技術(shù)將所測(cè)得信號(hào)以直觀數(shù)字形式輸出一類新型分析裝置，即采用酶法葡萄糖分析技術(shù)、并結(jié)合絲網(wǎng)印刷和微電子技術(shù)制作電極，以及智能化儀器讀出裝置，組合成微型化血糖分析儀。依照所用酶不同，此類儀器可以分為采用葡萄糖脫氫酶和采用葡萄糖氧化酶技術(shù)兩大類。酶電極構(gòu)成（葡萄糖氧化酶電極為例）涉及印刷電極、電極底片、葡萄糖氧化酶及固定保護(hù)層。電極測(cè)試原理為：在印刷電極兩端施加一定恒定電壓，當(dāng)被測(cè)血樣滴在電極測(cè)試區(qū)后，電極上固定葡萄糖氧化酶與血中葡萄糖發(fā)生酶反映，通過一定滯后期（約20秒后），酶電極響應(yīng)電流與被測(cè)血樣中葡萄糖濃度呈線性關(guān)系。血糖儀就是依照這一關(guān)系來計(jì)算并顯示血標(biāo)本中葡萄糖濃度值。

羅氏優(yōu)越血糖儀所用ADVANTAGEⅡ可吸血試紙條運(yùn)用了葡萄糖脫氫酶法原理和鈀電極技術(shù)，并設(shè)立了密碼牌，自動(dòng)校準(zhǔn)血糖儀和試紙。試紙條構(gòu)造涉及聚酯薄膜頂膜、底膜，標(biāo)本采集區(qū)，試劑區(qū)、鈀電極等。測(cè)試時(shí)，先插入試紙，滴血在血糖儀以外試紙端上，滴血后自動(dòng)起反映計(jì)時(shí)，不必抹去血滴，再次插入試紙，反映產(chǎn)生電流轉(zhuǎn)換為血糖濃度數(shù)字而顯示在屏幕上。由于采用葡萄糖脫氫酶法，反映過程中不需氧直接參加反映，消除了血氧分壓產(chǎn)生偏差。

采用采用葡萄氧化酶生物傳感器技術(shù)也有不少，ONETOUCH強(qiáng)生穩(wěn)豪血糖儀是比較具備代表性一種。其試紙工作原理為：使用一種被稱為計(jì)時(shí)安培電流法電化學(xué)技術(shù)來測(cè)定病人血樣中葡萄糖濃度。當(dāng)血樣到達(dá)試紙頂端時(shí)，毛細(xì)管作用把血樣吸入到試紙反映區(qū)。在反映區(qū)內(nèi)，酶(葡萄糖氧化酶)和血液中葡萄糖進(jìn)行反映，從而使電子從葡萄糖流向化學(xué)中間體。施加在試紙上電壓促使電子從化學(xué)中間體流向電極。血糖儀通過電極來測(cè)量電子流量(電流)，并將其轉(zhuǎn)換成一種電信號(hào)，最后將該電信號(hào)換算成相應(yīng)血糖濃度。

注意事項(xiàng)：血糖儀使用不當(dāng)是最常用問題。血糖儀使用是樣品是末梢全血，中心實(shí)驗(yàn)室使用是血漿或血清，故應(yīng)注意成果換算及調(diào)節(jié)。干擾物質(zhì)存在也會(huì)對(duì)成果導(dǎo)致影響。為保證成果精確，應(yīng)進(jìn)行及時(shí)校準(zhǔn)和常規(guī)質(zhì)控。由于受到各種因素影響，到當(dāng)前為止，迅速血糖儀測(cè)量血糖只適合尋常監(jiān)測(cè)，而不能作為精確診斷糖尿病工具。

4.2.6熒光傳感器有關(guān)POCT儀器工作原理和基本構(gòu)造

儀器基本構(gòu)造涉及電源開關(guān)、電池、顯示屏、內(nèi)置打印機(jī)、鍵盤、測(cè)量室（室內(nèi)多為某些LEDs和光源等）、條形碼閱讀器、數(shù)據(jù)傳播系統(tǒng)、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)系統(tǒng)、一次性測(cè)試片（測(cè)試片上多帶有樣本感應(yīng)器或限流閥以及樣本注入口等），為保證成果精確，儀器還配備定標(biāo)氣體及大氣壓測(cè)量裝置等。OPTICCA血?dú)夥治鰞x檢測(cè)技術(shù)涉及光學(xué)熒光法和光學(xué)吸取反射法，運(yùn)用了固態(tài)一次性熒光傳感器測(cè)試卡。

熒光傳感器測(cè)試卡構(gòu)造示意圖pO2傳感器電極工作原理示意圖

以pO2檢測(cè)為例。OPTICCA測(cè)試片里面pO2傳感器電極具備兩個(gè)功能。第一，測(cè)量氧氣壓力，第二，可用來對(duì)總血紅蛋白（tHb）和氧飽和度（SO2）進(jìn)行分析。因而一種樣品可在同一種傳感器上測(cè)量三個(gè)參數(shù)。pO2光極測(cè)量原理是基于熒光突衰，熒光與pO2量化關(guān)系可以用Stern-Volmer方程來表達(dá)為：I0/I=1+kP，其中I0為激發(fā)光強(qiáng)度，I為熒光散發(fā)