土壤脂肪酶（Solid-LipaseS-LPS）活性試劑盒說明書

第第頁土壤脂肪酶（Solid—Lipase，S—LPS）活性試劑盒說明書土壤脂肪酶（SolidLipase，SLPS）活性試劑盒說明書微量法100/96S注意：正式測定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測定。測定意義：LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。測定原理：LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。自備儀器和用品：研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。試劑構(gòu)成和配制：試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保管。試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保管。每次使用前用震蕩混勻器猛烈震蕩20min。試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保管（自備）。試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保管。標(biāo)準(zhǔn)品：液體10μL×1瓶，10mol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保管。臨用前加入3.168mL甲苯，充分溶解。樣本處理：建議稱取約0.1g土樣，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測。SLPS測定操作：1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)整波長到710nm，蒸餾水調(diào)零。2.試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min。3.在1.5mLEP管中依次加入下列試劑試劑名稱（μL）空白管測定管蒸餾水150樣本50試劑一300300試劑二10037℃振蕩反應(yīng)10min試劑三80080037℃振蕩反應(yīng)10min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液試劑名稱（μL）空白管測定管標(biāo)準(zhǔn)管上清液400400標(biāo)準(zhǔn)品400試劑四10010010037℃振蕩反應(yīng)5min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測定吸光值。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。SLPS活性計(jì)算公式：活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。SLPS（μmol/min/g土樣）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T=16×[（A測定管—A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管A空白管）]÷WC標(biāo)準(zhǔn)品：10mol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣