221動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)新-1

2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)1那么動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段呢？植物組織培養(yǎng),

植物體細(xì)胞雜交

回憶：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)那么動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段呢？植物組織培養(yǎng),植物2

從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。原理：細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)目的：獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物

原理：細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)目的：獲得細(xì)胞或細(xì)胞3動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（無(wú)菌處理、添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH溫度為36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)作用作用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏4

注意關(guān)鍵詞:

細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)閱讀課本44—46頁(yè)內(nèi)容注意關(guān)鍵詞:閱讀課本44—46頁(yè)內(nèi)容51、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？如何分散？2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面為何要光滑、無(wú)毒？3、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？4、如果此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？5、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？6、歸納動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程？討論1、為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞討論6動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋（分解彈性纖維）原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過(guò)程：細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳72、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？主要成分：糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、促生長(zhǎng)因子和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等因?yàn)檫@些組織或器官上的細(xì)胞分化程度低，分裂能力強(qiáng)成塊組織中的細(xì)胞，彼此接觸抑制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖；使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體練一練2、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材8（1）生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品：如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）動(dòng)物細(xì)胞是基因工程技術(shù)中常用的受體細(xì)胞。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：（1）生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品：如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗9細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目試一試細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞10動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用？動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？11

動(dòng)物細(xì)胞特點(diǎn)分化潛能變窄：隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性：細(xì)胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒有因細(xì)胞分化而丟失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性看一看

動(dòng)物細(xì)胞特點(diǎn)看一看12

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)13卵細(xì)胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細(xì)胞細(xì)胞拆合技術(shù)妊娠多莉羊的培育過(guò)程無(wú)性生殖卵細(xì)胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核141.名詞解釋：細(xì)胞貼壁、接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)2.動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？其中哪項(xiàng)是其它技術(shù)手段的基礎(chǔ)？3.簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的取材部位是什么？理由是什么？所需的酶是什么？

4.目前使用或冷凍的細(xì)胞通常為幾代以內(nèi)的細(xì)胞？原因是？5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中如何創(chuàng)造無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中應(yīng)加入的天然成分是？其作用是什么？氣體環(huán)境是？作用分別是什么？1.名詞解釋：細(xì)胞貼壁、接觸抑制、156.為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？如何分散？7.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)表面為何要光滑、無(wú)毒？8.培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？9.如果此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？10.人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？11.歸納動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程？6.為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞16

例題：上海某醫(yī)院病理室為確診一患者的腫瘤是良性還是惡性，切取了一小塊腫瘤組織進(jìn)行培養(yǎng)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）培養(yǎng)之前，腫瘤組織必須先用

等處理成單個(gè)細(xì)胞。

（2）若開始培養(yǎng)時(shí)取一滴培養(yǎng)液觀察有100個(gè)腫瘤細(xì)胞，經(jīng)24h培養(yǎng)后，取一滴稀釋50倍后再取一滴(設(shè)三次的“一滴”等量)觀察，發(fā)現(xiàn)有32個(gè)腫瘤細(xì)胞，此腫瘤的細(xì)胞周期約為

h。

（3）與正常細(xì)胞相比，在光學(xué)顯微鏡下可見明顯增多的

細(xì)胞器是

。

（4）如果通過(guò)電子設(shè)備和其他生化手段已經(jīng)初步判斷是惡性的可能性很小，在腫瘤組織進(jìn)行培養(yǎng)了60代后，發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤細(xì)胞存在，那么你能否判斷該腫瘤組織是惡性腫瘤嗎？。

說(shuō)明理由：

。

（5）某科研單位研制出一種新型藥物X，據(jù)說(shuō)對(duì)此類腫瘤有較好的療效，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)方案加以驗(yàn)證。寫出你所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)步驟：

a．

；

b．

；

c．

。

胰蛋白酶

6

線粒體不能

因?yàn)榧?xì)胞傳代培養(yǎng)超過(guò)10－50代后，部分細(xì)胞會(huì)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中獲得不死性而發(fā)生癌變。將相同的培養(yǎng)液分為相等的兩份，一份加入藥物X，另一份不加將等數(shù)量的腫瘤細(xì)胞置于兩份培養(yǎng)基中放在相同且適宜條件下培養(yǎng)，定期取樣觀察腫瘤細(xì)胞數(shù)目變化情況

例題：上海某醫(yī)院病理室為確診一患者的腫瘤是良性還是惡性，切17將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(易恢復(fù)其全能性)(難恢復(fù)其全能性)記一記

動(dòng)物體細(xì)胞核移植：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵18供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞顯微操作注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛核移植過(guò)程（顯微操作法）（電刺激）物理或化學(xué)方法供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞去核無(wú)核卵19供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:細(xì)胞大,易操作,含有促使細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)3.嚴(yán)格來(lái)說(shuō)新個(gè)體有卵巢母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀核移植過(guò)程供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）20思考題１、在進(jìn)行體細(xì)胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)幾乎全部來(lái)自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未突變3、細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞思考題１、在進(jìn)行體細(xì)胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核21分子水平：PCR技術(shù)進(jìn)行DNA擴(kuò)增細(xì)胞水平：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)個(gè)體水平：營(yíng)養(yǎng)生殖（扦插、嫁接）植物組織培養(yǎng)動(dòng)物個(gè)體的克?。w細(xì)胞核移植和胚胎移植）哪些生物技術(shù)屬于“克隆”？克隆概念：是指從一個(gè)共同的祖先，通過(guò)無(wú)性繁殖的方法產(chǎn)生出來(lái)的一