生物二輪復習專題拓展雙抗（雙特異性抗體）人-鼠嵌合抗體制備

雙抗（雙特異性抗體）

抗體的結構如圖所示，它有兩條H鏈和兩條L鏈組成。同一物種：恒定區(qū)（FC區(qū)）氨基酸序列恒定，不同抗體:可變區(qū)（Fab區(qū)）（結合抗原的區(qū)域）氨基酸序列有差異。天然的抗體：左右兩個可變區(qū)結構完全相同，只能結合相同的抗原。雙特異性抗體：通過一定技術手段得到，它的兩個可變區(qū)能結合不同的抗原。雙抗（雙特異性抗體）制備方法：1.化學偶聯(lián)法

2.（1）制備能產(chǎn)生雙抗的雙雜交瘤細胞（先制備兩種雜交瘤細胞，每種雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體與特定的抗原結合。然后再使二者融合，經(jīng)過篩選最終得到可以產(chǎn)生雙抗體（同時抗兩種抗原）的雙雜交瘤細胞。）

（2）通過雜交一雜交瘤細胞技術

（免疫的B細胞和雜交瘤細胞雜交技術）制備

3.基因工程制備科研人員制備能產(chǎn)生雙抗體的雙雜交瘤細胞的實驗過程是：先制備兩種雜交瘤細胞，每種雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體與抗原的結合情況如圖1、2所示。然后再使二者融合，經(jīng)過篩選最終得到可以產(chǎn)生雙抗體（同時抗α、β兩種抗原，圖3）的雙雜交瘤細胞?？贵w由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，重鏈和輕鏈均分為恒定區(qū)和可變區(qū)，兩條重鏈依賴于A1或B1進行組裝（A1與B1相同），重鏈與輕鏈的組裝依賴于恒定區(qū)A2、a或B2、b（a與b相同）。下列敘述錯誤的是（

）

A．制備雙特異性抗體時需將抗原α、β分別注射到小鼠體內(nèi)，

獲得免疫小鼠的脾臟細胞B．用解離液處理免疫小鼠的脾臟細胞獲得單細胞，再與小鼠

的骨髓瘤細胞融合后可獲得兩種雜交瘤細胞

C．可用PEG試劑或滅活病毒促進兩種雜交瘤細胞的融合，成功融合后經(jīng)過篩選可獲得雙雜交瘤細胞D．三種雜交瘤細胞的篩選均需要進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測E．雙雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體可與兩種抗原同時發(fā)生特異性結合，在腫瘤治療方面研制與腫瘤細胞和抗腫瘤藥物結合的雙特異性抗體，能特異性殺死腫瘤細胞F．圖3中的1、2、3、4、5、6可以分別是A2、B2、a、b、β、αB．解離液能固定并殺死細胞，故不能用解離液處理；應該用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，才能達到分散成單個細胞的目的，B錯誤；F．1、2、3、4、5、6分別對應A2、B2、a、b、a、β，D錯誤。

【答案】BF雙特異性單克隆抗體是指可同時與癌細胞和藥物結合的特異性抗體。下圖是科研人員通過雜交一雜交瘤細胞技術（免疫的B細胞和雜交瘤細胞雜交技術）生產(chǎn)能同時識別癌胚抗原和長春堿（一種抗癌藥物）的雙特異性單克隆抗體的部分過程。GC33是用于殺傷含GPC-3的肝癌細胞的單克隆抗體，但臨床使用效果不太理想。為提高治療效果，研究人員用新的技術構建了一種雙特異性抗體，該抗體可同時特異性識別肝癌細胞上的GPC-3以及T淋巴細胞表面的特殊蛋白質(zhì)CD3。圖1表示該雙特異性抗體的制備過程，圖2表示其在肝癌治療中的作用。（1）過程①的目的是___________，制備雙特異性單克隆抗體的過程中用到的技術有___________（至少答出兩條）。（2）過程②誘導融合的方法是___，過程②選用的骨髓瘤細胞______（填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。（3）經(jīng)過程③篩選得到的細胞還需轉(zhuǎn)移至多孔培養(yǎng)板中進行過程④，原因是______________。（4）請根據(jù)所學知識，用箭頭和文字在圖中方框內(nèi)補全獲取單克隆雜交一雜交瘤細胞的生產(chǎn)過程。_______。（5）獲得的單克隆雜交一雜交瘤細胞在體外條件下培養(yǎng)或_____，均可提取出大量的雙特異性單克隆抗體?？贵w的特異性體現(xiàn)在______,T細胞對癌細胞的攻擊屬于________免疫（6）結合圖1、圖2的信息和已有知識，簡述雙特異性抗體在肝癌治療中的作用__________。

（1）使小鼠產(chǎn)生能分泌識別癌胚抗原抗體的B淋巴細胞

動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)

（2）聚乙二醇（PEG）等

不能

（3）從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細胞不止一種類型，導致融合后有多種雜交瘤細胞（4)將獲得的B淋巴細胞與單克隆雜交瘤細胞融合→在選擇培養(yǎng)基上篩選出雜交-雜交瘤細胞→克隆化培養(yǎng)、抗體檢測篩選出單克隆的雜交-雜交瘤細胞

（5）注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖

一種抗體只能特異性識別一種抗原

細胞免疫（6）該雙特異性抗體可同時識別肝癌細胞膜上的GPC-3和T淋巴細胞膜上的CD3，從而將肝癌細胞和T淋巴細胞緊密接近（將T細胞定向帶到癌細胞所在的位置），有利于T淋巴細胞特異性地殺傷肝癌細胞，促使巨噬細胞吞噬肝癌細胞拓展：基因工程制備人-鼠嵌合抗體：抗體的結構可分為可變區(qū)和恒定區(qū)，其中可變區(qū)決定抗體的特異性，是抗體識別及結合抗原的部位。而研究發(fā)現(xiàn)，90%的人抗鼠抗體反應（HAMA反應）是針對抗體恒定區(qū)的。（HAMA反應是指鼠源性單克隆抗體對人體具有異種蛋白的抗原性，可引起人抗鼠抗體的產(chǎn)生。）科學家欲利用基因工程、蛋白質(zhì)工程、細胞工程、胚胎工程等技術生產(chǎn)不會發(fā)生HAMA反應的人鼠嵌合抗體。(1)以抗體的結構規(guī)律及其與生物功能的關系作為基礎，通過基因合成，對抗體進行改造，生產(chǎn)人鼠嵌合抗體，這屬于_______工程；為構建人鼠嵌合抗體基因表達載體，需從分泌鼠源單克隆抗體的雜交瘤細胞中提取______，逆轉(zhuǎn)錄得到______經(jīng)PCR擴增得到

，并分別與人抗體恒定區(qū)DNA序列拼接。(2)圖1所示表達載體中除標注出的結構外還必須有________，圖中①是________識別和結合的部位。(3)將重組質(zhì)粒導入

細胞后，在體外培養(yǎng)，培養(yǎng)時除需要提供適宜的營養(yǎng)條件外，還需要滿足的其他條件有_____（回答三個）。通過此培養(yǎng)獲得的培養(yǎng)物，需移植到_____的其他雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體。移植前往往將胚胎培養(yǎng)至______時期，需要對發(fā)育中的胚胎是否獲得了上述拼接好的基因進行檢測，檢測的操作是：取____細胞，提取DNA后可采用____方法進行檢測。（4）通過基因工程技術成功表達并組裝出有生物學活性的嵌合抗體，該嵌合抗體的優(yōu)點是________。鼠抗體可變區(qū)人抗體恒定區(qū)。（1）蛋白質(zhì)

mRNAcDNA鼠抗體可變區(qū)cDNA（2）復制原點RNA聚合酶