用酶標(biāo)儀檢測食品及飼料中的三聚氰胺 酶標(biāo)儀操作規(guī)程

第第頁用酶標(biāo)儀檢測食品及飼料中的三聚氰胺酶標(biāo)儀操作規(guī)程適用：利用酶聯(lián)免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。檢測原理：酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測定。先將三聚氰胺酶適用：

利用酶聯(lián)免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

檢測原理：

酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進(jìn)行免疫測定。先將三聚氰胺酶標(biāo)記物，樣品萃取物及標(biāo)準(zhǔn)加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中全部沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。再用去離子水清洗結(jié)束后，每孔中加入清亮的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng)，依據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

設(shè)備及材料：

1、具有450nm的酶標(biāo)分析儀

2、8頭或12頭洗板機(jī)（選配）

3、三聚氰胺檢測試劑盒

4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙

5、蒸餾水或去離子水

6、20mMPBS：0.62gNaH2PO4—2H2O+5.73gNa2HPO4—12H2O+9gNaCl,蒸餾水定容至1000ml.

7、清洗液：0.62gNaH2PO4—2H2O+5.73gNa2HPO4—12H2O+9gNaCl,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml土溫20樣品

飼料前處理：（稀釋倍數(shù)：20）

1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；

2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；

3、4000轉(zhuǎn)離心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml20mMPBS中，混勻。

5、取150ul測定。

檢測：

1、先將三聚氰胺酶標(biāo)記物50ul，樣品150ul及標(biāo)準(zhǔn)150ul加入到已經(jīng)包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應(yīng)。

2、在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競爭結(jié)合微孔中的三聚氰胺抗體；

3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中全部沒有結(jié)合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標(biāo)記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗結(jié)束后，每孔中加入100ul清亮的底物溶液，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。

5、孵育30分鐘后加入100ul停止液STOP停止此反應(yīng)，依據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值

結(jié)果分析：

1、半定量的結(jié)果是由樣品的吸光率與標(biāo)準(zhǔn)的吸光率的簡單對比而來判定：樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度高，樣品的顏色比標(biāo)準(zhǔn)的顏色深則三聚氰胺的濃度比標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度低。

2、定量分析需要繪制以標(biāo)準(zhǔn)樣的吸光率為X軸,以標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度的半對數(shù)為Y軸的曲線圖。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣。吸光率的點(diǎn)畫成一直線,如此樣品的光吸取率可在線上找到,與此相對應(yīng)的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸取率。范圍應(yīng)比標(biāo)準(zhǔn)樣的最底范圍高,比最高范圍低,即可說明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特點(diǎn)：

本產(chǎn)品為酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）法，靈敏度高、檢測成本低，可適用于生產(chǎn)及檢驗(yàn)單位大批量快速篩查。

—專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺(tái),試驗(yàn)室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣揚(yáng)媒體。

相關(guān)熱詞：

等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場強(qiáng)儀萬能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

酶標(biāo)儀是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判定標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。

酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)討論、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。

目前國內(nèi)很多計(jì)生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項(xiàng)目，如：乙肝五項(xiàng)、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)接受目測方法，報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對比品的OD值2.5，通過目測無法判定標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。

國內(nèi)多家機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的緊要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并供應(yīng)酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時(shí)酶免檢測的項(xiàng)目往往是一些