藥物分析黃酮類化合物整

黃酮類理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)結(jié)構(gòu)與分類生物活性檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測定概述提取、分離黃酮類06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第1頁黃酮類化合物廣泛分布于植物界中，而且生理活性各種多樣，引發(fā)了國內(nèi)外廣泛重視，研究進(jìn)展很快。黃酮類化合物大多含有顏色，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。第一節(jié)概述06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第2頁表黃酮類化合物存在植物編號(hào)植物種類蘆丁檢出部位拉丁名漢字名1Myricananacheval.矮楊梅葉2Fagopyrumesculenlom.蕎麥毛狀根、果實(shí)3Hoveniaacerbalindl.枳根葉4Euphorbiapukherrima.一品紅莖、葉5Saussureainvolucrata.新疆雪蓮花6CarthamustinctoriusFlowers.紅花花7BupleurumchinenseDC.北柴胡全草06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第3頁二、結(jié)構(gòu)分類一、基本結(jié)構(gòu)第二節(jié)結(jié)構(gòu)與分類06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第4頁一、基本結(jié)構(gòu)定義：

泛指兩個(gè)含有酚羥基苯環(huán)（A-與B-環(huán)）經(jīng)過中央三碳原子相互連接而成一系列化合物。

6C－3C－6C06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第5頁二、黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分類黃酮及黃酮醇類二氫黃酮與二氫黃酮醇查耳酮類異黃酮和二氫異黃酮類橙酮類雙黃酮類06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第6頁第三節(jié)、理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)一、性狀1二、旋光性2三、熒光3四、溶解性4五、酸堿性5六、顯色反應(yīng)606鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第7頁

一、性狀多為晶性固體，少數(shù)為無定形粉末。顏色：與分子中是否存在交叉共軛體系及助色團(tuán)類型、數(shù)目及取代位置相關(guān)。黃酮、黃酮醇及其苷類——灰黃~黃色查耳酮——黃~橙黃色二氫黃酮及醇、異黃酮——不顯色或微黃色06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第8頁二、旋光性（1）游離各種苷元母核中，除二氫黃酮（醇）、黃烷（醇）有旋光性外，其余無光學(xué)活性。（2、3位無雙鍵時(shí)，含有旋光性）（2）苷類含有糖分子，均含有旋光性，普通為左旋。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第9頁

三、熒光熒光

C3-OH在紫外光下有強(qiáng)烈

（亮黃色或亮綠色）。

C3-OH成苷后熒光減弱06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第10頁

四、溶解性黃酮苷元——難溶或不溶于H2O

易溶MeOH、EtOH等溶劑易溶稀堿液黃酮苷——易溶于水、MeOH、EtOH等溶劑（苷元引入—OH多，則水中溶解度大）06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第11頁

五、酸堿性

分子中多Ar-OH——顯酸性（可溶于堿性水溶液、吡啶等溶劑中）因?yàn)锳r-OH數(shù)目、位置不一樣，酸性強(qiáng)弱也不一樣酸性堿性

-吡喃酮環(huán)上1-位氧原子，因有未共用電子對——顯微弱堿性——可與強(qiáng)無機(jī)酸（H2SO4、HCl）等生成鹽。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第12頁六、顯色反應(yīng)1.鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)2.四氫硼鈉（鉀）反應(yīng)3.鋁鹽4.鉛鹽5.鋯鹽06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第13頁六、顯色反應(yīng)6.鎂鹽7.氯化鍶（SrCl2）8.三氯化鐵反應(yīng)9.硼酸顯色反應(yīng)10.堿性試劑顯色反應(yīng)06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第14頁第四節(jié)、生物活性Vp樣作用：蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高血壓及動(dòng)脈硬化輔助治療劑。

一、對心血管系統(tǒng)作用

二、抗肝臟毒作用

（+）-兒茶素(catergen)也可抗肝臟毒作用，治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引發(fā)中毒性肝損傷。三、抗炎

蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具抗炎作用。

四、抗菌及抗病毒作用

如木樨草素、黃芩苷、黃芩素五、解痙作用

異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣；06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第15頁六、雌性激素樣作用

大豆素(daidzein)等異黃酮含有雌性激素樣作用，可能與它們與己烯雌酚結(jié)構(gòu)類似。

七、去除人體自由基作用

黃酮類化合物多含有酚羥基，易氧化成醌類而提供氫離子，故有顯著抗氧特點(diǎn)。另外還有降血脂、血糖，抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗癌抗突變等作用。

第四節(jié)、生物活性06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第16頁第五節(jié)、檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測定一、紫外光譜（UV）二、核磁共振—1H-NMR三、核磁共振—13C-NMR四、質(zhì)譜（MS）06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第17頁（一）紫外光譜（UV）

黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中交叉共軛體系苯甲酰基系統(tǒng)桂皮?；到y(tǒng)

(benzoyl)(cinnamoyl)BandIIBandI220~280nm300~400nm06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第18頁

帶II(240-285nm)（苯甲酰系統(tǒng)）帶I(300-400nm)桂皮酰系統(tǒng)類型說明

250-285304-350黃酮類

-OH越多，帶I帶II越紅移

B環(huán)3’,4’有-OH基，帶II為雙峰（主峰伴肩峰）328-357黃酮醇類(3-OR)

352-385黃酮醇類(3-OH)

245-270270-295300-400異黃酮類二氫黃酮（醇）B環(huán)上有-OH,OCH3對帶I影響不大

220-270340-390或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮類查耳酮2’-OH使帶I紅移影響最大370-430(3-4個(gè)小峰)橙酮類

06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第19頁

1.A環(huán)質(zhì)子2.B環(huán)質(zhì)子

3.C環(huán)質(zhì)子4.糖端基碳上質(zhì)子

5.乙酰氧基上質(zhì)子

6.甲氧基上質(zhì)子（二）1H-NMR06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第20頁（二）1H-NMR黃酮、黃酮醇、異黃酮二氫黃酮、二氫黃酮醇1.A環(huán)質(zhì)子7-羥基黃酮類6.70~7.00d6.30~6.40d7.90~8.20d7.70~7.90d6.70~7.10dd6.40~6.50dd06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第21頁（三）13C-NMR1.骨架類型判斷2.取代圖式確實(shí)定方法3.氧糖苷中連接位置4.雙糖苷及低聚糖苷中苷鍵及糖連接次序13C-NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)分析中應(yīng)用06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第22頁（三）13C-NMR

1.骨架類型判斷依據(jù)中央三個(gè)碳信號(hào)位置、裂分等，推斷其骨架類型。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第23頁（四）MS

大多黃酮苷元在電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）中，可取得分子離子峰（基峰）。（除——極性強(qiáng)、難氣化及對熱不穩(wěn)定化合物可制備成甲基化或三甲基硅烷化衍生物）現(xiàn)在可應(yīng)用FD-MS（場解析電離）、FAB-MS（快速原子轟擊電離）、ESI-MS（電噴霧電離）等軟電離質(zhì)譜技術(shù)，可防止制備衍生物。質(zhì)譜在黃酮類結(jié)構(gòu)測定中應(yīng)用06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第24頁（四）MS路徑-II黃酮類化合物兩種基本裂解路徑路徑-I（RDA裂解）06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第25頁（四）MS黃酮類——路徑I或II——碎片深入減-CO——離子黃酮醇——路徑II（主要）——減-CO——離子

兩種基本裂解路徑是相互競爭，相互制約。路徑-I與路徑-II得到碎片離子豐度互成反比。即若一個(gè)路徑碎片離子豐度強(qiáng)，則另一個(gè)路徑碎片離子豐度就弱。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第26頁第六節(jié)、提取、分離方法——溶劑萃取方法——堿提酸沉方法——離子交換A極性C解離性B酸性D方法——炭粉吸附法(主要適合用于苷類成份精制)一、提取06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第27頁

一、提取1.溶劑萃取法06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第28頁

一、提取1.溶劑萃取法06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第29頁

一、提取2.堿提取酸沉淀法比如：蘆丁提取06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第30頁

一、提取3.離子交換樹脂法注意：應(yīng)用此法主要目標(biāo)是除雜質(zhì)。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第31頁

一、提取4.炭粉吸附法06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第32頁二、分離方法——吸附、分配色譜方法——pH梯度萃取方法——金屬鹽絡(luò)合A極性C特殊結(jié)構(gòu)B酸性06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第33頁

二、分離1.柱色譜法（1）硅膠柱色譜

出柱先后次序：

①若母核結(jié)構(gòu)相同，而-OH取代數(shù)目不一樣，則-OH多后出柱②易形成份子內(nèi)氫鍵-OH，其極性變小先出柱如：鄰二-OH>間二-OH（Rf值）③普通出柱次序：苷元>單糖苷>雙糖苷>多糖苷06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第34頁

二、分離1.柱色譜法（2）氧化鋁柱色譜

通常情況下，要求在分子結(jié)構(gòu)中無酸性基團(tuán)，或Ar-OH被甲基化。

（3）纖維粉柱色譜

其分離原理同紙層色譜。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第35頁二、分離1.柱色譜法（4）聚酰胺柱色譜

聚酰胺（Polyamide）是由酰胺聚合而成一類高分子物質(zhì)。商品名——綿綸、尼龍。原理：——?dú)滏I吸附學(xué)說聚酰胺分子內(nèi)有很多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌類、硝基化合物等形成氫鍵，因而對這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第36頁二、分離1.柱色譜法（4）聚酰胺柱色譜聚酰胺吸附物質(zhì)原理以下列圖：06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第37頁二、分離1.柱色譜法（5）葡聚糖凝膠柱色譜葡聚糖凝膠（Sephadexgel）用于黃酮類化合物分離，主要有兩種型號(hào)：

Sephadex-G型SephadexLH-20型（羥丙基葡聚糖凝膠）06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第38頁二、分離1.柱色譜法（5）葡聚糖凝膠柱色譜

作用機(jī)理：分離游離黃酮時(shí)——吸附作用

（取決于游離Ar-OH數(shù)目，

Ar-OH少則先出柱）分離黃酮苷是——分子篩起主導(dǎo)作用

（分子量大先出柱）06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第39頁二、分離2.pH梯度萃取法

適合用于酸性強(qiáng)弱不一樣黃酮苷元分離。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第40頁二、分離3.鉛鹽沉淀法

依據(jù)分子中一些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第41頁第七節(jié)、實(shí)例蘆丁！作用與用途1、抗炎作用：大鼠腹腔注射，對植入羊毛球發(fā)炎過程有顯著抑制作用。本品硫酸酯鈉(Sod.rutinsulfate)對大鼠熱浮腫有很強(qiáng)抗炎作用。

2、維生素P樣作用，含有維持血管抵抗力、降低其通透性、降低脆性等作用，對脂肪浸潤肝有祛脂作用，與谷胱甘酞適用祛脂效果更顯著。3、抗病毒作用：200μg/ml濃度時(shí)，對水皰性口炎病毒有最大抑制作用。

4、抑制醛糖還原酶作用：10-5M濃度時(shí)抑制率為95%。這作用有利于糖尿病型白內(nèi)障治療。

5、毒性：小鼠靜脈注射LD50950mg/kg。

6、臨床：用于防治腦溢血、高血壓、視網(wǎng)膜出血、紫瘢和急性出血性腎炎。治療慢性氣管炎，有效率84.8%和98%。本品衍生物三羥乙蕓香甙(troxerutin)，即維路通，臨床用于治療燒傷、關(guān)節(jié)炎及各種血管疾病，國外已經(jīng)有商品出售。國內(nèi)亦已研究成功，治腦血管病有效率87.8%，治視網(wǎng)膜水腫和出血有效率88%。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第42頁第七節(jié)、實(shí)例蘆?。?6鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第43頁第七節(jié)、實(shí)例【藥品名稱】銀杏葉片，依康寧【成

分】銀杏葉提取物【性

狀】本品為薄膜衣片，除去包衣后顯淺棕黃色至棕褐色，味微苦?！竟πе髦巍?/p>

活血化瘀通絡(luò)，用于瘀血阻絡(luò)引發(fā)胸痹心痛、中風(fēng)、半身不遂，舌強(qiáng)語謇；冠心病穩(wěn)定型心絞痛、腦梗死見上述證候者?！臼褂梅椒ㄓ昧俊?/p>

口服，一次2片，一日3次：或遵醫(yī)囑?！疽?guī)

格】

每片含總黃酮醇苷9.6mg，萜類內(nèi)酯2.4mg。【貯

藏】

密封?！景?/p>

裝】

鋁塑包裝，每板12片，每盒2板；每板12片，每盒3板。【有效期】

2年?！具m應(yīng)癥】活血化瘀通絡(luò)。用于瘀血阻絡(luò)引發(fā)胸痹心痛、中風(fēng)、半身不遂、舌強(qiáng)語謇；冠心病穩(wěn)定型心絞痛、腦梗死見上述證候者。銀杏葉片！06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第44頁第七節(jié)、實(shí)例【臨床應(yīng)用】

1.小兒呼吸道感染

2.急性菌痢

3.病毒性肝炎

4.癤疔、外癰、蜂窩組織炎、深部膿腫

5.急性胰腺炎黃芩！06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第45頁第七節(jié)、實(shí)例[物理性狀]：二水合物為黃色針狀結(jié)晶（稀乙醇），在95-97°C成為無水物，熔點(diǎn)314°C（分解）。1g溶于290ml無水乙醇，23ml沸乙醇，溶于冰醋酸，堿性水溶液呈黃色，幾乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。[植物起源]：殼斗科植物伊比利亞櫟Quercusiberica皮和葉，小檗科植物紅八角蓮Dysosmaveitchii(Hemsl.etWils.)Fu，金絲桃科植物紅旱蓮（湖南連翹）HypericumascyronL.全草，夾竹桃科植物紅麻ApocynumlancifoliumRus.葉。[作用與用途]：本品含有很好祛痰、止咳作用，并有一定平喘作用。另外還有降低血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、降低毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量等作用。用于治療慢性支氣管炎。對冠心病及高血壓患者也有輔助治療作用。小鼠口服LD50為160mg/kg。槲皮素！06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第46頁第七節(jié)、實(shí)例槲皮素！06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第47頁黃酮類化合物與DNA傳感器基于黃酮類化合物與DNA相互作DNA電化學(xué)傳感器研究胡冷芝

用電化學(xué)方法研究了槲皮素與鮭魚精DNA相互作用,確定了配合物與:DNA作用方式為靜電作用。以槲皮素為雜交指示劑,利用共價(jià)鍵正當(dāng)制備了DNA修飾玻碳電極并制成了DNA電化學(xué)傳感器,能有效識(shí)別與探針ssDNA互補(bǔ)ssDNA片斷,含有良好選擇性和靈敏性,檢測靶ssDNA線性范圍為4.90×10-8～2.43×10-7mol·L-1,檢測限為1.32×10-8mol·L-1。

用帶有羧基多壁碳納米管(MWCNTs-COOH)修飾玻碳電極,將5’端氨基修飾核苷酸經(jīng)過羧基共價(jià)固定在碳納米管上,電活性(2R-2H)Mn作為雜交指示劑,制備了一個(gè)新奇、靈敏DNA電化學(xué)傳感器。該傳感器檢測靶ssDNA線性范圍為1.60×10-9～4.80×10-8mol·L-1,檢測限為1.0×10-9mol·L-1。06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第48頁黃酮類化合物與DNA傳感器

經(jīng)過試驗(yàn)結(jié)果比較能夠得到槲皮素合鋪配合物與DNA相互作用能力大于槲皮素本身與DNA相互作用能力，即與稀土元素配合后，槲皮素藥效會(huì)更強(qiáng)。黃酮類化合物及其配合物與DNA相互作用研究卓琳

06鄭梅霞藥物分析黃酮類化合物整第49頁黃酮類化合物與DNA傳感器

槲皮素對抗壞血酸含有很好催化氧化效果。在pH4.0緩沖溶液中加入一定濃度抗壞血酸，會(huì)觀察到顯著催化現(xiàn)象，氧化峰逐步增大，還原峰逐步減小。在3.1×10-5