基于HPLC-ELSD的巴戟天含量測定方法研究

基于HPLC-ELSD的巴戟天含量測定方法研究【摘要】目的：通過HPLC-ELSD的巴戟天含量測定方法研究，以耐斯糖和蔗糖進(jìn)行含量測定，初步確定了對(duì)藥材巴戟天的質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)，使得得到一種相對(duì)較為快速、簡便、有效的測定方法。方法：應(yīng)用HPLC-ELSD，對(duì)巴戟天中耐斯糖和蔗糖進(jìn)行含量測定。結(jié)果：耐斯糖在19.9742μg/mL~59.9226μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程式為：y=41.873x-576.2，R2=0.9954，精密度和重復(fù)性RSD值均小于2%，樣品溶液12小時(shí)候內(nèi)穩(wěn)定性良好；蔗糖在18.0788μg/mL~54.2361μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程式為：y=51.166x-606.28，R2=0.9965，精密度和重復(fù)性RSD值均小于2%；樣品溶液12小時(shí)候內(nèi)基本穩(wěn)定，耐斯糖加樣回收率在97.15%~100.15%之間；蔗糖回收率在94.00%~98.85%之間。結(jié)論：該方法實(shí)驗(yàn)操作簡單，專屬性、準(zhǔn)確度、重復(fù)性及穩(wěn)定性良好，能夠初步確定巴戟天質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，具有一定參考價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法；蒸發(fā)光散射檢測器；巴戟天；含量測定；耐斯糖ContentDeterminationMethodStudyontheMorindaOfficinalisRadixBasedonHPLC-ELSD[Abstract]Objective:ThroughthemethodofHPLC-ELSDtodeterminethequalitycontrolstandardandestablishafast,simpleandaccuratemethod.Methods:Contentdeterminationwasperformedusinghigh-performanceliquidchromatography–evaporativelightscatteringdetectoronNystoseandSucroseofMorindaofficinalisRadix.Column:ECOSIL120-5-C18AQcolumn,mobilephase:methanolwatermixedsolution(3:97),flowrate:1.0mL/min,columntemperature:30℃,injectionvolume:10μL.Results:Welllinearintherangeof19.9742μg/mLto59.9226μg/mL,Thelinearequationis:y=41.873x-576.2,R2=0.9954,PrecisionandreproducibleRSDvalueswerelessthan2%.Thesamplesolutionhasgoodstabilityin12hours.Thesucrosewaslinearlycorrelatedwellintheconcentrationrangeof18.0788μg/mLto54.2361μg/mL,Thelinearequationis:y=51.166x-606.28,R2=0.9965,PrecisionandreproducibleRSDvalueswerelessthan2%,Thesamplesolutionwasbasicallystablewithin12hours,Therecoveryrateofthenicesugaradditionisbetween97.15%and100.15%;Sucroserecoveryratesrangedbetween94.00%and98.85%.Conclusion:Thismethodissimpleinoperation,hasgoodspecificity,accuracy,repeatabilityandstability,andcanpreliminarilydeterminethequalitystandardofserd,andhascertainreferencevalue.[Keywords]High-PerformanceLiquidChromatographyEvaporativeLightScatteringDetectorMorindaofficinalisRadixContentdeterminationNystose目錄TOC\o"1-3"\h\u1前言 前言巴戟天，為茜草科植物巴戟天MorindaofficinalisHow的干燥根。味甘、辛，性微溫，歸腎、肝經(jīng)，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效REF_Ref11564\r\h[1]。作為嶺南道地藥材的它，與檳榔、益智仁、砂仁三者一起享有四大南藥的稱號(hào)REF_Ref11656\r\h[2]。用于治療陽痿遺精，宮冷不孕，\t"/item/%E5%B7%B4%E6%88%9F%E5%A4%A9/_blank"月經(jīng)不調(diào)，少腹冷痛，風(fēng)濕痹痛，筋骨痿軟REF_Ref11564\r\h[1]。巴戟天含有糖類、蒽醌類成分、環(huán)烯醚萜苷類成分、氨基酸及微量元素等[3-6]。巴戟天中糖類的含量占比較高，主要是多糖以及寡糖，而且在巴戟天藥材中，耐斯糖以及蔗糖的含量相對(duì)較高，具有一定研究價(jià)值。2020年版中國藥典對(duì)于巴戟天中耐斯糖含量不得低于2%REF_Ref11564\r\h[1]，常將其作為巴戟天藥材的定性定量指標(biāo)。蔗糖作為寡二糖于糖類成分來說具有較為重要的意義，是現(xiàn)在社會(huì)人類日常生活不可缺少的一部分，當(dāng)然其含量的控制也是很有必要的；于藥材本身來說，它具備著不同于食用糖類的作用，它可以結(jié)合其他的化學(xué)成分以發(fā)揮中藥的藥理藥效。再者，中藥多成分多指標(biāo)的質(zhì)量控制勢在必行，所以耐斯糖以及蔗糖兩者相結(jié)合的方式作為巴戟天含量測定方法的研究具備一定研究意義。高效液相色譜法具有的高效性，高準(zhǔn)確度，高靈敏性的特性，是它較于傳統(tǒng)經(jīng)典氣相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的優(yōu)勢，使得其在應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究可以為實(shí)驗(yàn)減少分析的時(shí)間，減短實(shí)驗(yàn)所需的周期，進(jìn)一步提高工作的效率。高效液相色譜法（HPLC）在1960s就已經(jīng)被科學(xué)家們進(jìn)行較為深入的研究和發(fā)明，尤其是該分離分析技術(shù)從1971年起開始被廣泛地接受以及應(yīng)用，近幾十年來以磅礴之勢迅猛發(fā)展[7,8]。在社會(huì)的高速發(fā)展?fàn)顟B(tài)以及國家政策出臺(tái)的大力扶持下，中藥材包括中成藥成為當(dāng)今時(shí)代下及其備受關(guān)注的發(fā)展對(duì)象之一，有關(guān)中藥的研究開始了新一批的熱潮，中藥成分、相關(guān)生物效應(yīng)甚或新型、創(chuàng)新型藥物的研究成為研究中藥的重點(diǎn)內(nèi)容。但是由于中藥本身具有的化學(xué)成分較為復(fù)雜，各成分的結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制以及效應(yīng)等都大不相同，成分與成分之間的效應(yīng)或會(huì)對(duì)藥物本身的功能以及療效產(chǎn)生不可避免的影響，研究起來具有一定的挑戰(zhàn)性。1985年版《中國藥典》開始收載高效液相色譜法，見于藥品檢驗(yàn)，但當(dāng)時(shí)的高效液相色譜法僅用于小部分藥品的含量檢測,至2015年版《中國藥典》收載的用高效液相色譜法測定用于藥品的鑒別、檢查、含量測定的品種、數(shù)量都有大幅度的增加REF_Ref12110\r\h[9]。據(jù)2020年國家藥典，發(fā)現(xiàn)其中運(yùn)用高效液相色譜法運(yùn)用于中藥的占比較高，已經(jīng)達(dá)66%和72%REF_Ref12204\r\h[10]。根據(jù)光散射原理進(jìn)行檢測的高效液相色譜法串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測器法(EvaporativeLightScatteringDetection，ELSD)，因?yàn)槠洳灰蕾囉诖郎y物如紫外吸收、熒光吸收等化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及相對(duì)高的靈敏度，檢出限低，線性范圍廣，蒸發(fā)光散射器（ELSD）作為一種通用性較強(qiáng)的檢測器，對(duì)有質(zhì)量的物質(zhì)都能檢測,所以應(yīng)用于中藥含量測定等實(shí)驗(yàn)具有較為實(shí)用的價(jià)值REF_Ref12443\r\h[11]。高效液相色譜和蒸發(fā)光散射器相結(jié)合的先進(jìn)技術(shù)應(yīng)用在中藥上有一定的先進(jìn)性，通過其分離檢測出來的有效成分峰，協(xié)助指紋特征圖譜進(jìn)行有效的分析，或?qū)橹兴幊煞莸难芯?、找尋中藥材化學(xué)的特征以及食品藥品安全提供有價(jià)值的參考REF_Ref12551\r\h[12]。本實(shí)驗(yàn)選取耐斯糖和蔗糖作為巴戟天藥材的定性定量指標(biāo)，進(jìn)行巴戟天含量測定方法的研究，利用高效液相色譜法、蒸發(fā)光散射器檢測器進(jìn)行兩種寡糖含量的測定分析。該實(shí)驗(yàn)方法可以為巴戟天的進(jìn)一步開發(fā)利用提供可靠的提取純化工藝方案以及分析檢測手段，為巴戟天的質(zhì)量控制提供新途徑的同時(shí)也為巴戟天中藥確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及巴戟天中藥多指標(biāo)質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)參考。2儀器與材料2.1儀器表2-1主要儀器儀器型號(hào)/規(guī)格儀器廠家高效液相色譜儀RIGOLL-3000北京普源精電科技有限公司色譜柱ECOSIL120-5-C18AQ北京普源精電科技有限公司電熱恒溫水浴鍋DK-98-IIA雙列八孔天津市泰斯特儀器有限公司數(shù)控超聲波清洗器KQ5200DV型昆山市超聲儀器有限公司萬分之一天平ME204TE/02梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司百萬分之一天平T-1000寧波經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)漢獅儀器有限公司超純水系統(tǒng)Synergy廣州東銳科技有限公司2.2試劑表2-2試劑名稱級(jí)別廠家甲醇分析純賽孚瑞化邯鄲有限公司純化水超純水廣州東銳科技有限公司甲醇色譜純賽孚瑞化邯鄲有限公司2.3試藥表2-3試藥名稱批號(hào)含量廠家耐斯糖111891-20170492.2%中科華檢（北京）科技有限公司蔗糖111507-20210599.8%中科華檢（北京）科技有限公司巴戟天藥材S22302001—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司巴戟天藥材S22302002—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司巴戟天藥材S22302003—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司巴戟天藥材S22302004—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司巴戟天藥材S22302005—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司巴戟天藥材S22302006—馮了性（佛山）藥材飲片有限公司3方法與結(jié)果3.1色譜條件高效液相色譜色譜儀應(yīng)用的色譜條件如下，見表3-1。表3-1色譜條件色譜條件的選擇色譜柱ECOSIL120-5-C18AQ柱流動(dòng)相甲醇水混合溶液（3：97）流速1.0mL/min柱溫30℃進(jìn)樣量10μL檢測器漂移管溫度60℃檢測器霧化器溫度60℃氮?dú)鈮毫?.5b3.2樣品及對(duì)照品溶液的制備3.2.1樣品溶液的制備圖3-1樣品溶液制備流程圖3.2.2對(duì)照品溶液的制備依照實(shí)驗(yàn)稱量操作準(zhǔn)則，精密稱取耐斯糖以及蔗糖對(duì)照品適量，使用3%甲醇溶液制備得下列混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。見表3-2。表3-2混合對(duì)照品溶液混合對(duì)照品中含有對(duì)照品對(duì)照品濃度（mg/mL）耐斯糖0.1997蔗糖0.18083.3含量測定3.3.1色譜條件高效液相色譜色譜儀色譜條件見表3-3。表3-3色譜條件色譜條件的選擇色譜柱ECOSIL120-5-C18AQ柱流動(dòng)相甲醇水混合溶液（3：97）流速1.0mL/min柱溫30℃進(jìn)樣量10μL檢測器漂移管溫度60℃檢測器霧化器溫度60℃氮?dú)鈮毫?.5b3.3.2方法學(xué)驗(yàn)證系統(tǒng)適應(yīng)性考察取3.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液（含有耐斯糖0.1997mg/mL、蔗糖0.1808mg/mL）及樣品溶液，按3.3.1項(xiàng)下色譜條件分析，結(jié)果顯示樣品溶液中：耐斯糖的分離度為10.275，相對(duì)保留時(shí)間在7.88min；蔗糖的分離度為2.447，相對(duì)保留時(shí)間在4.66min?；旌蠈?duì)照品中：耐斯糖的分離度為10.653，相對(duì)保留時(shí)間在7.67min；蔗糖的分離度為2.511，相對(duì)保留時(shí)間在4.58min。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知運(yùn)用該方法，耐斯糖及蔗糖兩種成分的分離度以及響應(yīng)均良好，認(rèn)為該方法系統(tǒng)適應(yīng)性良好。見圖3-2(a)、(b)。圖3-2巴戟天含量測定系統(tǒng)適應(yīng)性考察(a)圖3-2巴戟天含量測定系統(tǒng)適應(yīng)性考察(b)線性關(guān)系考察取3.2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品儲(chǔ)備液（含有耐斯糖0.1997mg/mL、蔗糖0.1808mg/mL），按規(guī)范移液操作，精密移取各1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL混合對(duì)照品儲(chǔ)備液分別于10mL容量瓶中，加3%甲醇溶液至刻度，進(jìn)行顛倒充分混勻后得系列混合對(duì)照品溶液。按照3.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測定其中耐斯糖和蔗糖成分色譜峰的面積并記錄，利用已知溶液濃度以及耐斯糖和蔗糖的峰面積進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，求出耐斯糖以及蔗糖成分分別相對(duì)應(yīng)的回歸方程以及相關(guān)系數(shù)r。將測得的峰面積作為縱坐標(biāo)（Y），已知相對(duì)應(yīng)濃度的耐斯糖或蔗糖作為橫坐標(biāo)（X，μg/mL），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：耐斯糖的回歸方程為：y=41.873x-576.2，R2=0.9954；蔗糖的回歸方程為：y=51.166x-606.28，R2=0.9965。結(jié)果見表3-4、表3-5，圖3-3、圖3-4。表3-4巴戟天含量測定耐斯糖線性關(guān)系考察結(jié)果表序號(hào)濃度（μg/mL）峰面積119.9742310.372229.9613649.064339.94841051.635449.93551491.770559.92261979.966表3-5巴戟天含量測定蔗糖線性關(guān)系考察結(jié)果表序號(hào)濃度（μg/mL）峰面積118.0788365.531227.1182754.830336.15751203.097445.19691679.759554.23632215.622圖3-3巴戟天含量測定耐斯糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖圖3-4巴戟天含量測定蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖精密度試驗(yàn)取3.2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液（含有耐斯糖0.1997mg/mL、蔗糖0.1808mg/mL），按3.3.1項(xiàng)下色譜條件分別依次進(jìn)樣6次分析，記錄耐斯糖和蔗糖峰面積并計(jì)算峰面積RSD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：耐斯糖測定峰面積RSD值為1.95%；蔗糖測定峰面積RSD值為1.98%。耐斯糖以及蔗糖測定峰面積的RSD值均小于2%，表明該實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。結(jié)果見表3-6。表3-6巴戟天含量測定精密度試驗(yàn)結(jié)果表序號(hào)耐斯糖峰面積蔗糖峰面積11626.8921640.89821644.4731627.10031673.6481699.44941702.5451665.21051693.0471625.98161706.1931658.925RSD（%）1.951.9重復(fù)性試驗(yàn)取3.2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液（含有耐斯糖0.1997mg/mL、蔗糖0.1808mg/mL），按3.3.1項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣6次分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：測得耐斯糖含量RSD值為1.45%，測得蔗糖含量RSD值為1.54%，耐斯糖和蔗糖的含量RSD值均小于2%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示該實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表3-7。表3-7巴戟天含量測定重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表序號(hào)耐斯糖含量（μg/mL）蔗糖含量（μg/mL）152.613743.6456253.033543.6496353.730344.3945454.420343.6278554.193945.0637654.507544.9750RSD（%）1.45%1.54%穩(wěn)定性試驗(yàn)取3.2.1項(xiàng)下樣品溶液，按3.3.1項(xiàng)下色譜條件分別在0h、2h、4h、6h、8h、12h進(jìn)樣分析記錄峰面積，計(jì)算峰面積RSD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：測得耐斯糖峰面積RSD值為2.64%，測得蔗糖峰面積RSD值為2.91%，耐斯糖和蔗糖測定的峰面積RSD值均小于3%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在12小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果見表3-8。表3-8巴戟天含量測定穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表穩(wěn)定性（小時(shí)）耐斯糖峰面積蔗糖峰面積0315.297355.6122308.837354.2774303.990350.8686318.592341.0468297.235338.85512302.377330.270RSD（%）2.642.9加樣回收試驗(yàn)精密稱取已知耐斯糖和蔗糖含量的巴戟天粉末6份，每份0.25g，按1：1的比例加入混合對(duì)照品溶液（含耐斯糖0.1997mg/mL、蔗糖0.1808mg/mL的混合對(duì)照品溶液），按3.2.1項(xiàng)下制備方法進(jìn)行制備，在3.3.1色譜條件下進(jìn)行分析，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示：耐斯糖回收率分別為100%、98.96%、100.15%、97.15%、98.16%、99.32%，蔗糖回收率分別為97.04%、98.69%、95.66%、94.00%、98.85%、94.98%；可見耐斯糖成分加樣回收率在97.15%~100.15%之間，蔗糖回收率在94.00%~98.85%之間。符合相關(guān)規(guī)定。結(jié)果見表3-9，3-10。表3-9巴戟天含量測定耐斯糖加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表序號(hào)測的量（g）原有量（g）加樣量（g）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）10.08160.03630.045310098.961.1620.07390.03630.038098.9630.07060.03630.0342100.1540.07430.03630.039197.1550.07680.03630.041298.1660.06860.03630.03242899.32表3-10巴戟天含量測定蔗糖加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表序號(hào)測的量（g）原有量（g）加樣量（g）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）10.08280.05590.027697.0496.542.0620.081250.05590.025698.6930.080750.05590.025895.6640.08980.05590.035994.0050.08440.05590.028898.8560.080240.05590.025594.9方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)論系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果表示：該方法系統(tǒng)適應(yīng)性良好。線性關(guān)系考察結(jié)果表示：耐斯糖進(jìn)樣濃度在19.9742μg/mL~59.9226μg/mL范圍內(nèi)，測得的峰面積和已知相對(duì)應(yīng)濃度的耐斯糖關(guān)系線性良好；蔗糖進(jìn)樣濃度在18.0788μg/mL~54.2361μg/mL范圍內(nèi)，測得的峰面積和已知相對(duì)應(yīng)濃度的蔗糖關(guān)系線性良好。精密度試驗(yàn)結(jié)果表示：儀器精密度良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示：該方法的重復(fù)性良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表示：制得的樣品溶液12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表示：耐斯糖以及蔗糖回收率良好。3.3.3樣品含量測定取6批次巴戟天樣品，分別精密稱取0.5g，將其置于帶瓶塞的錐形瓶中，按照上述樣品制備方法進(jìn)行處理制備，用0.45um濾膜濾過，注入液相專用小瓶中。按3.3.1項(xiàng)下色譜條件，上HPLC—ELSD,進(jìn)行含量分析。含量結(jié)果顯示為：樣品中耐斯糖含量在9.12%~11.31%之間，蔗糖含量在12.64%~13.45%之間。結(jié)果見表3-11。表3-11巴戟天中耐斯糖、蔗糖含量測定結(jié)果表批次樣品中耐斯糖含量（%）樣品中蔗糖含量（%）S110.8812.64S211.3112.77S310.7113.29S412.2613.16S59.1212.97S611.3013.454討論4.1預(yù)實(shí)驗(yàn)前處理探究提取所需最佳方法，選用了超聲提取方法、回流方法、以及沸水浴方法，試驗(yàn)結(jié)果表明沸水浴方法提取得到的耐斯糖成分以及蔗糖成分在上述色譜條件下出峰較為完全且分離度良好、響應(yīng)高。試驗(yàn)不同濃度剃度的甲醇水溶液作為提取溶劑，以探究提取所需最佳濃度，設(shè)計(jì)包括3%甲醇溶液和9%的甲醇溶液，試驗(yàn)結(jié)果表明濃度為百分之三的甲醇溶液提取出的檢測成分峰出峰較好。試驗(yàn)設(shè)計(jì)不同提取時(shí)間對(duì)于藥材提取的影響，探究試驗(yàn)提取所需最佳時(shí)間，設(shè)計(jì)不同提取濃度對(duì)于試驗(yàn)結(jié)果的影響試驗(yàn)，設(shè)計(jì)10min、20min、30min、40min、50min的時(shí)間梯度對(duì)藥材進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明進(jìn)行20min和30min提取后，測得的峰面積、分離度等效果好，但是由于蒸發(fā)光本身具有的不穩(wěn)定性，30分鐘相對(duì)20分鐘來說更穩(wěn)定，所以30min提取時(shí)間為最佳提取時(shí)間。綜上所述，采用3%的甲醇溶液沸水浴提取30分鐘的方法可以使得巴戟天中蔗糖和耐斯糖的提取效率效果最好，采用高效液相-蒸發(fā)光散射器測定耐斯糖和蔗糖兩者的含量，該方法分析能力較強(qiáng)，時(shí)間較短，同時(shí)也可以減少分析的成本。4.2不足之處巴戟天含量測定方法研究不僅限于巴戟天寡糖，還有其他的成分如多糖、蒽醌、揮發(fā)性物質(zhì)、氨基酸、環(huán)烯醚萜苷類等成分。筆者能力有限，時(shí)間有限，沒有完成其他更多成分的含量測定研究，所以上述實(shí)驗(yàn)所表示的耐斯糖、蔗糖含量范圍等的確定僅參考巴戟天質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。加之蒸發(fā)光散射器不穩(wěn)定因素多，試驗(yàn)結(jié)果有時(shí)差異較大，而且容易受外界條件的影響，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行很多次試驗(yàn)，樣品本身也較少，較缺乏代表性，后續(xù)的研究理應(yīng)繼續(xù)。蔗糖成分容易水解，進(jìn)而發(fā)生糖的轉(zhuǎn)化，所以試驗(yàn)前處理時(shí)藥材的干燥處理需要進(jìn)行溫度的控制，在高于100℃的條件下，蔗糖及其容易水解成葡萄糖和果糖，因此藥材在進(jìn)行干燥時(shí)溫度不可過高，本實(shí)驗(yàn)選取的干燥溫度是60攝氏度。再者，含蔗糖的溶液在溫度高于108℃時(shí)會(huì)發(fā)生同樣的水解反應(yīng)，為保證試驗(yàn)的正常進(jìn)行，成分提取溫度使用100℃，這樣既能盡可能地減少實(shí)驗(yàn)提取所需要的時(shí)間以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間的浪費(fèi)，也能就較好地避免糖類成分發(fā)生水解反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)中不難發(fā)現(xiàn)，蔗糖的含量并不是特別穩(wěn)定的，猜測實(shí)驗(yàn)影響有：一是向上述所講那般，蔗糖發(fā)生水解反應(yīng)轉(zhuǎn)化成了其他糖類，而是蔗糖成分提取不夠完全。認(rèn)為水解的因素更大，因試劑制備的時(shí)間以及真正上機(jī)的時(shí)間相距有一定距離，測定含量的結(jié)果的確存在一定差異，解決方法可以是盡量在臨上機(jī)前完成配置，或?qū)⒅苽渌迷噭┲糜诒淅洳靥幚?。雖然存在一定問題，但是呈現(xiàn)出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果總體仍能顯示出蔗糖以及耐斯糖的含量。蒸發(fā)光散射器的響應(yīng)處于非線性模式居多，實(shí)驗(yàn)中對(duì)其進(jìn)行線性關(guān)系考察，實(shí)驗(yàn)過程中不難發(fā)現(xiàn)蒸發(fā)光散射器雖然比較新型先進(jìn)，對(duì)于有含量的物質(zhì)都能檢測，受外界影響較小，但是其本身具有相對(duì)不小的不穩(wěn)定性，故而想要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)具備足夠的普遍性，需要較為龐大的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐。嚴(yán)格意義上講，進(jìn)行含量測定時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)定的色譜條件對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果有相對(duì)較大的影響。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中，色譜柱變更，流動(dòng)相轉(zhuǎn)換，流動(dòng)相流速，柱溫，甚至載氣等都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成一定的影響，保持實(shí)驗(yàn)條件的相對(duì)穩(wěn)定也是一個(gè)相對(duì)重要的注意事項(xiàng)。由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間、實(shí)驗(yàn)條件的原因，巴戟天含量的分析尚未完全進(jìn)行完全，后續(xù)研究理應(yīng)繼續(xù)。5結(jié)論本文基于HPLC-ELSD，對(duì)巴戟天含量測定方法進(jìn)行研究，得到下述結(jié)論。巴戟天中耐斯糖的含量測定，通過方法學(xué)考察驗(yàn)證，結(jié)果表明：進(jìn)樣濃度在19.9742μg/mL~59.9226μg/mL濃度范圍內(nèi)測得的耐斯糖峰面積與已知的耐斯糖對(duì)照品濃度的線性關(guān)系良好，得線性方程式為：y=41.873x-576.2，R2=0.9954，精密度試驗(yàn)RSD值為1.95%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD值為1.45%，制得樣品溶液12小時(shí)候內(nèi)穩(wěn)定性良好，耐斯糖成分加樣回收率在97.15%~100.15%之間。巴戟天中蔗糖的含量測定，通過方法學(xué)考察驗(yàn)證，結(jié)果表明：進(jìn)樣濃度在18.0788μg/mL~54.2361μg/mL濃度范圍內(nèi)已知對(duì)照品中蔗糖濃度與測得的蔗糖峰面積呈良好的線性關(guān)系，得線性方程式為：y=51.166x-606.28，R2=0.9965，精密度試驗(yàn)RSD值為1.98%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD值為1.54%，制得樣品溶液12小時(shí)候內(nèi)基本穩(wěn)定，蔗糖回收率在94.00%~98.85%之間。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)于巴戟天中耐斯糖、蔗糖的含量測定，測得其中所含耐斯糖含量在9.12%~11.31%之間，所含蔗糖含量在12.64%~13.45%之間，得到結(jié)果良好。2020年版本國家藥典中規(guī)定的巴戟天中耐斯糖含量不少于2%，實(shí)驗(yàn)測得結(jié)果大于2%，測得蔗糖的含量同樣較高，說明本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法較為準(zhǔn)確，也能較完全地分離提取所需要的成分