進出口危險化學品安全試驗方法 第11部分：種系突變試驗_第1頁
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進出口危險化學品安全試驗方法第11部分：種系突變試驗24試驗方法4.1試驗動物成年小鼠(體重25g~30g),或大鼠(體重180g～220g)。動物總數(shù)不少于30只，雌雄各半。試驗動物飼養(yǎng)條件應符合GB14924.1和GB14925有關規(guī)定。溶劑通常采用燕餾水，等滲鹽水、植物油、食用淀粉、羧甲基纖維素鈉等。如使用特殊溶劑或載體，應有參考資料說明其成分。4.3劑量分組應進行預試驗以選擇最高劑量，為避免出現(xiàn)假陰性結果應適當增大劑量范圖。如果受試樣品具有毒性，應在第一個采樣時間點設三個劑量，設置的劑量應包括從最大毒性至最小毒性或無毒性的范圍。第二次采樣時間點僅需設置最高劑量。按等比級數(shù)2向下設置中、低劑量組。5試驗步驟如果單次染毒劑量不小于2000mg/kg,未出現(xiàn)毒性效應，且根據(jù)資料預期受試物無遺傳毒性，則不需要進行其他染毒劑量的試驗。一般情況下染毒—次.或者為便于大容量給藥，也可分散劑量染毒，即同一日染毒兩次，其間隔時間不超過幾小時。高劑量組動物分為A,B兩個亞組·分兩次采集樣品，嚙齒類動物采樣時間一般為1.5個正常期中的間隔期，即A組于末次染毒后12h~18h采集樣品。B組于末次染毒后36h~42h采集樣品；中、低劑量組均于末次染毒后12h~18h采集樣品。如果采用多次染毒方式，只需在最后一次染毒后12h~5.1.3制備細胞混懸液用頸椎脫白法處死動物，迅速摘取一側睪丸，用TIM液沖去血污，置于小平皿中，去除白膜，將曲細精管剪成碎段，加入3ml.TIM液的反復吹打后，經(jīng)鋼網(wǎng)過濾到5ml.離心管中，以1500r/min離心5min,棄上清，加TIM被洗滌細胞2次，再加1.5mL的TIM液制成細胞混懸液。取細胞混懸液于潔凈玻片上滴片，每只動物制片兩張，靜置5min后，滴加Helly氏固定液數(shù)滴預固定10min,染缸中Helly氏液再固定1h,用70%乙醇沖洗幾次后，故到70%乙醇待染。將有細胞的玻片用蒸餾水沖洗幾次后，1%高碘酸浸泡10min,Schiff's液浸泡10min,自來水沖洗5min,蒸餾水沖洗2次，15%蘇木素染色5min,自來水沖流5mih,蒸餾水沖洗2次，用1%鹽酸酒精中分色70s,自來水浸泡10mim,蒸餾水沖洗2次，依次用50%、75%、80%、90%、95%、95%、100%、100%酒精脫水，酒精二甲苯透明，二甲苯透明，樹膠封片，鏡檢。6試驗結果——所有玻片，包括陽性對照和陰性對照，在鏡檢前要分別編號?！诘捅剁R下檢查制片質量，制片應全部染色體較集中，而各個

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