元素周期表-新高中化學(xué)必修下載

02四月2024高效液相色譜法01四月2024高效液相色譜法12一、

概述

高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法經(jīng)典液相柱色譜裝置高效液相色譜儀經(jīng)典液相色譜HPLC固定相粒徑流動相驅(qū)動方式流動相流速150-200μm重力或低壓泵很慢3-10μm高壓泵快(1-10mL/min)例：分離20種氨基酸柱長：170cm柱徑：0.9cmF：30mL/ht分離:>20h經(jīng)典柱色譜HPLCt分離：1h2一、概述高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法經(jīng)典液相柱色譜裝23二、基本理論1、色譜柱柱效的基本關(guān)系式2、分離度3二、基本理論1、色譜柱柱效的基本關(guān)系式2、分離度343、速率方程溶質(zhì)在液相流動相中的擴散系數(shù)，約為氣相中擴散系數(shù)的萬分之一43、速率方程溶質(zhì)在液相流動相中的擴散系數(shù)，約為氣相中擴散45流動相流速對板高的影響小顆粒填料，填充均勻；選擇較低的流動相流速；選擇粘度小的溶劑作流動相，改善傳質(zhì)。修正的速率方程：提高柱效途徑5流動相流速對板高的影響小顆粒填料，填充均勻；修正的速率方程56三、高效液相色譜分離方法1、吸附色譜法分離原理Kad值越大，保留時間越長。6三、高效液相色譜分離方法1、吸附色譜法分離原理Kad值67固定相硅膠－強極性氧化鋁－弱極性活性炭－非極性分子篩－強極性高分子多孔微球(GDX)固體吸附劑7固定相硅膠－強極性固體吸附劑782、離子交換色譜法陽離子交換樹脂陽離子交換陰離子交換分離原理82、離子交換色譜法陽離子交換樹脂陽離子交換陰離子交換分離89固定相陽離子：－SO3H(強)－CO2H(弱)陰離子：－N+R3(強)－NH2(弱)基質(zhì)合成樹脂纖維素硅膠離子交換劑9固定相陽離子：基質(zhì)合成樹脂離子交換劑910流動相水相緩沖液+有機改性劑調(diào)節(jié)選擇性的主要參數(shù)鹽種類及濃度pH值各種陰離子的在陰離子交換劑上的滯留次序：用檸檬酸離子洗脫比用氟離子洗脫快10流動相水相緩沖液+有機改性劑調(diào)節(jié)選擇性的主要參數(shù)鹽種類1011應(yīng)用：離子及可離解的化合物如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等11應(yīng)用：離子及可離解的化合物11123、化學(xué)鍵合相色譜采用化學(xué)鍵合相的液相色譜固定相非常穩(wěn)定，在使用中不易流失。由于可將各種極性的官能團鍵合到載體表面，因此它適用于種類繁多樣品的分離。特點123、化學(xué)鍵合相色譜采用化學(xué)鍵合相的液相色譜固定相非常穩(wěn)1213鍵合固定相制備ODS(C18)鍵合相硅膠十八烷基氯硅烷非極性硅烷化反應(yīng)使用pH范圍：2-813鍵合固定相制備ODS(C18)鍵合相硅膠十八烷基氯硅烷非1314鍵合固定相類型疏水基團烷烴（C8和C18）、苯基等極性基團丙氨基氰乙基醚和醇等離子交換基團胺基、季銨鹽磺酸、羧酸14鍵合固定相類型疏水基團極性基團離子交換基團1415鍵合相色譜法分類

反相鍵合相色譜:常用固定相：C18分離對象:非極性中等極性化合物常用流動相甲醇-水乙睛-水反相鍵合相色譜疏溶劑分離機制固定相極性<流動相極性15鍵合相色譜法分類反相鍵合相色譜:常用固定相：C18分離1516

正相鍵合相色譜

固定相極性>流動相極性

離子性鍵合相色譜將各種離子交換基團化學(xué)鍵合到硅膠基質(zhì)表面上，就形成了離子性鍵合相色譜的固定相。其分離原理與離子交換色譜類同。16正相鍵合相色譜離子性鍵合相色譜1617例：甲苯和苯酚的分離。流動相：甲醇-水出峰順序：苯酚，甲苯出峰順序：甲苯，苯酚十八烷基鍵合相二醇基鍵合相17例：甲苯和苯酚的分離。流動相：甲醇-水出峰順序：苯酚，甲1718保留時間：<例：以O(shè)DS鍵合色譜柱、甲醇-水為流動相分離以下兩種苯甲酸，試判斷出峰次序。沒食子酸3,4-二羥基苯甲酸固定相:非極性;流動相:極性組分極性:3,4-二羥基苯甲酸<沒食子酸18保留時間：<例：以O(shè)DS鍵合色譜柱、甲醇-水為流動相分離18194、尺寸排阻(凝膠)色譜法排阻色譜分離示意圖相對分子質(zhì)量差別大于10％的化合物才可以分離分離原理194、尺寸排阻(凝膠)色譜法排阻色譜分離示意圖相對分子質(zhì)1920四、高效液相色譜儀20四、高效液相色譜儀2021高壓泵流動相溶劑廢液色譜柱進樣口檢測器21高壓泵流動相溶劑廢液色譜柱進樣口檢測器21221、高壓輸液系統(tǒng)高壓泵要求輸出壓力高平穩(wěn)、脈沖小流量穩(wěn)定可調(diào)耐腐蝕221、高壓輸液系統(tǒng)高壓泵要求2223梯度洗脫裝置低壓梯度高壓梯度通過改變流動相的組成來調(diào)整組分的k值，改變分離因子α值，以達到最短時間內(nèi)得到最佳分離的目的。梯度洗脫23梯度洗脫裝置低壓梯度高壓梯度2324等度洗脫與梯度洗脫24等度洗脫與梯度洗脫2425貯液瓶及流動相1)對樣品有一定的溶解度，以防在柱頭產(chǎn)生沉淀。2)適用于所選擇的檢測器。3)化學(xué)惰性好，以免破壞固定相。4)低粘度，增加樣品的擴散系數(shù)，提高柱效。5)純度高。溶劑不純會增加檢測器噪聲，產(chǎn)生偽峰。對流動相溶劑的一般要求25貯液瓶及流動相1)對樣品有一定的溶解度，以防在柱頭產(chǎn)生25262、進樣系統(tǒng)

準(zhǔn)備狀態(tài)進樣狀態(tài)

六通閥進樣裝置

自動進樣器

262、進樣系統(tǒng)準(zhǔn)備狀態(tài)26273、色譜柱內(nèi)徑：1～6mm，柱長：5～30cm；柱填料粒徑：1~5μm

分離柱273、色譜柱內(nèi)徑：1～6mm，柱長：5～30cm；分27284、檢測系統(tǒng)紫外吸收檢測器(a)可變波長紫外檢測器(b)二極管陣列檢測器氘燈光柵流通池測量光電二極管參比光電二極管二極管陣列檢測器284、檢測系統(tǒng)紫外吸收檢測器(a)可變波長紫外檢測器(2829兩種檢測器的色譜圖(a)：可變波長紫外檢測器；(b)：二極管陣列檢測器(b)(a)29兩種檢測器的色譜圖(b)(a)2930紫外檢測器靈敏度高，精密度及線性范圍較好，可用于梯度洗脫。流動相選擇有限制。一些常用溶劑的紫外截止波長溶劑CS2氯仿四氫呋喃苯乙睛甲醇水紫外截止波長（nm）38024521221019020518730紫外檢測器靈敏度高，精密度及線性范圍較好，可用于梯度洗