中藥成分青藤堿抗腫瘤作用機制初步研究

緒論青藤堿研究現(xiàn)狀青風(fēng)藤（學(xué)名：CaulisSinomenii）又稱尋風(fēng)藤、大青木香、大青藤等，屬于藤黃目防己科防己屬的植物，它生長在中國廣東、浙江、福建、四川等多個省份，是一種非常特別的植物。青風(fēng)藤為多年生木質(zhì)藤本，根塊狀，呈灰色，有細小的溝槽；葉互生，厚實，革質(zhì)，橢圓，頂端尖銳或銳利；底部略有心臟狀或接近截尖，上部為綠色，下部為灰色，幾乎沒有毛發(fā)；單性異株，多傘花，圓形，核果扁平，成熟時呈深紅色；半月形的果實，六七月開花，八九月份結(jié)果。青風(fēng)藤長在山坡林緣、溝邊和灌木中，常在樹木或石頭上生長[1]。青風(fēng)藤，李時珍在明朝《本草綱目》中已有有關(guān)論述，是一種用于治療各種腫瘤的中草藥，在臨床上有著重要的地位[2]。近年來，許多專業(yè)人士對青風(fēng)藤內(nèi)部的化學(xué)成分做了大量的研究，發(fā)現(xiàn)了其中最為關(guān)鍵的化學(xué)成分是青藤堿（sinomenine，SN），此外，研究還表明，SN是一種生物活性的堿類物質(zhì)，其化學(xué)成分與嗎啡相似，對人體產(chǎn)生強烈的組織胺的釋放。具有止痛，消炎，降低血壓等功效[3,4,5,6]?？捎糜谥委燁愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、甲狀腺、腎病、高血壓等疾病。近年來，隨著對SN的研究逐漸深入，該物質(zhì)的機理和藥理學(xué)方面也得到了新的突破，并且越來越多的學(xué)者開始關(guān)注它在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)。1.2青藤堿的藥理作用現(xiàn)代藥理學(xué)的結(jié)果顯示，青風(fēng)藤是一種重要的生物活性物質(zhì)，它的藥理作用和功效十分豐富。臨床多用其鹽酸鹽。具有祛風(fēng)鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳、抗炎、抗免疫、抗心律失常等作用。目前關(guān)于青藤堿藥理作用的研究報道大部分集中在抗炎鎮(zhèn)痛與免疫抑制方面，并且有動物實驗顯示，在休克狀態(tài)和受損器官中青藤堿能夠起到一定的保護作用，同時在抗腫瘤方面的研究也有了許多突破。1.2.1抗炎通過SN腹腔注射由角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹，得出大鼠足跖炎性滲出液中PGE含量明顯下降，角叉菜膠對小鼠模型足的影響較小，其抗炎機理是通過對PG分泌和分泌的抑制來實現(xiàn)。從細胞因素的基因調(diào)節(jié)角度，探討了SN抗炎和抗風(fēng)濕的機理，提示其可降低人的外周血單核細胞IL-1β和IL-8mRNA的表達，從而達到防治RA的效果[7]。應(yīng)用體外酶反應(yīng)實驗體系進行觀察，結(jié)果表明：在一定的劑量下，SN對COX-2誘導(dǎo)的PGE2的生成具有很好的劑量-效應(yīng)關(guān)系，表明其抗炎癥機理是通過選擇性地阻斷COX-2的活性而達到抑制PGE2的合成[8]。另外，SN對帕金森病大鼠具有一定的抗炎癥和神經(jīng)保護的效果，其作用機理在于，SN可以通過對TNF-α、PGE2等細胞的活素釋放進行抑制，而對小膠細胞內(nèi)的還原型輔酶II氧化酶的活力進行調(diào)控。此研究結(jié)果為SN可能成為治療炎癥介導(dǎo)的神經(jīng)退行性病變的新療法提供了參考依據(jù)[9]。此外，還有一些實驗證明，SN可以通過對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)遞質(zhì)（TNF-α）、IL-β（IL-6）的分泌，從而降低其對糖尿病視網(wǎng)膜損傷的影響[10]。1.2.2抗心律失常SN對離體大鼠工作心臟心功能有抑制作用，給予82mol/L的青風(fēng)藤注射60分鐘，使MAP、LVSP、+dp/dtmax明顯的降低了，LVEDP和T值均明顯增高。SN可縮短因防己毒素引起的兔子心律不齊，并能抑制BaCl2和CaCl2-ACh引起的心律不齊，能抑制因防己毒素、BaCl2、CaCl2-ACh引起的心律不齊，并能抑制心肌梗死引起的心肌梗死[11]。1.2.3鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)咳作用經(jīng)小鼠鐵板熱實驗證明，SN可顯著減少小鼠自主行為，并增強環(huán)己巴比妥鈉對小鼠的睡眠效應(yīng)，同時還能導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)“激怒”反應(yīng)；此外，該物質(zhì)能夠使士的寧致大鼠驚厥閾值下降，但不能抑制戊四唑引起的驚厥；在5mg/kg的劑量下，SN可以明顯延長小鼠防御條件反應(yīng)的潛伏期，且縮短條件反射的潛伏期；在95mg/kg的劑量下，獼猴展示了中心性抑制表現(xiàn)，如活動減少、被馴化等，但仍然受外界影響[12]。SN對豚鼠、小鼠喉上神經(jīng)引起的咳嗽有顯著的止咳效果，而對小鼠和貓的鎮(zhèn)咳強度則接近于可待因的1/4[13]。1.2.4鎮(zhèn)痛作用SN小鼠腹腔注射冰醋酸的扭體反應(yīng)，結(jié)果表明，SN對大鼠的扭轉(zhuǎn)體化效應(yīng)有顯著的影響，ED50為36.4mg/kg，其止痛效果比杜冷丁差，但比布洛芬更好。西安醫(yī)藥學(xué)院化學(xué)實驗室采用SN鎮(zhèn)痛、消炎的方法，以SN為母本，制備了一種新的衍生物——“青洛酮”，其抗炎性優(yōu)于“青洛酮”；同劑量組的止痛作用相似，而青洛酮的作用則更緩慢[14]。羅烈等[15]研究發(fā)現(xiàn)，SN衍生物苯甲酰青藤堿具有顯著抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且呈量效關(guān)系，其作用強于等劑量的阿斯匹林。王文君等[16]和陳煒等[17]通過體外試驗驗證，其作用機理為對環(huán)氧化酶-2有選擇性抑制。在家兔腦室內(nèi)注入SN，其止痛效果分別為1/12000和1/13000，顯示該藥的止痛點在神經(jīng)組織。其化學(xué)成分與嗎啡相似，但其作用途徑與嗎啡不同，對嗎啡類藥物沒有產(chǎn)生交叉抗性，而且其持續(xù)時間也比較短暫。1.2.5免疫抑制作用SN腹腔注射與肌肉注射25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg對大鼠肝組織的組織形態(tài)、脾、胸腺組均有一定程度的影響，且對大鼠腸內(nèi)巨噬細胞的吞噬作用、使cGMP/cAMP比率的降低均有較大的作用。SN能顯著地降低羊紅細胞引起的遲發(fā)型過敏反應(yīng)[18]，對以溶血激素為標(biāo)志的體液和以心臟移植和與之伴隨的腫瘤免疫為標(biāo)志的細胞免疫均有顯著的影響。50mg/kg的SN能顯著提高大鼠心臟的生存期，并能有效地阻止T細胞和B細胞的DNA代謝，并隨著劑量的增加而增加[19,20]。結(jié)果表明，SN對大鼠及RA大鼠脾臟的免疫系統(tǒng)均有一定的影響，其誘導(dǎo)的細胞凋亡是其免疫抑制效應(yīng)的重要原因。此外，已有文獻表明，SN能通過對NF-kB激活的抑制，進而促進樹突細胞的增殖[22]。1.2.6抗腫瘤作用近年來，SN抗腫瘤作用被廣泛研究，大量的試驗結(jié)果顯示，SN不僅單獨使用能顯著抑制腫瘤細胞的生長，還能與化療藥物協(xié)同作用,更有效地控制腫瘤細胞的增殖，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，延緩腫瘤的生長速度。SN單用時能夠明顯減慢腫瘤細胞的生長速度。它能夠通過多種機制干擾腫瘤細胞的增殖和代謝。SN能抑制DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成，影響細胞周期，誘導(dǎo)細胞分裂終止和細胞凋亡。同時，SN還能抑制血管新生，減少腫瘤細胞獲得氧份和營養(yǎng)的能力。這些作用綜合在一起，使SN單獨使用即可達到控制腫瘤細胞生長的目的。而當(dāng)SN與化療藥物聯(lián)合使用時，兩者之間存在協(xié)同作用，能夠產(chǎn)生更加顯著的腫瘤細胞生長抑制效果。SN能增強化療藥物的凋亡誘導(dǎo)作用，減輕其毒副作用?；熕幬镆材芴岣逽N在腫瘤細胞內(nèi)的蓄積量，增強其生物學(xué)活性，產(chǎn)生更強的并對腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移起到了一定的抑制作用，還能誘導(dǎo)腫瘤自體吞咽、抑制腫瘤多藥物耐藥性的發(fā)生。劉等[23]實驗結(jié)果顯示，SN通過抑制NF-κB通路，可以顯著下調(diào)MDR-1和COX-2基因的表達，減少其相應(yīng)的mRNA和蛋白質(zhì)合成。P-糖蛋白作為MDR-1的產(chǎn)物，其表達水平也隨之降低。這使得P-糖蛋白對化療藥物的外排功能減弱,更多藥物可以進入癌細胞培養(yǎng)的Caco-2細胞，發(fā)揮藥效。因此，在青藤堿的作用下，Caco-2細胞對化療藥物的敏感性得以增加。陳等[24]研究結(jié)果表明，SN可以抑制因P-糖蛋白過量的表現(xiàn)而產(chǎn)生的多種抗性，并能誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡。進一步的實驗表明，SN可以降低P-糖蛋白的水平，降低抗腫瘤藥物的外排。它還能促進凋亡基因Bax的表達，從而誘發(fā)細胞凋亡。SN對腫瘤細胞的化學(xué)敏感性及細胞凋亡有潛在的應(yīng)用價值。當(dāng)作用于腎細胞癌時[25]，SN能降低細胞球狀形成能力并促進細胞凋亡，研究發(fā)現(xiàn)SN經(jīng)PI3K/AKT/mTOR信號通路增強自噬促進腎細胞癌的凋亡。LV[26]等通過以SN作為實驗組，用塞來昔步作為實驗的陽性對照，將青藤堿按照一定的濃度梯度作用于胃腺癌SGC-7901細胞。結(jié)果表明，青藤堿能明顯地抑制胃腺癌SGC-7901的生長，并能有效地阻斷COX-2的基因的表達，且具有時間和濃度依賴性；在塞來昔布和青藤素的影響下，這些細胞呈圓形狀，顯示了細胞的凋亡。Liao[27]等將5-氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶聯(lián)合治療的小鼠進行比較，并且記錄了腫瘤的生長情況；5-FFP所誘導(dǎo)的抗腫瘤細胞增殖明顯增強，加速誘導(dǎo)了胃癌細胞的凋亡，因為青藤堿的這種藥理特性，使之有機會成為5-氟尿嘧啶用藥醫(yī)治胃癌時的化療的敏化劑。1.3腫瘤的概述1.3.1腫瘤的研究現(xiàn)狀腫瘤的形態(tài)多種多樣，可以分為良性腫瘤和惡性腫瘤。惡性腫瘤已經(jīng)成為威脅社會發(fā)展和人類健康的全球性重大公共衛(wèi)生問題之一，其發(fā)病率和病死率整體呈上升趨勢。臨床數(shù)據(jù)研究顯示,在惡性腫瘤的治療中，中醫(yī)藥治療具有明顯的優(yōu)勢和特色，能顯著提高患者的治療有效率和生活質(zhì)量,甚至能達到完全治愈的效果。目前，惡性腫瘤已經(jīng)有較為成熟的治療方案，例如負離子空氣治療法。相關(guān)研究表明，除放射治療、化療和外科手術(shù)之外，負離子空氣物理治療對腫瘤也具有顯著的治療效果。負離子空氣治療利用空氣中的負離子產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)來抑制腫瘤細胞的生長與轉(zhuǎn)移。負離子能夠提高機體的免疫功能，促進淋巴因子和干擾素的釋放，激活自然殺傷細胞并增強其殺傷活性，從而產(chǎn)生抗腫瘤作用。同時，負離子還能夠直接誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制血管新生，減緩腫瘤生長速度。因此，負離子空氣治療作為一種綜合利用生理和物理作用的新興治療手段，在抗腫瘤治療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。綜上，中醫(yī)藥治療和新興的負離子空氣物理治療手段為惡性腫瘤的治療提供了新思路和新方法。結(jié)合傳統(tǒng)治療手段，有望取得更好的治療效果，提高患者的生存質(zhì)量和生存期，為惡性腫瘤治療帶來新的曙光。1.3.2肝癌現(xiàn)狀肝癌是一種常見的肝細胞腫瘤，根據(jù)病理學(xué)分類，肝癌的種類主要分為原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌，一般多是原發(fā)性肝癌。原發(fā)性肝癌在我國每年的發(fā)生例數(shù)超過35萬，發(fā)生率位于所有癌癥發(fā)生率的第4位[28,29]，截止2022年底，肝癌在全球的發(fā)病率排第8位，其中50%的肝癌患者在中國。其死亡率也是在我國快速上升，但是，由于中國各地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展水平和醫(yī)療條件不平衡，不同地區(qū)對肝癌的認識和治療方法存在較大差異。為了有效降低肝癌的發(fā)病率和死亡率，減輕國家和家庭的經(jīng)濟負擔(dān)，提高人們對肝癌的認知水平和預(yù)防意識至關(guān)重要。首先，加強肝癌的宣傳教育非常必要。通過舉辦相關(guān)講座，發(fā)放宣傳冊子，開展校園和社區(qū)宣傳等方式，使更多的人了解肝癌的危險因素、早期癥狀和預(yù)防措施。特別要增加對高危人群的教育，使其重視定期體檢，早期發(fā)現(xiàn)肝癌，以利于治療和提高治愈率。其次，提高基層醫(yī)務(wù)工作者對肝癌的認識也很關(guān)鍵。不同地區(qū)的基層醫(yī)生由于經(jīng)驗和醫(yī)學(xué)水平的差異,對肝癌的診斷和治療存在較大差異。因此，加強對基層醫(yī)生的培訓(xùn)，使他們掌握肝癌的高危因素篩查、癥狀識別和標(biāo)準(zhǔn)化治療指南非常必要。這能提高肝癌的早診率，避免誤診和漏診，為肝癌的預(yù)防和治療奠定基礎(chǔ)。1.3.3肝癌影響因素據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)報道，針對原發(fā)性肝癌來講，受近年來人們?nèi)粘Ｉ罘绞降母淖?，該疾病帶來的致死率逐年上升，而且已?jīng)成為我國第二大腫瘤致死病因。目前針對該疾病，發(fā)現(xiàn)肝炎病毒感染是由乙肝病毒和丙肝病毒兩種病毒引起的。另外，過量的酒精引起的非乙醇型脂肪肝，長期攝入含有黃曲霉毒素的食品，還有其它原因引起的肝硬化，也是誘發(fā)該疾病的主要因素。對于部分患者來講，存有肝癌家族遺傳史且年齡在40歲以上的男性，患有肝癌的風(fēng)險相對較高[30]。肝硬化據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，肝硬化是最常見的原發(fā)性肝癌，肝硬化發(fā)生過程中，可能會有肝癌的發(fā)生，但大部分的肝硬化患者并沒有表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，甚至有部分患者出現(xiàn)肝硬化后并沒有接受積極有效的治療，因此導(dǎo)致了肝硬化患者容易出現(xiàn)肝癌[31]。在患者疾病發(fā)展過程當(dāng)中，丙型肝炎發(fā)展成為結(jié)節(jié)型肝硬化，此間HBV或者HCV感染與酒精或者非酒精性脂肪性肝病合并存在時就會增加肝癌發(fā)生的概率。對于肝硬化患者，5年發(fā)生肝癌的風(fēng)險為5-30%[32]。病毒性肝炎病毒性肝炎是誘發(fā)原發(fā)性肝癌首要因素，其中臨床當(dāng)中最常見的為慢性乙型、丙型肝炎。慢性乙肝是一種由乙肝病毒引起的肝病，隨著我國公共醫(yī)療水平的不斷提升，慢性乙型病毒性肝炎的預(yù)防取得了重大進步，但現(xiàn)存乙型病毒性肝炎患者數(shù)量仍然較多，加之多數(shù)患者未接受針對性治療可能會致使肝硬化甚至肝癌的發(fā)生[33]。酒精性肝病在代謝過程中，乙醛會對肝臟造成極大的損傷。而長期飲酒者，體內(nèi)的乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶都會比普通人要少，而身體內(nèi)的乙醛脫氫酶的活性也會比普通人要少，從而導(dǎo)致體內(nèi)的乙醛在肝臟內(nèi)無法被代謝掉。產(chǎn)生對人類肝具有巨大毒害作用的乙醛會促進肝臟炎癥相關(guān)腫瘤啟動因子出現(xiàn)，進而在長期發(fā)展過程當(dāng)中出現(xiàn)肝硬化逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)楦伟34]。非酒精性脂肪性肝病根據(jù)有關(guān)研究，在沒有肝硬化的前提下，非酒精性脂肪肝和代謝綜合征同時存在，也有可能導(dǎo)致肝癌的發(fā)生[35]。家族史以及遺傳因素家族遺傳是造成該疾病發(fā)生的主要因素，尤其針對原發(fā)性肝癌的高發(fā)地區(qū)，出現(xiàn)家族性原發(fā)性肝癌的概率相對較高[36,37]。其他因素在日常生活當(dāng)中,長期食用被黃曲霉毒素污染的食物在一些亞硝胺類、有機氯農(nóng)藥、偶氮芥類等化學(xué)物質(zhì)的作用下也會增加患者肝癌的發(fā)生率。1.3.4肝癌研究20年代初期，人們對肝細胞癌（HCC）的了解還很少，最多只能確診10%。后來，因為有了ALP和3型超聲波，所以肝癌的診治和診斷才得以展開。隨著分子生物學(xué)在基礎(chǔ)科學(xué)方面的發(fā)展，特別是近幾年在分子水平上的發(fā)展，使得我們對腫瘤的發(fā)病機理有更深入的認識，從而為進一步提高腫瘤的臨床療效和療效奠定了堅實的基礎(chǔ)。乙肝病毒（HBV）和HCC的確切聯(lián)系和機理有待于分子生物學(xué)的進一步發(fā)展。目前已有的研究表明，HBV可以整合到細胞的基因中，導(dǎo)致DNA重組和融合位點發(fā)生突變，從而導(dǎo)致了基因的穩(wěn)定性。其作用機制是激活其本身的啟動或促進因素，從而引起過度的腫瘤基因的表達。HBV-X基因是目前HBV研究的一個重要課題。HBV的X基因在HBV病毒DNA基因組中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用[38]。Schuster等[39]研究表明HBV的X蛋白可特異性激活肝細胞中Bcl-2敏感的致凋亡通路。Koike等[40]的動物實驗結(jié)果表明：X基因的HBX轉(zhuǎn)基因小白鼠可引起肝臟病變，使肝臟出現(xiàn)類似腫瘤的變化；但是其它團隊的試驗結(jié)果則不盡相同。所以X基因在腫瘤發(fā)生過程中的角色有待于更深入的探討。在1964年，蘇聯(lián)的Tataninor、Abelev等人發(fā)現(xiàn)了AFP,Abelev在1971年的論文《在個人發(fā)病及肝上的甲胎蛋白》之后，Tataninor、Abelev等人就將其用于臨床和預(yù)后的檢測，從而大大地改善了HCC的早期確診[41]。此后，人們相繼找到了與癌變有關(guān)的蛋白和酶，例如：癌胚抗原、γ谷氨酸轉(zhuǎn)肽酶、α-抗胰蛋白酶和Le-Y抗原等，肝癌患者的存活期隨療效的改善而顯著延長。研究者劉揚[42]發(fā)現(xiàn)，1990年至1998期間，肝癌患者的生存率整體上隨著醫(yī)療技術(shù)的進步逐漸提高。具體來說，被診斷于1990年至1996年的患者生存率分別為73.1%、54.2%，34.0%；而被診斷于1997年至1998年的患者占據(jù)總?cè)藬?shù)的91.1%、63.8%和41.2%。值得注意的是，相較于國內(nèi)報道，國外報道顯示的第3年和第5年生存率有所降低，可能與不同地域的肝癌發(fā)病狀況有一定關(guān)系[43,44]。孟興凱[45]報道肝癌根治性切除術(shù)后五年復(fù)發(fā)率為31.5%，小肝癌也達到43.5%?？傮w情況并不是很好，如何正確地治療和提高患者的生存質(zhì)量，是當(dāng)前亟待解決的問題。有證據(jù)顯示，手術(shù)之前肝內(nèi)有肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門脈癌栓、腫瘤擴散等因素是腫瘤手術(shù)后的主要因素，而肝腫瘤有單一或多個腫瘤的區(qū)域，進一步的手術(shù)切除并不能降低手術(shù)的復(fù)發(fā)率。綜合運用多種治療手段，加強預(yù)防、普查、加強分子生物的探索以及尋找復(fù)發(fā)機制是當(dāng)前治療肝癌發(fā)展的總體方向。1.3.5肝癌患者生活質(zhì)量李靜等人[46]進行了一項研究，評價間充質(zhì)干細胞(MRCS)聯(lián)合TACE治療中晚期原發(fā)性肝癌的療效和安全性。研究選擇2017年4月至2020年12月在甘肅省第二人民醫(yī)院收治的60例中晚期原發(fā)性肝癌患者作為對象,隨機分為MRCS-CD組和對照組，各30例。MRCS-CD組給予MRCS-CD聯(lián)合TACE治療，對照組給予單純TACE治療。兩組治療觀察時間為6個月。結(jié)果顯示,MRCS-CD組的客觀緩解率高達86.7%,顯著高于對照組的60.0%(P<0.05)。兩組在治療期間的毒副反應(yīng)發(fā)生率相當(dāng)(P>0.05)。治療后,MRCS-CD組在精神健康、情感職能、社會關(guān)系、總體健康狀況、心理職能和生理功能等方面的生活質(zhì)量評分顯著高于對照組(P<0.05)。兩組治療后循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)的相對表達水平低于治療前，且MRCS-CD組的降低更顯著(P<0.05)。所有患者隨訪至2022年2月1日，平均隨訪時間為31.92個月。MRCS-CD組的無進展生存時間和總生存時間均顯著長于對照組(P<0.05)。該研究結(jié)果表明，MRCS-CD聯(lián)合TACE治療中晚期原發(fā)性肝癌的短期療效更佳，可以顯著提高患者的生存質(zhì)量和生存期，且安全性好。MRCS-CD治療可能通過降低腫瘤ctDNA水平發(fā)揮抗腫瘤作用。因此，MRCS-CD聯(lián)合TACE可作為中晚期原發(fā)性肝癌標(biāo)準(zhǔn)治療的有效補充，值得進一步推廣應(yīng)用。MRCS-CD聯(lián)合TACE治療中晚期原發(fā)性肝癌安全有效，能顯著提高患者生存質(zhì)量和生存期。MRCS-CD可能通過下調(diào)ctDNA水平發(fā)揮治療作用。MRCS-CD聯(lián)合TACE是中晚期原發(fā)性肝癌治療的有效補充，值得推廣。辛蘭芝[47]做過一項研究，其研究旨在探討心理干預(yù)對肝癌手術(shù)患者護理的臨床效果以及生活質(zhì)量的影響。在醫(yī)院內(nèi)，篩選了50例接受手術(shù)治療的肝癌患者作為研究對象，并采用隨機數(shù)字表方法將他們分成觀察組和對照組，每組各有25名成員。其中，對照組患者接受常規(guī)護理，而觀察組則加強心理干預(yù)措施。最終比較兩組在護理服務(wù)方面的效果，結(jié)果顯示，觀察組患者的負性情緒得以及時改善，生活質(zhì)量也得到了良好提高。護理服務(wù)取得了患者及其家屬的高度認可和滿意，而與對照組相比，觀察組在各項指標(biāo)上均有明顯優(yōu)勢(P<0.05)。因此，本研究結(jié)論表明，在肝癌患者手術(shù)期間運用心理護理干預(yù)，可以有效提高臨床護理質(zhì)量、改善患者的負性情緒、提升患者疾病控制效果和生活質(zhì)量水平，具有重要的臨床應(yīng)用價值。1.4癌癥的治療方法1.4.1手術(shù)治療根治性手術(shù)：適合于未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，且心臟、肺部機能較好的中、低齡癌癥病人。切除腫瘤及周邊一小節(jié)的正常組織，以徹底切除腫瘤。轉(zhuǎn)移治療：對于已轉(zhuǎn)移至其它器官的癌細胞，如僅轉(zhuǎn)移至肝臟、肺臟、大腦等，則采用可行的外科手術(shù)方式進行腫瘤切除；這樣才能讓病人活得更久。姑息性手術(shù)：由于腫瘤發(fā)展到了后期，醫(yī)生會采用一些溫和的方法來減輕患者的痛苦與壓力，改善患者的生活質(zhì)量。但是，由于姑息外科不能完全治愈,通常配合其他手術(shù)治療。1.4.2化療化療是一種常見的治療癌癥的方法，可以有效地延長生存時間，減輕癥狀。然而，化療藥物的使用會引起一系列副作用，包括惡心、嘔吐、脫水、疲勞等不良反應(yīng)。為了減輕這些副作用，化療醫(yī)生通常會為患者提供支持性治療，包括藥物治療、營養(yǎng)支持和心理支持等措施，以改善患者的生活質(zhì)量，提高治療效果。這些支持性治療措施是化療治療過程中的重要部分，可以幫助患者更好地應(yīng)對治療過程中的不良反應(yīng)，提高其生活質(zhì)量和康復(fù)效果。1.4.3放療放射治療是一種治療方法，包括放射治療和緩和放射治療。在早期階段，局部晚期，拒絕手術(shù)、不能接受手術(shù)、不能達到激進治療目標(biāo)以及術(shù)后局部復(fù)發(fā)的病人。在上述的幾個案例中也使用放射治療。1.4.4免疫治療免疫療法免疫治療是一種通過激活人體免疫細胞攻擊腫瘤的治療方法，適用于多種惡性腫瘤，例如黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌等。它可以單獨使用或與其他治療方式如放療、化療聯(lián)合使用。相較于傳統(tǒng)化療和放療，免疫治療有一定優(yōu)勢，如副作用小，有可能緩解臨床癥狀和提高治療效果等。但并不是所有患者都適用免疫治療，并且對于不同種類的癌癥，其治療機制及應(yīng)用方法也可能有所不同。因此，在選擇治療方案時需要根據(jù)個體情況進行評估和制定。1.4.5靶向治療靶向療法是一種針對癌癥的系統(tǒng)性治療方法。它采用特異性的靶向藥物來抑制癌癥患者的癌癥基因，從而實現(xiàn)治療目的。由于不同的腫瘤具有不同的分子特征，患者通常需要進行基因檢測，以選擇適合自己的靶向藥物。與傳統(tǒng)化療相比，靶向藥物有更少的毒副作用，使用更為方便。但是靶向藥物也存在一些問題，例如藥物具有耐藥性，病人可能會產(chǎn)生新的突變，導(dǎo)致最初藥物失去藥效。總的來說，靶向療法是一種有前途的治療方法，但需要在臨床實踐中不斷完善和改進。1.5本課題研究目的及意義作為一種惡性腫瘤，肝癌的發(fā)生機制十分復(fù)雜。針對該疾病，目前臨床主要采用手術(shù)、放療和化療等常規(guī)療法以及免疫療法和內(nèi)分泌療法來進行治療。面對HCC，目前還沒有一種適合于所有HCC病人的固定療法，這就要求各種方法之間的互補和有效的結(jié)合。以期達到最佳治療效果而延長患者的生命極為重要，因此可以從傳統(tǒng)中藥入手。近幾年，由于人們對其進行了大量的研究，許多新的藥物活性和機理被人們所認識，特別是在抗癌中起重要的作用[48,49]。因此，本論文將從青藤堿抗肝癌作用機制出發(fā)，以人肝癌HepG-2細胞為研究對象的基礎(chǔ)上[50]，從青藤堿對肝癌HepG-2細胞形態(tài)變化和細胞蛋白表達的影響出發(fā)，使用倒置顯微鏡與熒光顯微鏡，以宏觀水平下的細胞形態(tài)變化為指標(biāo)，衡量青藤堿對肝癌細胞的作用；利用WesternBlot技術(shù)測定青藤堿作用肝癌HepG-2細胞前后Cyt-C蛋白的表達變化[51]。通過上述體外實驗從細胞水平探究青藤堿對于肝癌HepG-2細胞的抗腫瘤作用，為今后青藤堿的深入研究開發(fā)與臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1.6論文研究內(nèi)容（1）倒置顯微鏡觀察青藤堿作用后的肝癌HepG-2細胞的形態(tài)變化；（2）熒光顯微鏡觀察青藤堿作用后的肝癌HepG-2細胞的形態(tài)變化；（3）WesternBlot技術(shù)測定青藤堿作用肝癌HepG-2細胞前后Cyt-C蛋白的表達變化。2實驗內(nèi)容2.1引言WesternBlot是一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)，可以在分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用。其基本原則是用特定的免疫球蛋白對經(jīng)膠質(zhì)電泳法治療的細胞和生物體進行染色。通過對染色部位及染色的深度進行研究，可以了解到某些蛋白在被檢測的細胞或組織中的表現(xiàn)狀況。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)起源于20世紀(jì)80年代初，由瑞士的哈里·托賓（HarryTowbin）首先提出。1981年，科學(xué)家尼爾·伯奈特在《分析生物化學(xué)》雜志上發(fā)表了一篇名為“WesternBlot”的文章。蛋白免疫印跡（WesternBlot）是通過將經(jīng)電泳法從膠體中提取的細胞或蛋白質(zhì)，經(jīng)固定的NC薄膜或PVDF薄膜，再利用抗體檢測出一種特殊的技術(shù)。前期研究發(fā)現(xiàn)，SN對人肝癌HepG-2細胞具有增殖抑制作用，結(jié)合MTT等預(yù)實驗結(jié)果，并結(jié)合IC50值確定了青藤堿給藥濃度，設(shè)定低中高三個濃度，0.7mmoL/L、1.4mmoL/L、2.8mmoL/L為后續(xù)給藥濃度。因此，本課題以人肝癌HepG-2細胞作為研究對象，采用倒置顯微鏡、熒光顯微鏡和WesternBlot法從宏觀角度觀察青藤堿作用于肝癌細胞導(dǎo)致細胞的變化進行研究。2.2實驗器材及試劑2.2.1實驗器材醫(yī)用型超凈工作臺（DL-CJ-1N）北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司96孔細胞培養(yǎng)板美國ComungIncorporated公司酶標(biāo)儀（Model680）美國NBS公司離心機（AnkeTDL80-2C）上海安亭科學(xué)儀器廠萬分之一電子天平（Adventurer）美國Ohous公司倒置顯微鏡（CKX-41-32）日本OLYMPUS公司熒光顯微鏡（Fluorescencemicroscope）上海永科光學(xué)電泳儀上海易慧生物2.2.2試驗試劑青藤堿（98%，批號：Y0001/208-1EA）江西金芙蓉藥業(yè)有限公司胎牛血清（批號：20160402）杭州四季青生物工程材料公司1640培養(yǎng)基（批號：37672）GIBCO公司溴化四氮唑藍MTT（批號：20151121）美國Sigma藥物公司氯化鈉（批號：150727）上?；瘜W(xué)試劑公司氯化鉀（批號：150402）天津科瑞恩化工銷售公司磷酸二氫鉀（批號：20150301）濰坊恒豐化工有限公司磷酸二氫鈉（批號：20150517）上?；瘜W(xué)試劑公司二甲基亞砜（批號：20160204）天津中和盛泰化工有限公司羥基喜樹堿(HCPT)（批號：1711030）哈爾濱圣泰藥業(yè)有限公司胰蛋白酶（批號：20171201）美國Gibco公司β-avtin鼠抗人單克隆抗體美國SantaCruz公司Bradford蛋白濃度測定試劑盒美國Biorad公司I抗(兔抗小鼠Cyt-C多克隆抗體)美國SantaCruz公司II抗為IgG北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司細胞系人肝癌HepG-2細胞由哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥物工程技術(shù)研究中心提供，在本實驗室進行培養(yǎng)。試劑配置（1）PBS緩沖液的制備方法如下：首先按照Na2HPO40.78g、NaCl4g、KCl0.1g、KH2PO40.1g的順序依次稱量化學(xué)藥劑，加入到經(jīng)過高溫消毒的500毫升生理鹽水中。然后使用超純水將溶液定容至500毫升，并通過超聲波徹底溶解混合液。將混合液經(jīng)過121℃高壓消毒30分鐘后，帶到超凈工作室中冷卻約4小時。接下來進行一次0.22微米濾芯的過濾，去除其中的細菌和顆粒物質(zhì)，最后將處理好的PBS緩沖液均分為250毫升，并裝在生理鹽水瓶內(nèi)密封并存放于4℃冰箱中。（2）0.25%胰蛋白酶：用分析天平稱取0.5g胰蛋白酶粉末，用200mLPBS緩沖液使其完全溶解，分裝50mL鹽水瓶中，0.22μm口徑濾頭過濾一次，封口，保存于4℃的冰箱里面待用。2.3實驗方法2.3.1細胞培養(yǎng)肝癌細胞HepG-2培養(yǎng)于37℃含5%CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)，并在顯微鏡下進行觀察，當(dāng)細胞生長到四分之三左右時，認為其正處于對數(shù)生長期，即可進行細胞傳代。首先將培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液倒出，用3mLPBS清洗，反復(fù)操作3次，加入1mL0.25%的胰酶消化液?？焖俚膶⒀b有細胞的試管放在培養(yǎng)皿中，隨著分離，空隙逐漸擴大，并且大部分細胞變小變圓時即可。把胰酶消化液倒出，快速加入3mL含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液終止細胞的消化，用滴管將貼壁細胞充分吹下、吹勻。取出新培養(yǎng)瓶，并根據(jù)培養(yǎng)瓶大小和所需的細胞密度加入適量的含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液和細胞懸液，最后將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。2.3.2倒置顯微鏡觀察經(jīng)中藥成分青藤堿作用后的肝癌HepG-2細胞的形態(tài)變化（1）將HepG-2細胞從5%CO2培養(yǎng)皿中取出，然后將培養(yǎng)皿中的原培養(yǎng)劑倒入無菌槽中，再用37℃的PBS對細胞進行清洗，每3mL一次共洗滌3次，清洗過程要溫和，清洗干凈后扔掉；將預(yù)加熱的胰酶加入1mL，用倒置顯微鏡對其進行觀察情況，當(dāng)看見有一般的細胞慢慢變圓時，迅速倒掉胰蛋白酶，然后加入預(yù)熱過的含10%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液，加入量為3mL，然后用滴管在培養(yǎng)瓶內(nèi)反復(fù)吹打細胞直到將細胞從瓶壁上吹落，動作要輕柔，但是一定要將細胞吹的均勻，并將細胞稀釋成濃度為2×104個/mL的細胞懸液，取三組細胞，采用3mL細胞培養(yǎng)瓶每瓶1mL細胞懸液置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（2）培養(yǎng)HepG-2細胞24h后，取出培養(yǎng)箱內(nèi)的培養(yǎng)瓶，每瓶中加入已經(jīng)配置好的1mL的中藥成分青藤堿的藥液，做3個平行樣，以確保實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。青藤堿的最終給藥濃度分別為低、中、高（根據(jù)IC50設(shè)定）；陽性藥為羥基喜樹堿；空白對照組加入1mL的RPMI1640培養(yǎng)液，之后將培養(yǎng)瓶放入CO2含量調(diào)節(jié)至5%的培養(yǎng)箱內(nèi)37℃培養(yǎng)。（3）三組藥物作用48h后，分別在倒置顯微鏡下拍照觀察其形態(tài)。2.3.3熒光顯微鏡觀察經(jīng)中藥成分青藤堿作用后的肝癌HepG-2細胞的形態(tài)變化將HepG-2在對數(shù)期肝內(nèi)的HepG-2進行酶解，然后以RPMI1640（含有10%的胎牛血清），以5x104/mL的細胞混合懸液進行稀釋，然后取出經(jīng)預(yù)處理的6孔板，每孔1mL進行接種，放置于培養(yǎng)器中，設(shè)定37℃，5%CO2，24小時后每孔給予1mL藥；將SN的含量按IC50設(shè)置，將其分成三個劑量組，陽性對照組HCPT1mL，RPMI1640培養(yǎng)液1mL給空白對照組，持續(xù)48h；將培養(yǎng)液倒入水中，加1mL多聚甲醛，4℃放置1h，PBS洗滌液沖洗，遮光后用Hoechst33258染液浸泡30min，熒光顯微鏡下拍照觀察。2.3.4WesternBlot技術(shù)測定青藤堿作用肝癌HepG-2細胞前后Cyt-C的表達變化取對數(shù)生長期的人肝癌HepG-2細胞，分別用PBS緩沖溶液清洗細胞靜置。取PMSF溶液與Western及IP細胞裂解液使解液與細胞充分接觸，裂解。把細胞轉(zhuǎn)移至EP管中，離心。收集上清液并對蛋白濃度進行定量。將定量的蛋白樣品轉(zhuǎn)至15%SDS凝膠電泳儀中，電泳后進行轉(zhuǎn)膜，然后將膜放置于TBST封閉液中，此封閉液中含有5%脫脂奶粉，封閉時間2h，然后加入抗體Ⅰ抗，在4℃條件下孵育過夜。孵育完畢后，將樣品用TBST封閉液在室溫條件下洗滌3次，每次洗滌時間10min。然后在室溫條件下孵育Ⅱ抗，孵育時間2h。孵育完畢后，用TBST封閉液在室溫條件下洗滌三次，每次洗滌時間10min。最后加入AP-NBT/BICT顯色液進行顯色。等到條帶明顯時，使用去離子水漂洗條帶，將洗后的條帶放濾紙上晾干，最后進行觀察掃描計算結(jié)果。2.4實驗結(jié)果與分析2.4.1青藤堿對肝癌HepG-2細胞形態(tài)學(xué)的影響結(jié)果表明，空白對照組細胞是附著的和多邊形的，細胞貼壁良好，連接緊密，間質(zhì)飽滿。當(dāng)不同濃度的SN作用后細胞貼壁能力變?nèi)?，體積變小，細胞之間的間隙逐漸增大，細胞固縮變圓，SN濃度越高，細胞狀態(tài)越差，細胞數(shù)量越少，細胞體積越小，漂浮細胞增多，失去正常細胞的形態(tài)。（圖2-2、2-3、2-4、2-5、2-6）圖2-2空白對照圖2-3HCPT（0.007mmol/L羥基喜樹堿）圖2-40.7mmoL/L青藤堿組圖2-51.4mmoL/L青藤堿組圖2-62.8mmoL/L青藤堿組培養(yǎng)2.4.2熒光顯微鏡觀察到的人肝癌HepG-2細胞形態(tài)變化通過熒光顯微鏡發(fā)現(xiàn)，空白對照組肝癌細胞顏色暗淡，細胞之間有一定的空隙，細胞膜完好，HCPT陽性對照組的細胞顏色明顯較亮，細胞明顯皺縮，觀察三組濃度的青藤堿作用后的人肝癌HepG-2細胞顏色變化可以看出，隨著青藤堿濃度的升高，肝癌HepG-2細胞顏色越來越亮，明顯可見凋亡細胞皺縮，核染色質(zhì)濃縮，也可見典型的凋亡小體，可以得出青藤堿對肝癌HepG-2細胞形態(tài)的變化有很大的影響，并且隨著青藤堿濃度的提高，其作用越明顯。（圖2-7、2-8、2-9、2-10、2-11）圖2-7空白對照組圖2-8HCPT（0.007mmol/L羥基喜樹堿）組培養(yǎng)48h后的肝癌HepG-2細胞 圖2-90.7mmoL/L青藤堿組培養(yǎng)48h后的肝癌HepG-2細胞 圖2-101.4mmoL/L青藤堿組培養(yǎng)48h后的肝癌HepG-2細胞圖2-112.8mmoL/L青藤堿組培養(yǎng)48h后的肝癌HepG-2細胞2.4.3青藤堿對肝癌HepG-2細胞前后Cyt-C的表達變化如圖2-12、2-13，使用WesternBlot檢測了青藤堿作用于肝癌細胞前后蛋白表達的變化。結(jié)果顯示，在青藤堿組中，相比空白對照組，相關(guān)蛋白的表達量顯著增加（P<0.5），此外，隨著青藤堿濃度的升高，這些蛋白的表達量也呈明顯上升趨勢。15KDaCyt-C 空白組HCPT組0.7mmol/L1.4mmol/L2.8mmol/L42KDaActin空白組HCPT組0.7mmol/L1.4mmol/L2.8mmol/L圖2-12圖2-13不同濃度青藤堿作用后Cyt-C的表達變化圖分組劑量(mmol/L)Cyt-C(%)細胞色素C空白對照組－77.32±0.51HCPT組0.007145.18±0.32**青藤堿組0.7119.43±0.43**青藤堿組1.4126.16±0.47**青藤堿組2.8143.25±0.24**表2-42.4.4討論青風(fēng)藤（拉丁學(xué)名：CaulisSinomenii，別名青藤），也稱尋風(fēng)藤、大青木香、大青藤等，藤黃目防己科防己屬植物，是中國浙江、四川、廣西廣東、福建陜西等地的一種植物。青藤堿具有廣泛的藥理作用，具有緩解疼痛、消炎，便尿、降低血壓等作用青藤堿能影響腫瘤細胞的多種活動，如抑制其增殖，增強輻射，誘導(dǎo)細胞凋亡等。有關(guān)的實驗結(jié)果顯示，青藤素對腫瘤的治療效果顯著，可誘發(fā)細胞的凋亡，并對其生長起到一定的促進作用；這就抑制了癌細胞的成長。但其確切的抗腫瘤機理還不清楚，因此還有待于更多的實驗。因此，本課題選擇肝癌HepG-2細胞來研究青藤堿對細胞形態(tài)變化和細胞凋亡關(guān)鍵蛋白表達的影響作用，并為青藤堿在肝癌治療領(lǐng)域的深入研究奠定基礎(chǔ)。通過倒置顯微鏡和熒光顯微鏡觀察青藤堿作用后細胞形態(tài)學(xué)變化情況，觀察結(jié)果顯示，空白對照組細胞是附著的和多邊形的，細胞貼壁良好，連接緊密，間質(zhì)飽滿。當(dāng)相同濃度的青藤堿隨著時間的增加，細胞貼壁能力變?nèi)?，體積變小，細胞之間的間隙逐漸增大，細胞固縮變圓，漂浮細胞增多，失去正常細胞的形態(tài)。在相同時間的情況下，隨著藥物濃度的增加，細胞狀態(tài)越差，細胞數(shù)量越少，細胞體積越小，漂浮細胞增多，細胞凋亡情況越明顯。WesternBlot檢測了青藤堿作用肝癌細胞前后Cyt-C蛋白的表達差異情況，結(jié)果顯示青藤堿組的蛋白表達量明顯高于空白對照的相應(yīng)蛋白表達量（P<0.5），同時還可以看出，隨著青藤堿濃度的升高其蛋白表達量也明顯升高。綜上所述，青藤堿對人肝癌HepG-2細胞形態(tài)變化有促進作用，其促進作用取決于時間和劑量。它們?yōu)檫M一步深入研究青藤堿治療肝癌提供了一定的實驗基礎(chǔ)，我們也看到這種藥物具有一定的實驗研究價值和應(yīng)用前景。結(jié)論用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化結(jié)果得出，隨著時間和濃度的增加，細胞貼壁能力變?nèi)?，體積變小，細胞之間的間隙逐漸增大，漂浮細胞增多，失去正常細胞的形態(tài)。用熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化結(jié)果得出，在相同時間內(nèi)，隨著濃度的提高，細胞貼壁能力變?nèi)?，體積變小，細胞之間的間隙逐漸增大，漂浮細胞增多，失去正常細胞的形態(tài)。通過WesternBlot檢測了青藤堿作用肝癌細胞前后Cyt-C蛋白的表達差異情況，可以得出，青藤堿作用肝癌HepG-2細胞，能夠提高其蛋白表達量。綜上所述，這項研究初步證實了青藤堿能夠促進人肝癌HepG-2細胞形態(tài)的變化，且這種促進作用與藥物處理時間和給藥劑量有關(guān)。這一研究為進一步深入探究青藤堿治療肝癌提供了一定的實驗基礎(chǔ)，同時也揭示出了其潛在的臨床應(yīng)用前景，具有一定的實驗研究價值。參考文獻江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊).上海:上?？萍汲霭嫔?1982:1234.陳偉毅,秦春宏,銀曉剛.青藤堿抗腫瘤作用研究進展[J].中國藥師,2013,16(12):1902-1904.劉繼紅.青藤堿的免疫藥理作用及治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用機制的初步研究[D].北京:北京大學(xué),2003.黃小魯,王勇,郝飛.青藤堿對機體免疫系統(tǒng)的影響及臨床應(yīng)用進展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2007,26(4):397-399.李樂,張彩玲,宋必衛(wèi).青藤堿的藥理研究與臨床應(yīng)用[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(4):310-313.楊健,羅烈,趙巍,等.青藤堿衍生物的合成及其鎮(zhèn)痛抗炎作用定量構(gòu)效關(guān)系[J].武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2009,30(1):29-32.劉良,李曉娟,王培訓(xùn).青藤堿對人外周血單個核細胞IL-1β和IL-8細胞因子-基因表達的影響[J].中國免疫學(xué)雜志,2002,18(4):241-244．王文軍,王培訓(xùn),李曉娟.青藤堿對人外周血單個核細胞環(huán)氧化酶活性及其基因表達的影響[J].中國中藥雜志,2003,28(4):352-356．QianL,XuzL.Sinomenine,anaturaldextrorotatorymorphinananalog,isanti-inflammatoryandneuroprotectivethroughinhibitionofmicroglialNADPHoxidase[J].JNeuroinflammation,2007,4(1)l:23．WangAL,LiZB.Sinomenineinhibitsactivationofratretinalmicrogliainducedbyadvancedglycationendproducts[J].IntImmunopharmacol,2007,7(12):1552-1558．季宇斌.中藥有效成分藥理與應(yīng)用[M].哈爾濱黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社,1995:427-431.劉強周,莉玲,李悅.青藤堿研究概況[J].中草藥,1997,28(4):247-249．LiangL.Ameliorationofratexperimentalarthritidesbytreatmentofalkaloidsinomenine[J].IntJImmunopharmacol,1996,18(10)l:529-543.石曉彤.正清風(fēng)痛寧治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床療效觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病雜志,1998,7(1):195.羅烈,楊健,宋金春,等.苯甲酰青藤堿的鎮(zhèn)痛抗炎作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(3):196-198.王文君,王培訓(xùn).青藤堿對環(huán)氧化酶-2活性的選擇性抑制作用[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2002,19(1):46-47.陳煒,沈悅娣,趙光樹.青藤堿對脂多糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞環(huán)氧化酶-2表達的影響[J].中國中藥雜志,2004,29(9):900-903.李嗣英.青藤堿對小鼠免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床,1999,15(5):26.LiuL,RieseJ,ReschK,eta1.ImpaimentofmacrophageeicosanoidandnitricoxideproductionbyanalkaloidfromSinomeniumacutum[J].Arzneimi—Forsch,1994.44:1223-1226．CandinasD,MarkW,KaeverV,eta1.ImmunomodulatoryeffectsofthealkaloidsinomenineinthehighresponderAcito—lewiscardiacallograftmodel[J].Transplatation,1996,66(12):1855-1860.劉繼紅,李衛(wèi)東．青藤堿治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎免疫作用和機制[J]．藥學(xué)學(xué)報,2005,40(2);127-131.ZhaoY,LiJ.SinomenineinhibitsmaturationofmonocytederiveddendriticcellsthroughblockingactivationofNF-kappaB[J]．IntImmunopharmacol,2007,7(5):637-645．劉志,段志,常軍,等.青藤堿通過下調(diào)MDR-2表達使多重耐藥結(jié)腸癌細胞（Caco-1）對多柔比星敏感[J/OL].公共科學(xué)一號,2014,9（6）:e98560.2018-02-07[2014-06-05].陳毅,張玲,陸旭,等.青藤堿通過P-糖蛋白依賴性和獨立方式逆轉(zhuǎn)膀胱癌細胞多藥耐藥[J].藥學(xué),2014,69(1):48-54.李華,林志,白瑩,等.青藤堿通過靶向MCM2介導(dǎo)Wnt/β-連環(huán)蛋白通路抑制卵巢癌細胞生長和轉(zhuǎn)移[J].RSC高級,2017,7（79）:50017-50026.]LvY,LiC,LiS,HaoZ.SinomenineinhibitsproliferationofSGC-7901gastricadenocarcinomacellsviasuppressionofcyclooxygenase-2expression[J].Oncologyletters.2011;2(4):741-745.LiaoF,YangZ,LuX,GuoX,DongW.Sinomeninesensitizesgastriccancercellsto5-fluorouracilinvitroandinvivo.Oncologyletters[J].2013;6(6):1604-1610OraganizationWHO.ChinaSource:Globocan2018[M].TheGlobalCancerObservatory[EB/OL].(2021-03)[2021-09-09].吳孟超,湯釗猷,劉允怡,等.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019年版)[J].中國實用外科雜志,2020(2):121-138.張桂麗.原發(fā)性肝癌的發(fā)病因素和表現(xiàn)有哪些,如何治療[J].健康忠告,2020,14(12):233.段彬,羅成靜,羅海陽.小肝癌,肝硬化結(jié)節(jié)的MRI征象特點及鑒別診斷價值.中國CT和MRI雜志,2019,17(10):56-58.劉榮偉,徐小虎,劉月軍,等.肝硬化背景下肝臟良惡性結(jié)節(jié)的MRI及CT診斷價值.癌癥進展,2018,16(6):790-793.苗小變,許磊,龔夢,等.釓噴酸葡胺增強MRI在肝硬化背景下肝癌診斷中的應(yīng)用及其價值分析[J].中國CT和MRI雜志,2021,19(1):120-122.黃杰靈,李遠章,李亮杰,等.Gd-EOB-DTPA增強MRI在乙肝肝硬化背景下肝癌的診斷價值[J].CT理論與應(yīng)用研究,2019,28(4):485-492.李銀玲,王炳元.精依賴和酒精相關(guān)性肝病的遺傳學(xué)研究進展[J].肝臟,2017,22（05）:392-394.耿海波,安麗平.非酒精性脂肪性肝病相關(guān)肝癌鼠模型的研究進展[J