1.2.2微生物的培養(yǎng)技術及應用課件-高二下學期生物人教版選擇性必修3

1.2微生物的培養(yǎng)技術及應用高壓蒸汽滅菌液體培養(yǎng)基二微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)課題背景

自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當要分離的微生物在混合菌群中不是優(yōu)勢種群時，更難實現(xiàn)。稀釋涂布平板法呈現(xiàn)的雜菌群那么我們又如何達成這一目標呢？科學家們應用選擇性培養(yǎng)基解決了這一難題。閱讀課本P17—18，

思考下列問題：（2分鐘完成）1.實驗室中微生物篩選的原理？2.選擇培養(yǎng)基的概念？3.選擇培養(yǎng)基的類型？4.比較選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基？5、選擇培養(yǎng)基配方的設計？？？二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（一）選擇培養(yǎng)基科學實例：尋找耐高溫的DNA聚合酶尋找目的菌種時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找。因為熱泉的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物，使耐高溫的細菌（DNA聚合酶）保留下來。（一）選擇培養(yǎng)基耐高溫的酶耐高溫生物體高溫環(huán)境（熱泉、火山口）尋找尋找那么，如何從眾多的微生物中篩選出單一菌種？生物與環(huán)境相適應的觀點生物與環(huán)境相適應的觀點篩選原因：啟示：PCR(聚合酶鏈式反應)是一種在體外DNA復制的技術，此項技術要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。1973年，科學家在美國黃石國家公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)了耐高溫的水生棲熱菌，并分離到耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。實例：1.實驗室中微生物篩選的原理

人為提供_________________的條件（包括_____、_____和_____等），同時___________________________。有利于目的菌生長抑制或阻止其他微生物的生長營養(yǎng)溫度pH2.選擇培養(yǎng)基的概念

在微生物學中，將允許

生長，同時

或

其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。特定種類的微生物抑制阻止3.選擇培養(yǎng)基的類型類型條件分離得到的菌種改變培養(yǎng)條件70～80℃的高溫添加某種化學物質加入青霉素高濃度食鹽特殊碳、氮源石油是唯一碳源營養(yǎng)缺陷不加碳源不加氮源水生棲熱菌(淘汰細菌)酵母菌、霉菌等真菌金黃色葡萄球菌石油降解菌自養(yǎng)型微生物固氮菌《金版》P24點撥提升培養(yǎng)基中加氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落不添加抗生素的培養(yǎng)基上的菌落沒有氨芐青霉素抗性基因的細菌被淘汰怎樣篩選(選擇)出抗氨芐青霉素能力的細菌?舉例哪些菌被淘汰？項目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基原理加入不影響甚至促進目標微生物生長，而抑制或阻止其他種類微生物生長的化學物質加入某種指示劑或化學藥品(不影響微生物正常生長)，使微生物的某種代謝產物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學藥品發(fā)生反應用途培養(yǎng)、分離出目標微生物鑒別目標微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌時，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細菌的生長；利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)可分解尿素的細菌可用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌(若有，則菌落呈黑紫色，且?guī)в薪饘俟鉂?圖示尿素分解菌大腸桿菌拓展延伸4、比較選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基思考-討論5、選擇培養(yǎng)基配方的設計尿素的立體結構尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化學性質穩(wěn)定，是現(xiàn)代農業(yè)生產中一種重要的氮肥。尿素被土壤中某些細菌分解成NH3,再被轉化為NO3-、NH4+等被植物吸收。這些細菌之所以能分解尿素，是因為能合成脲酶，來催化尿素分解。討論：1.你如何設計培養(yǎng)基配方，將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌分離出來？2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？使用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖區(qū)別：只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營養(yǎng)成分基本相同?！督鸢妗稰18例1、例2、例4P221牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000mlKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一培養(yǎng)基二討論：1.從物理性質看兩種培養(yǎng)基屬于哪類？依據(jù)是什么？培養(yǎng)基的主要用途是什么？都屬于固體培養(yǎng)基。依據(jù)是添加了凝固劑瓊脂，且比例為1.5%-2%。培養(yǎng)基的主要用途是分離、鑒定、計數(shù)。2.從用途上來講，哪個屬于選擇培養(yǎng)基？將得到何種細菌？培養(yǎng)基二屬于選擇培養(yǎng)基；其可獲得能分解尿素的微生物。3.兩種培養(yǎng)基中共有哪些成分？碳源、氮源、無機鹽、水培養(yǎng)基一的碳源為_______，氮源為_______；培養(yǎng)基二的碳源為_______，氮源為_______；牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素（一）選擇培養(yǎng)基疑難突破一：選擇培養(yǎng)基配方的設計編號①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL【?典例2】據(jù)某微生物培養(yǎng)基的配方表回答下列問題1.此培養(yǎng)基按物理性質劃分屬于

培養(yǎng)基，理由是

；按功能劃分屬于

培養(yǎng)基，因為沒有碳源，只有

微生物才能生長(利用空氣中的CO2)。2.此培養(yǎng)基含有的微生物的營養(yǎng)成分包括

三類，若加入氨基酸，則它可充當?shù)臓I養(yǎng)成分包括

。3.若要觀察微生物的菌落特征，培養(yǎng)基中應添加的成分是

。4.若用該培養(yǎng)基來分離尿素分解菌，應除去表中

成分(填表中序號)，應加入

和

的有機物。液體選擇自養(yǎng)型水、無機鹽、氮源碳源、氮源、特殊營養(yǎng)物質凝固劑(瓊脂)①尿素不含氮元素沒有凝固劑(瓊脂)制備以

為唯一氮源的

培養(yǎng)基。尿素選擇尿素選擇3、制備培養(yǎng)基：15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO4碳源：氮源：葡萄糖尿素培養(yǎng)基的唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。4、鑒定方法

在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將

，說明該細菌能夠分解尿素。P26酚紅變紅CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O思考：土壤中細菌的種類和數(shù)量非常多。1g土壤中有多少能分解尿素的細菌？分離：獲得分解尿素的細菌的純培養(yǎng)物計數(shù)：測定分解尿素的細菌的數(shù)量注意：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。無菌水、系列梯度稀釋二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（二）微生物的選擇培養(yǎng)(1)選擇培養(yǎng)基的制備(2)土壤的取樣、稀釋(3)接種(4)培養(yǎng)、觀察菌落(5)計數(shù)(6)菌種鑒定1.獲得能分解尿素的細菌的純培養(yǎng)物的步驟(思路)？稀釋涂布平板法以尿素作為唯一氮源稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法酚紅指示劑恒溫培養(yǎng)箱葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml①原理：絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌。（1）選擇培養(yǎng)基的制備②配方：制備選擇培養(yǎng)基（尿素為唯一氮源）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基對照作用思考1：為什么還要制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基？①提供無機鹽；②調節(jié)培養(yǎng)基pH。細菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大部分分布在距地表3-8cm的土壤層。鏟去表層土，取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。取土樣時用的鐵鏟和取樣紙袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。（P19提示2）（2）土壤取樣與稀釋①土壤取樣②樣品的稀釋測細菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液。測放線菌：一般用103、104、105稀釋液。測真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液。不同微生物在土壤中含量不同，分離不同的微生物采用不同的稀釋度，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間適于計數(shù)的平板。BAC思考2:

在初次實驗中，對于稀釋的范圍沒有把握，怎樣做才能保證從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)？將稀釋范圍放寬一點。(即103~107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中1ⅹ101ⅹ1071ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL1mL1ⅹ105注意：取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的紙袋在使用前都要滅菌②將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。90mL無菌水1mL1）樣品的梯度稀釋步驟：6支試管，分別加入

9ml無菌水1克土壤≈1ml水第4支試管稀釋后，共稀釋的倍數(shù)是_______.105(3)稀釋涂布平板法操作過程④將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。⑤將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進行涂布。注意：多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒。2）涂布平板步驟1071061031021041mL1mL1mL1mL9mL無菌水1mL105移液槍注意：待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置培養(yǎng)。30-37°C，恒溫培養(yǎng)箱，1-2d一浸、二滴、三燒、四涂③取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。(3)稀釋涂布平板法操作過程2024/4/6原則要求：②同一稀釋度下，至少涂布3個平板(重復實驗)①確保菌落數(shù)在30—300之間①每個稀釋濃度下，都接種3個選擇培養(yǎng)基（此為實驗組，3為重復實驗）和接種1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用）；②設置2個不接種的(空白)平板：1個是不接種的選擇培養(yǎng)基，1個是不接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（都是為了檢驗培養(yǎng)基是否含有雜菌污染）。思考：下圖至少共要涂布、設置多少個平板？共涂布16個、設置18個平板(即16+2)注意事項：本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例如，在標記培養(yǎng)皿時應該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。(書本P19)2）涂布平板步驟注意：設置對照組，相同條件培養(yǎng)對照組：如何驗證是否有雜菌污染？如何驗證是否具有選擇（篩選）作用：設置接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（幾乎所有微生物都可以生長）未接種的選擇培養(yǎng)基、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基3.【設置對照】不接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)（空白平板）①判斷培養(yǎng)基是否被污染，設置

作對照。②判斷選擇培養(yǎng)基具有篩選作用，設置

作對照。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等量同種菌液

主要目的是排除實驗組中非測試因素（無關變量）對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度(書P22)。注意：設置對照組一同培養(yǎng)對照組：驗證是否有雜菌（未接種的選擇培養(yǎng)基、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）驗證是否具有選擇（篩選）作用：設置接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（幾乎所有微生物都可以生長）（4）微生物的培養(yǎng)與觀察觀察：每隔

統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取

時的記錄作為結果。防止

。結果：因培養(yǎng)時間不足而導致菌落數(shù)目遺漏24h菌落數(shù)目穩(wěn)定細菌一般在

的溫度下培養(yǎng)1～2d。培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。30～37℃（5）微生物的計數(shù)（下節(jié)詳細學習）本活動只是初步篩選了能分解尿素的細菌,對分離的菌種進行鑒定還需要借助生物化學的方法。可以查閱相關資料,進一步設計實驗來鑒定自己分離的菌種。（6）菌種鑒定（進一步探究）CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)基加酚紅指示劑,NH3呈堿性,PH升高,呈

紅

色?！b別培養(yǎng)基①液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況；②固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶。紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強1、選擇培養(yǎng)基的制備2、對土壤樣品進行稀釋3、接種：涂布平板操作4、培養(yǎng)并觀察菌落5、計數(shù)

土壤樣品中菌落數(shù)目6、菌種鑒定課本19頁探究實踐，總結實驗流程：方法平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理接種工具單菌落的獲得用途接種效果圖相同點通過連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散將菌液進行一系列的等比稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)，以得到單菌落。接種環(huán)涂布器從最后劃線區(qū)挑取稀釋度合適的整個平板上都可找到單菌落分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落②用于計數(shù)①都能分離純化菌種

②都在固體培養(yǎng)基上進行的平板劃線法vs稀釋涂布平板法閱讀課本P18，

思考下列問題：（3分鐘完成）1.稀釋涂布平板法的原理？2.稀釋涂布平板法的計數(shù)原則？3.為什么統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低？4.稀釋涂布平板法的計算公式？

5.顯微鏡直接計數(shù)的原理？

6.計數(shù)板的類型？

7.顯微鏡直接計數(shù)的缺點？1、稀釋涂布平板法2、顯微鏡直接計數(shù)法血細胞/細菌計數(shù)板——間接計數(shù)法——直接計數(shù)法（三）微生物的數(shù)量測定當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過計數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。①選擇30-300個菌落的平板進行計數(shù)；②每個稀釋度至少取3個平板取其平均值；③統(tǒng)計的結果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)；(2)原則(要求)因為當兩個或多個細胞連在一起時，繁殖后形成的只是一個菌落稀釋涂布平板法(該法也是接種法)（三）微生物的數(shù)量測定如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。（間接計數(shù)法，計活菌）(1)原理：(3)誤差分析（為什么？）①統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目少（為什么？）②恰當?shù)南♂尪取⑼坎际欠窬鶆蚴浅晒y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵。1、計數(shù)方法1：(4)計算公式：每克（每mL）樣品中的菌株數(shù)(個/克)（個/mL）=平均菌落數(shù)C÷涂布的稀釋液體積V×稀釋倍數(shù)M×（要計算的體積）（注：1克土壤≈1mL水）第4支試管稀釋后，共稀釋的倍數(shù)是_______.105三、微生物的數(shù)量測定M：代表稀釋倍數(shù)；C：代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；V：代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)間接計數(shù)法4號試管的結果表明每克土壤中的活菌數(shù)約為________個

方法1：稀釋涂布平板法③計算公式：每g樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M1.1×108110個÷0.1ml×105×1克實例分析1：甲同學做此實驗在稀釋倍數(shù)為105時，獲得3個平板，菌落數(shù)分別是85、90、95，涂布平板時均使用0.1ml菌液，試計算每10克土壤中可以分離尿素的細菌數(shù)目？（4）計算公式：每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M×要計算的體積(1克)C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。（85+90+95）/30.1ml×105×10克=9×108（個/10克)《課時》P7

9A

每克（每mL）樣品中的菌株數(shù)(個/克)（個/mL）=平均菌落數(shù)C÷涂布的稀釋液體積V×稀釋倍數(shù)M×（要計算的體積）。（注：1克土壤≈1mL水）平均90個×105（稀釋倍數(shù)）0.1ml(涂布液體積)共X個細菌10克(約10ml）＝【例2】某同學在涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2mL，在稀釋倍數(shù)為104的培養(yǎng)基上測得平板上的菌落數(shù)的平均值為66，那么每升樣品中活菌數(shù)是多少？（）A.

6.6×109

B.

3.3×109C.

6.6×108

D.33【解析】稀釋倍數(shù)為104，0.2mL稀釋液的菌落數(shù)的平均值為66，1升＝103mL

則每升樣品中菌落數(shù)就為66/0.2×104×103mL=3.3×109。B每克（每mL）樣品中的菌株數(shù)(個/克)（個/mL）=平均菌落數(shù)C÷涂布的稀釋液體積V×稀釋倍數(shù)M×（要計算的體積）。（注：1克土壤≈1mL水）每克（每mL）樣品中的菌株數(shù)(個/克)（個/mL）=平均菌落數(shù)C×稀釋倍數(shù)M

×（要計算的體積）÷涂布的稀釋液體積V。（注：1克土壤≈1mL水）常用、快速、直觀（優(yōu)點）不能區(qū)分死菌與活菌（缺點）；統(tǒng)計結果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。2、顯微鏡直接計數(shù)法—計數(shù)板計數(shù)法利用細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后計算一定體積樣品中微生物的數(shù)量。(2)特點(“染色排除法”，使用臺盼藍，死細胞會被染成藍色）（三）微生物的數(shù)量測定每毫升原液所含細菌數(shù)＝每小格平均細菌數(shù)×400小格×104×稀釋倍數(shù)×(計算體積)（104＝要計算的體積（1mL）/計數(shù)室體積0.1mm3）

細菌計數(shù)板血細胞計數(shù)板（真菌等細胞相對較大的）（細菌等細胞相對較小的）(5)比較：顯微鏡直接計數(shù)法：統(tǒng)計的是全部微生物的數(shù)量(活+死菌)

稀釋涂布平板法：只統(tǒng)計活菌的數(shù)量《金版》P26點拔提升3(1)原理：(4)計算公式（3誤差（得到的數(shù)值比實際偏大）1、顯微鏡直接計數(shù)法：方法用具：缺點：例子：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；酵母菌種群數(shù)量變化血細胞計數(shù)板顯微鏡二.統(tǒng)計菌落數(shù)目計數(shù)室1mm血細胞計數(shù)板:一種專門計數(shù)較大單細胞微生物的儀器計數(shù)室（1個大方格）的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為__mm3，合_________mL，(1mL=1cm3=1000mm3)。0.11×10-4計數(shù)室(1個大方格,體積0.1mm3）=25中格×16小方格

或

16中格×25小方格=400個小方格計數(shù)室1mm血細胞計數(shù)板:一種專門計數(shù)較大單細胞微生物的儀器計數(shù)室（1個大方格）的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為__mm3，合_________mL，(1mL=1cm3=1000mm3)。0.11×10-4計數(shù)室(1個大方格,體積0.1mm3）=25中格×16小方格

或

16中格×25小方格=400個小方格算一算1：如果五個中格（一個計數(shù)室共25個中格）中的酵母菌數(shù)分別有38、39、40、41、42個，用來計數(shù)的培養(yǎng)液稀釋了100倍，請估算1mL原始酵母菌培養(yǎng)液有酵母菌多少個？種群密度（個/mL）＝中方格中酵母菌數(shù)的平均值×25中格(或16)×104×稀釋倍數(shù)x要計算的體積（1mL）（104＝要計算的體積（1mL）/計數(shù)室體積0.1mm3）40×25×104×100=1×109（個/mL)小方格計數(shù)公式：種群密度（個/mL）＝每個小方格平均細胞個數(shù)×400小格×104×稀釋倍數(shù)x要計算的體積（1mL）。或者：

種群密度（個/mL）＝每個小方格平均細胞個數(shù)×400小格×要計算的體積（1mL）/0.1mm3（即

x104）

x稀釋倍數(shù)

算一算2：如果每一個小格平均有酵母菌5個，用來計數(shù)的培養(yǎng)液稀釋了100倍，請估算1mL原始酵母菌培養(yǎng)液有酵母菌多少個？5×400×104×100=2×109（個/mL)平均40個×25中格×100倍稀釋0.1mm3(計數(shù)室體積=10-4ml)＝共X個細胞1ml兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)。從對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計結果。1.甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230。2.乙同學在該濃度下涂布了A、B、C三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學以這三個平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計結果。

你認為這兩位同學的作法正確嗎？如果有問題，錯在哪？甲：沒有重復實驗（至少涂布3個平板）乙：其中一個平板計數(shù)結果與其他兩個相差太大，操作過程可能出現(xiàn)了錯誤。實例分析2：《金版》P26例5、例6、易錯提醒P289、10（四）結果分析與評價①②③3小結：實驗結果要有說服力，對照的設置是必不可少的。方案：將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染方案：配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并接種A同學所用的土樣，作為對照，以證明培養(yǎng)基是否有選擇作用。如何驗證?（3）土樣不同（1）培養(yǎng)基被污染（2）培養(yǎng)基混入了其他的含氮物質方案：由其他同學用與A同學相同土樣進行實驗資料3（四）結果分析與評價【課堂小結】一、選擇培養(yǎng)基的成分：分解尿素細菌的分離與計數(shù)尿素作為唯一的氮源。二、鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，pH升高，說明細菌能分解尿素。三、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）顯微鏡直接計數(shù)法（2）間接計數(shù)法（稀釋涂布平板計數(shù)法）①計算公式每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M×計算的體積②操作：設置重復組，選擇菌落數(shù)30～300的平板進行計數(shù)。（3）設置對照①證明培養(yǎng)基未被污染，用空白培養(yǎng)基作對照。②證明選擇培養(yǎng)基的篩選作用：用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對照。一、概念檢測1.研究人員用無機鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基從被石油污染的土壤中篩選出了一種石油降解菌。判斷下列相關表述是否正確。（1）這種培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基。（

）（2）利用這種石油降解菌可以降解石油。修復土壤。（

）（3）相對未被污染的土壤,從被石油污染的土壤中更容易分離到石油降解菌。（

）√√√2.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)時，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品中的活菌數(shù),原因是（

）A.菌落中的細菌數(shù)目是固定的B.平板上的一個菌落就是一個細菌C.通過此方法統(tǒng)計的菌落數(shù)與活菌的實際數(shù)目相同D.平板上的一個菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個活菌D二、拓展應用1.反芻（chú）動物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解尿素。請你設計一個實驗從瘤胃中分離出能夠分解尿素的微生物。反芻動物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準備選擇培養(yǎng)基，還應該參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設計。（1）現(xiàn)在要從土壤中分離纖維素分解菌,請你給出詳細的實驗方案。（2）你打算到什么環(huán)境中去尋找纖維素分解菌？為什么？（3）有同學說,可以把濾紙埋在土壤中,經過一段時間后,再從已腐爛的濾紙上篩選纖維素分解菌。請你評價這一做法。詳細方案：土壤取樣-選擇培養(yǎng)-梯度稀釋-將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上-挑選產生透明圈的菌落2.地球上的植物每年產生的纖維素超過70億噸，其中40%-60%能被土壤中某些微生物分解利用，這是因為它們能夠產生纖維素酶。對這些微生物的研究與應用，使人們能夠利用精桿等生產酒精，用纖維索酶處理服裝面料等。已知剛果紅是一種染料，它可以與