流式細胞儀的原理介紹及技術(shù)交流

第第頁流式細胞儀的原理介紹及技術(shù)交流流式細胞儀的原理介紹流式細胞儀是進行流式細胞分析的儀器，集電子、計算機、激光、流體理論于一體，被譽為試驗室的“CT”。流式細胞術(shù)（FlowCytoMeter,FCM）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段；它可高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)，與傳統(tǒng)熒光鏡檢查相比；具有速度快、精度高、精準性好等優(yōu)點，成為當代zui先進的細胞定量分析技術(shù)。工作原理將待測細胞染色后制成單細胞懸液。用確定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成確定角度；這樣，鞘液就能夠包圍著樣品高速流動，構(gòu)成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號的接受方向與激光束垂直；經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分別，形成多個不同波長的熒光信號。這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度；經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過A/D轉(zhuǎn)換器，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號。計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理，將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上，液可以打印出來；還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析。檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達，其X軸為測量強度，Y軸為細胞數(shù)目。一般來說，流式細胞儀坐標軸的辨別率有512或1024通道數(shù)，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的辨別率而定。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖；也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。細胞的分選是通過分別含有單細胞的液滴而實現(xiàn)的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電后振動；使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時；