藥物殘留溶劑分析方法的建立與應用

藥物殘留溶劑分析方法的建立與應用內(nèi)容提要藥物殘留溶劑分析與控制頂空氣相色譜法及其在殘留溶劑測定中的應用現(xiàn)狀影響藥物殘留溶劑的有關因素溶劑化參數(shù)模型與色譜柱的選擇如何建立藥品質(zhì)量標準殘留溶劑檢測方法氣相色譜法常見的問題與解決方案第2頁,共74頁，2024年2月25日，星期天藥物殘留溶劑分析與控制各國藥典中殘留溶劑控制標準的沿革USP、BP、EP、JP、ChP.現(xiàn)行標準的比較殘留溶劑分析方法殘留溶劑分析方法的進展第3頁,共74頁，2024年2月25日，星期天各國藥典中殘留溶劑控制標準的沿革Usp第22版第三補充本（1990）開始收載<467>有機揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查，Usp第23版(1995)正式列入附錄中，規(guī)定了氯仿、苯、1，4-二氧六環(huán)、二氯甲烷、環(huán)氧乙烷和三氯乙烯6種有機溶劑的控制要求，采用3種氣相色譜法。BP于1993年版增補本（1996）首次增加殘留溶劑檢查項，規(guī)定了乙腈、氯仿、苯、1，4-二氧六環(huán)、二氯甲烷、吡啶和三氯乙烯7種有機溶劑的控制要求，檢測方法為靜態(tài)頂空毛細管柱氣相色譜，F(xiàn)ID為檢測器，采用系統(tǒng)A和系統(tǒng)B兩個系統(tǒng)進行測定。EP從第三版（1997）開始收載2.4.24殘留溶劑檢查法，其控制對象和檢測方法同BP(1993)增補本。ChP1995版在附錄中收載有機溶劑殘留量測定法，控制氯仿、苯、1，4-二氧六環(huán)、二氯甲烷、吡啶、三氯乙烯、甲苯和環(huán)氧乙烷等8種有機溶劑，采用填充柱氣相色譜法，直接進樣和頂空進樣兩種方式。第4頁,共74頁，2024年2月25日，星期天ICH制定的溶劑殘留指導原則藥品中的殘留溶劑-----在原料藥、輔料以及制劑生產(chǎn)中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機揮發(fā)性化合物。藥品中殘留溶劑的種類：69種分類：按照對人體和環(huán)境的危害程度分為4類第5頁,共74頁，2024年2月25日，星期天第一類溶劑應避免使用的溶劑，為人體致癌物、疑似的人體致癌物或能對環(huán)境造成公害的試劑第二類溶劑應限制使用溶劑，為能導致動物非遺傳毒性致癌或可能導致其他不可逆毒性反應的試劑第三類溶劑低毒性溶劑，為在藥物中以一般量存在時對人體無害的溶劑。殘留量一般不高于0.5%第四類溶劑沒有足夠毒性資料的溶劑，生產(chǎn)廠在使用時應提供這些溶劑在制劑中殘留水平的合理性論證報告第6頁,共74頁，2024年2月25日，星期天第一類溶劑溶劑名稱濃度限度（ppm）苯2四氯化碳41，2－二氯乙烷51，1-二氯乙烯81，1，1－三氯乙烷1500第二類溶劑溶劑名稱濃度限度（ppm）乙腈410氯苯360氯仿60環(huán)己烷38801，2－二氯乙烯1870二氯甲烷6001，2－二甲氧基乙烷100N,N-二甲基乙酰胺1090N,N-二甲基甲酰胺8801，4－二氧六環(huán)3802－乙氧基乙醇160乙二醇62甲酰胺220正己烷290甲醇30002－甲氧基乙醇50甲基丁基酮50甲基環(huán)己烷1180N-甲基吡咯烷酮530硝基甲烷50吡啶200四氫噻砜160四氫化萘100甲苯8901，1，2－三氯乙烯80二甲苯﹡2170四氫呋喃720第三類溶劑

5000ppm溶劑名稱溶劑名稱乙酸正庚烷丙酮乙酸異丁酯甲氧基苯乙酸異丙酯正丁醇乙酸甲酯仲丁醇3－甲基－1－丁醇乙酸丁酯丁酮叔丁基甲基醚甲基異丁基酮異丙基苯異丁醇二甲亞砜正戊烷乙醇正戊醇乙酸乙酯正丙醇乙醚異丙醇甲酸乙酯乙酸丙酯甲酸

第四類溶劑溶劑名稱溶劑名稱1，1－二乙氧基丙烷甲基異丙基酮1，1－二甲氧基甲烷甲基四氫呋喃2，2－二甲氧基丙烷石油醚異辛烷三氯乙酸異丙醚三氟乙酸第7頁,共74頁，2024年2月25日，星期天USP、BP、EP、JP、ChP.現(xiàn)行標準的比較Usp32中的<467>收載殘留溶劑，講述殘留溶劑的分類、限度的描述、分析過程、限度以及分析控制方法，分析方法上，將殘留溶劑一類和二類分成一組，三類單獨一組。其中一類和二類又分成水溶性的、水不溶性的和高沸點的三種，采用三種不同的分析方法；三類溶劑則采用干燥失重法。其他基本上同ICH的基本要求。BP中的殘留溶劑基本上同EP，分析方法采用兩種不同的分析體系，即分析一類溶劑采用方法A，二類采用方法B（方法A、B均為頂空進樣，程序升溫，毛細管柱，F(xiàn)ID)，供試品也分成三種類型：水溶性的、水不溶性的和高沸點的三種，其他基本上同ICH的基本要求。JP與ICH一致。ChP.（2010）與ChP.（2005）相比較，在沿用ChP.（2005）的基礎上作了如下幾處修訂：第8頁,共74頁，2024年2月25日，星期天1.對照品溶液的制備精密稱取各品種項下規(guī)定檢查的有機溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對照品溶液；如用水作溶劑，應先將待測有機溶劑溶解在50%DMSO或DMF溶液中，再用水逐步稀釋。2.頂空平衡溫度一般應低于溶解供試品所用溶劑的沸點10℃以下，能滿足檢測靈敏度即可；對于沸點過高的溶劑，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等，用頂空進樣測定的靈敏度不如直接進樣，一般不宜用頂空進樣方式測定。3.利用保留值定性是氣相色譜中常用的定性方法。色譜系統(tǒng)中載氣的流速、載氣的溫度和柱溫等的變化都會使保留值改變，從而影響定性結(jié)果。校正相對保留時間（RART）只受柱溫和固定相性質(zhì)的影響，以此作為定性分析參數(shù)較可靠。應用中通常選用甲烷測定色譜系統(tǒng)的死體積（t0):

第9頁,共74頁，2024年2月25日，星期天干燥失重法、熱重測定法紫外、紅外光譜法殘留溶劑測定方法

非專屬性多種溶劑混合只能得到所有殘留溶劑的總量水分也會干擾測定檢測靈敏度低,干擾因素多專屬性良好的分離能力高靈敏度核磁共振光譜法檢測靈敏度低氣相色譜法ICH及各國藥典推薦使用的方法殘留溶劑分析方法第10頁,共74頁，2024年2月25日，星期天動態(tài)頂空進樣方式直接進樣頂空進樣色譜柱填充柱毛細管柱檢測器FIDECD固相微萃取氣相色譜靜態(tài)頂空第11頁,共74頁，2024年2月25日，星期天三種氣相色譜法的優(yōu)缺點比較直接進樣氣相色譜法優(yōu)點：方法比較簡單、可靠，僅需要是自動進樣器，不需要其他裝置缺點：樣品本身及樣品中含有的不揮發(fā)性組分也會被注入到氣相色譜中，污染進樣口、色譜柱，縮短色譜柱使用壽命；樣品基質(zhì)同時被注入到氣相色譜中，在下一次進樣前必須使用較高的柱溫把這些物質(zhì)從色譜柱中趕出來，延長了整個分析過程的時間頂空（靜態(tài)頂空）優(yōu)點：簡便、干凈、快速、不需要使用大量的有機溶劑且易于實現(xiàn)儀器自動化，藥品本身不進入氣相色譜，只有易揮發(fā)性的殘留溶劑等雜質(zhì)進入氣相色譜進行分析缺點：靈敏度稍低，受多種因素影響（溶劑體系、基質(zhì)效應等）第12頁,共74頁，2024年2月25日，星期天頂空（動態(tài)頂空）用流動的氣體將樣品中的揮發(fā)性成分“吹掃”出來，再用一個捕集器吸附吹掃出來的物質(zhì)，然后經(jīng)熱解析將樣品送入氣相色譜儀進行分析優(yōu)點：靈敏度高，比靜態(tài)頂空至少高1000倍，分析過程中不需要等待氣體與樣品基質(zhì)之間的平衡缺點：樣品管較難清洗，重現(xiàn)性比靜態(tài)頂空低，儀器復雜，不便于推廣固相微萃取技術靈敏度高，已經(jīng)逐漸成為藥物中殘留溶劑分析的新選擇第13頁,共74頁，2024年2月25日，星期天殘留溶劑分析方法的新進展快速分離

Chen等用一根10mx0.1mmx0.4um的DB-624毛細管色譜柱，快速分離38中常用有機溶劑，分析時間不到4.9min。而用30mx0.32mmx1.8um的DB-624分析時間將達45min.Wittrig和Dorman等采用流量調(diào)節(jié)技術在一次色譜分析中實現(xiàn)36種殘留溶劑的分離，分析時間12min。

David等采用過低熱質(zhì)量（LTM)柱溫箱來實現(xiàn)快速分離?？焖俣ㄐ?/p>

Hu等利用雙通道并聯(lián)色譜系統(tǒng)：即利用兩根極性相反的SPB-1和HP-FFAP色譜柱，分別考察51種有機溶劑在等溫和程序升溫條件下的出峰順序，計算各有機溶劑相對參比溶劑丁酮的相對保留時間，以相對保留時間作為定性參數(shù)建立知識庫。進樣方法

Brault等介紹的全揮發(fā)技術。第14頁,共74頁，2024年2月25日，星期天頂空氣相色譜法及其在殘留溶劑測定中的應用現(xiàn)狀頂空氣相色譜法(headspacegaschromatography,HS-GC)是用氣體對液體或固體樣品中揮發(fā)性組分進行萃取的一種預處理方法。將含有揮發(fā)性組分的樣品置于密閉系統(tǒng)中，在一定溫度下使樣品中揮發(fā)性組分在氣-液或氣-固兩相甚至氣-液-固三相中的分配達到平衡，然后取凝聚相上端的氣體送入氣相色譜儀進行分析，即可間接測定樣品中的揮發(fā)性組分目前藥品管理部門和各國藥典推薦使用的檢測藥品中殘留溶劑的最適合技術為靜態(tài)頂空氣相色譜法第15頁,共74頁，2024年2月25日，星期天頂空氣相色譜法的基本原理V=VG+VS相比：β=VG/VS

在恒定溫度下，密閉系統(tǒng)中的氣液兩相達到平衡時，氣相中某揮發(fā)性組分的濃度為cG，其在液相中的濃度為cS，其原始濃度為c0，則分配系數(shù)K=cS/cG容器是密閉的，樣品不會逸出，則c0Vs=cGVG+cSVS=cGVG+KcGVS=cG(VG+KVS)c0=cG(VG/VS+K)=cG(K+β)cG＝c0/(K+β)第16頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

化合物的蒸汽壓pi0受其溫度影響,兩者為指數(shù)關系，可表示為以下公式：

而化合物的蒸汽壓與分配系數(shù)存在反比的關系：

所以化合物的分配系數(shù)與溫度存在如下關系：

第17頁,共74頁，2024年2月25日，星期天頂空氣相色譜法靈敏度的影響因素頂空靈敏度樣品溶液體積頂空平衡溫度鹽析效應溶劑體系

A∝cG＝c0/(K+β)物質(zhì)專屬性第18頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

溫度與相比的影響

cG＝c0/(K+β)頂空靈敏度是受K和β共同影響的K遠大于β,K+βK

頂空靈敏度只與K值有關：溫度越高，頂空靈敏度越高。在這種情況下，相比(樣品體積)實際上是沒有影響的，或者影響很小。由于K值對溫度變化很敏感，所以頂空溫度對靈敏度的影響很大

K小于β,K+ββ

頂空靈敏度由相比決定，分配系數(shù)沒有影響或是幾乎沒有影響。相比與溫度無關，所以頂空溫度對靈敏度幾乎沒有影響第19頁,共74頁，2024年2月25日，星期天示例：K40℃50℃60℃70℃80℃1乙醇13558205113282162丁酮139.510968.847.7353甲苯2.822.231.771.491.274正己烷0.140.0680.0430.0120.00755四氯乙烯1.481.281.270.780.87第20頁,共74頁，2024年2月25日，星期天樣品體積的改變對低分配系數(shù)的樣品影響較大，對于較高分配系數(shù)時的分析結(jié)果的影響是可以忽略的靈敏度樣品體積占頂空體積的百分比20%80%K=0.2110倍K=1.014倍K=2011.2倍K=25011.01倍溶液的體積第21頁,共74頁，2024年2月25日，星期天化合物的活性系數(shù)在一定條件下是可以改變的對于極性化合物的溶液，可以通過向樣品中加入較高濃度的無機鹽，從而增加化合物的活性系數(shù)，降低了分配系數(shù)，以提高頂空靈敏度，這種技術通常被稱為鹽析效應

鹽析對被分析物的作用是不同的，對于有活性氫的極性化合物的作用要強于非極性化合物加入的大量無機鹽同時也增加了液體樣品的體積，降低了相比β，從而提高了靈敏度鹽析效應的影響第22頁,共74頁，2024年2月25日，星期天鹽析效應的局限

鹽析效應僅對極性化合物起作用在高濃度時才有作用（對于ppb級的鹵代烴的溶液，無機鹽濃度低于5％對于色譜峰面積幾乎都沒有什么影響）我們不可能預測鹽析效應對不同分析物的影響以及不同分析物的線性范圍。所以這個技術在使用時要謹慎，在用作定量分析之前對其作用要進行考察第23頁,共74頁，2024年2月25日，星期天很多有機化合物在有機溶劑中的溶解度要大于在水中的溶解度，它們的分配系數(shù)在有機溶劑中比較大，如果在能與水混溶的有機溶劑作為溶劑的溶液中加入水，那么化合物的溶解度降低，分配系數(shù)隨之降低，頂空靈敏度就會增加在使用這個方法時要保證被分析物仍然是可以溶解在這個溶劑—水體系中的溶劑體系第24頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

首先應用于分析聚合物中殘留的2-乙基己基丙烯酸脂（EHA）二甲基乙酰胺為溶劑2ml水5ml靈敏度增加600倍示例第25頁,共74頁，2024年2月25日，星期天1.共出峰干擾

示例：吡柔比星中正己烷殘留量的測定色譜柱方法正己烷含量DB-624內(nèi)標法(正戊烷）5%SPB-1內(nèi)標法（正丙醇）0.6%當有機溶劑殘留量超出限度規(guī)定時，通常需要對該樣品進行共出峰干擾的考察影響藥物殘留溶劑的有關因素第26頁,共74頁，2024年2月25日，星期天共出峰的干擾在同一色譜條件下具有相同保留值的不同物質(zhì)－共出峰物質(zhì)解決的辦法－兩個不同的物質(zhì)在性能不同的兩支或多支色譜柱上具有完全相同保留值的概率很小，因此用兩支不同性能的色譜柱可以排除共出峰干擾

規(guī)則1：對殘留溶劑測定不符合規(guī)定的樣品，采用極性不同的色譜系統(tǒng)進行驗證，可有效地排除共出峰的干擾。第27頁,共74頁，2024年2月25日，星期天2.熱降解干擾在頂空平衡的過程中，對于熱不穩(wěn)定的樣品會發(fā)生熱降解，如果降解產(chǎn)物恰好是某種有機溶劑，將導致把降解產(chǎn)物當作目標殘留溶劑的錯誤測定結(jié)果頂空氣相色譜法測定藥品殘留溶劑時必須注意藥品的熱穩(wěn)定性第28頁,共74頁，2024年2月25日，星期天示例：含有甲氧基結(jié)構(gòu)藥品中甲醇殘留量的測定頭孢西丁鈉、頭孢美唑、氟氧頭孢、利福平取上述藥品約0.2g，置20mL頂空瓶，加水2.0mL溶解，頂空溫度分別為70℃和120℃，平衡時間30min頂空溫度甲醇的峰面積頭孢西丁頭孢美唑氟氧頭孢利福平70℃21.7815.526.122.7120℃1100.451309.42667.4965.2

含甲氧基的藥品用頂空氣相色譜法測定殘留溶劑時不宜使用100℃以上的頂空溫度，使用70℃的頂空溫度比較合適第29頁,共74頁，2024年2月25日，星期天示例：頭孢泊肟酯的熱降解反應峰號溶劑峰保留時間(min)溶劑峰面積80℃頂空100℃頂空120℃頂空15.5（甲醇）230.6566.31256.026.7338.2317.3298.639.03039.82943.32917.549.7（異丙醇）84.5288.0928.4510.98852.48947.19026.9612.06539.26774.96931.3NSHHOCH2OCH3COOCHOCCH3OCH(CH3)2CONHCNOCH3SNH2NO第30頁,共74頁，2024年2月25日，星期天根據(jù)分子熱裂解規(guī)律并結(jié)合GC-MS、GC-IR的確證分析，確證樣品分子在較高頂空溫度下確實可以發(fā)生熱裂解產(chǎn)生甲醇和異丙醇頂空溫度峰面積含量

甲醇異丙醇甲醇異丙醇80℃222.275.60.16%0.03%60℃198.362.70.16%0.04%規(guī)則2：分子結(jié)構(gòu)中有烷氧基的藥品頂空過程中可能熱降解產(chǎn)生相應的醇規(guī)則3：為防止烷氧基在頂空過程中的熱降解，頂空溫度通常不應超過70℃第31頁,共74頁，2024年2月25日，星期天考察藥品是否在頂空條件下發(fā)生熱降解方法：分別用較低和較高的頂空溫度分析樣品，比較色譜圖及測定結(jié)果。如果較高頂空溫度下有機溶劑的檢出量明顯增高，所得色譜峰數(shù)目增多，則表明藥品在較高頂空溫度下發(fā)生熱降解，應使用較低的頂空溫度測定該藥品中殘留溶劑當需要確定某藥品未在頂空條件下降解產(chǎn)生干擾某種殘留溶劑測定的物質(zhì)時，可以用已知不含有該殘留溶劑的同種藥品作為對照藥品，在相同的條件下測定。如果在所用的頂空條件下對照藥品未檢出該種殘留溶劑，則表明藥品在此頂空條件下不會產(chǎn)生干擾該種殘留溶劑測定的物質(zhì)規(guī)則4：改變頂空溫度可以判斷頂空條件下樣品是否可能產(chǎn)生熱降解干擾。規(guī)則5：利用不含殘留溶解的對照樣品，可以確證樣品在頂空條件下是否會產(chǎn)生熱降解干擾物。第32頁,共74頁，2024年2月25日，星期天3.基質(zhì)效應的影響基質(zhì)效應—頂空分析時，由于對照品溶液和供試品溶液的組成不同，使待測揮發(fā)性組分在氣液兩相間的分配系數(shù)不同而引起的定量誤差減小基質(zhì)效應影響的方法—標準加入法

規(guī)則6：定量方式的選擇—藥物中殘留溶劑的測定通常屬于微量或痕量分析，定量時通常不采用外標法，而采用定量精度更高的內(nèi)標法或標準加入法。規(guī)則7：當內(nèi)標法與標準法結(jié)果偏差約10％時，可以認為方法存在明顯的基質(zhì)效應，應以標準加入法的結(jié)果為準第33頁,共74頁，2024年2月25日，星期天4.藥品溶解性及溶劑介質(zhì)的影響1、溶劑介質(zhì)選擇的一般原則：水

經(jīng)濟、無毒、對FID無響應1無機酸或堿溶液

注意：含有酯類結(jié)構(gòu)的或分析酯類溶劑不宜采用酸或堿溶液2有機溶劑

應選擇高沸點的有機溶劑3當藥物只能溶于有機溶劑時應選擇高沸點的有機溶劑，如DMF,DMA或DMSO，當藥品中待測殘留溶劑是DMF或DMA時，則需要用一種特殊的溶劑----1,3二甲基-2-咪唑啉酮（DMI)來溶解藥品。規(guī)則8：溶解介質(zhì)不應導致供試品或待測殘留溶劑在頂空條件下迅速發(fā)生化學反應，并影響測定結(jié)果的正確性。規(guī)則9：對含有酯類結(jié)構(gòu)的藥物或分析酯類溶劑時，通常不宜采用酸或堿溶液為溶解介質(zhì)。第34頁,共74頁，2024年2月25日，星期天2、藥品溶解性對其中殘留溶劑測定的影響藥品溶劑介質(zhì)藥品的溶解性殘留溶劑殘留量(％）RSD(%)頭孢氨芐水不溶甲醇0.3854.40.5mol/LNaOH溶甲醇0.4271.9頭孢泊肟酯水不溶丙酮0.001673.0DMF溶丙酮0.00354.1水不溶乙酸乙酯0.02220.3DMF溶乙酸乙酯0.0432.6

選擇合適的溶劑介質(zhì)溶解藥品對殘留量測定結(jié)果有重要影響，應選擇能使藥品完全溶解的溶劑，否則測定結(jié)果將偏低，且測定精密度變差第35頁,共74頁，2024年2月25日，星期天待測溶劑的溶解性對測定的影響

藥品中殘留溶劑的溶解性通常不是影響其殘留量測定結(jié)果的主要因素，但不正確的對照品溶液制備方法可能導致實驗誤差。對不能與溶劑溶介質(zhì)互溶的有機溶劑，采用助溶劑幫助其迅速在溶解介質(zhì)中分散是正確的對照品溶液制備方法。第36頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

溶劑介質(zhì)對測定結(jié)果的影響

在選擇溶解藥品的溶劑時，并不是所有能使藥品溶解的溶劑都適于用作頂空測定時的溶劑。評價所用的溶劑介質(zhì)是否適用于測定該藥品的殘留溶劑，應該用回收率實驗考察方法的準確性。當回收率在可接受范圍時（80%~120%），表明方法的準確性較好，此時標準加入法可以獲得比內(nèi)標法更準確的測定結(jié)果。如果方法的回收率太差，則標準加入法也不可能得到準確結(jié)果。（標準加入法能夠消除基質(zhì)效應的前提是向樣品中加入待測組分的對照品，不會顯著改變各相間的熱力學性質(zhì)，即加入對照品前后待測組分的分配系數(shù)K幾乎恒定）。如果相同濃度的內(nèi)標在對照品溶液和供試品溶液中的峰面積變化超出了實驗操作誤差所可能引起的改變，則說明在此溶液中藥物分子間及與有機溶劑分子間可能存在某種結(jié)合與解離，不宜用這種溶劑介質(zhì)溶解藥品測定其中的殘留溶劑。

第37頁,共74頁，2024年2月25日，星期天規(guī)則9：當回收率在可接受范圍時（80%~120%），用標準加入法可以獲得比內(nèi)標法更準確的測定結(jié)果；反之，如果方法的回收率太差，則標準加入法也不可能得到準確結(jié)果。規(guī)則10：方法建立后應該用回收率實驗考察方法的準確性，當方法的回收率超出80%~120%時，提示溶解介質(zhì)不宜作為該藥品殘留溶劑測定的溶劑，應改換其他介質(zhì)重新實驗。

第38頁,共74頁，2024年2月25日，星期天溶劑化參數(shù)模型與色譜柱的選擇

溶劑化參數(shù)模型是描述中性分子在色譜系統(tǒng)中達到平衡分離時，分子間相互作用對保留值的影響的有力工具。這一過程的自由能被分為以下幾部分：形成空穴、建立分子間的相互作用（包括色散力、孤對電子、偶極類型和氫鍵）。這些相互作用力的貢獻可以用固定相的一系列系統(tǒng)常數(shù)來表示。溶劑化參數(shù)模型將溶質(zhì)從氣相溶解到固定相的過程分為3個階段：

1.在固定相中形成一定大小的空穴

2.孔穴周圍的溶劑分子的重新排列

3.溶劑進入孔穴

溶劑化參數(shù)模型介紹

第39頁,共74頁，2024年2月25日，星期天溶質(zhì)在固定相上的保留值可用Abraham公式表示

SP是與自由能相關的溶質(zhì)特性，如分配系數(shù)、保留因子、相對調(diào)整保留時間（RART)或者相對保留指數(shù)值；R2、、、、是描述溶質(zhì)性能的參數(shù)，R2是溶質(zhì)修正的摩爾折光指數(shù)，是溶質(zhì)的偶極，是溶質(zhì)的酸性氫鍵（給質(zhì)子性），是溶質(zhì)的鍵性氫鍵（受質(zhì)子性），是25℃時溶質(zhì)在正十六烷烴上的保留值。而式中的c、r、s、a、b、l是表征色譜柱固定相保留能力的常數(shù)，每種固定相有特定值。c為常數(shù)，r為溶劑與n-電子對及π–電子對作用的常數(shù)，s表示溶劑參與靜電和誘導作用能力的常數(shù)，a表示溶劑參與鍵性氫鍵作用的常數(shù)，b為溶劑參與酸性氫鍵作用的常數(shù)，l則是溶劑空穴形成和溶劑-溶劑間色散力大小的常數(shù)，從色譜角度他表示分離同系物能力的大小。第40頁,共74頁，2024年2月25日，星期天有機溶劑與不同固定相的相互作用關系

1.有機溶劑性能參數(shù)分類

根據(jù)溶劑化參數(shù)模型，以有機溶劑的5個性能參數(shù)為指標，利用主成分分析法對有機溶劑進行分類：第一組：醇類第二組：烷烴、酯和酮類第三組：含氯化合物不同固定相的溶劑化參數(shù)模型有機溶劑的RART與其性能參數(shù)的關系第41頁,共74頁，2024年2月25日，星期天第一組醇類化合物的值明顯高于第二組和第三組化合物，激情間可作為醇類于其他化合物的主要依據(jù)；第三組含氯化合物的R2值明顯高于第一組和第二組化合物，可作為分離含氯化合物于其他化合物的主要依據(jù)。三組有機溶劑性能參數(shù)的比較第42頁,共74頁，2024年2月25日，星期天2.不同固定相系統(tǒng)常數(shù)的比較從溶劑化參數(shù)模型中不同色譜柱的系統(tǒng)常數(shù)表可見，HP-5和HP-35色譜柱（固定相為二甲聚硅氧烷中加入二苯基），隨著固定相中二苯基比例的增加，r、s和a之逐漸增大，l值則基本不變。DB-624和AT-225柱（固定相為二甲聚硅氧烷中加入氰基丙基苯基）的選擇型與HP-5和HP-35不同，DB-624與HP-5相比，r、s值高于HP-5；AT-225柱中氰基丙基苯基的比例增加到50%時，r、s值明顯增大，l值則降低。ZB-WAX柱的固定相為100%聚乙二醇，r、s和和a是影響溶質(zhì)于其相互作用的主要因素，l值則降低SPB-1色譜柱。

第43頁,共74頁，2024年2月25日，星期天3.固定相系統(tǒng)常數(shù)與有機溶劑的分離第一組醇類化合物與其他化合物的分離可以通過增加值來達到分離，因此可以選擇a值較大的色譜柱,如100%聚乙二醇為固定相的色譜柱；對于組內(nèi)不同的醇類化合物，其差別主要體現(xiàn)在上，可以通過改變了值達到分離，因此選擇l值較大的色譜柱較為有利。第三組含氯化合物與其他化合物的分離可以通過增加rR2值來達到分離，可以選擇r值較大的極性色譜柱。第二組化合物主要包括烷烴、酯類和酮，影響烷烴、酯類和酮保留質(zhì)的因素主要為，適合在非極性和中等極性的色譜柱上分離。第44頁,共74頁，2024年2月25日，星期天藥品質(zhì)量標準殘留溶劑檢測方法的建立一確定藥品中所涉及的殘留溶劑種類二建立檢測方法三方法的驗證第45頁,共74頁，2024年2月25日，星期天一確定藥品中所涉及的殘留溶劑種類1

根據(jù)“藥品殘留溶劑測定知識庫”確定樣品中實際存在的殘留溶劑種類0.1g/mL非極性色譜系統(tǒng)SPB-1極性色譜系統(tǒng)HP-INNOWAX程序升溫計算揮發(fā)性成分RART程序升溫計算揮發(fā)性成分RART與知識庫中數(shù)據(jù)比較比較確定殘留種類確定殘留種類兩個色譜系統(tǒng)中均出現(xiàn)的有機溶劑即可初步判定為藥品中可能存在的殘留溶劑與知識庫中數(shù)據(jù)第46頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

2在等溫色譜系統(tǒng)中進一步判斷產(chǎn)品中可能使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾選擇適當?shù)牡葴厣V系統(tǒng)和色譜條件，將供試品中測得的色譜峰的保留時間與相應對照品的保留時間比較，并通過標準加入法進一步證明初篩結(jié)果的正確性。對一些一類溶劑或產(chǎn)品工藝中未提及的溶劑，可用氣質(zhì)或氣紅進一步確證在等溫條件下，將樣品濃度提高至0.5g/mL，進一步考察樣品中可能存在的其它微量殘留溶劑，以排除可能的干擾作用第47頁,共74頁，2024年2月25日，星期天3.結(jié)合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標準中應控制的殘留溶劑雖然樣品實際測定中不一定能檢測到工藝中提及的諸多有機溶劑，但藥品質(zhì)量標準中殘留溶劑檢查法應能檢測到樣品中可能存在的所有殘留溶劑，故將生產(chǎn)工藝中ICH規(guī)定的應控制的溶劑及產(chǎn)品中實際存在的溶劑均應作為檢測對象第48頁,共74頁，2024年2月25日，星期天二建立檢測方法

初步測定方法的選擇藥品結(jié)構(gòu)頂空條件溶劑所確定的檢測對象色譜系統(tǒng)內(nèi)標初步選擇的測定方法

測定方法的考察與優(yōu)化通過對照品溶液，內(nèi)標進行考察能達到分離度要求不能達到分離度要求適合條件通過供試品溶液，內(nèi)標進行考察不能達到分離度要求適合條件能達到分離度要求最佳測定方案

不干擾被測溶劑的測定，不應與溶劑具有較強的相互作用第49頁,共74頁，2024年2月25日，星期天三方法的驗證準確性（回收率）---回收率可接受范圍一般為80％～120％；當方法的回收率超出此范圍時，提示溶質(zhì)與溶解介質(zhì)間存在較強的相互作用，該溶劑不宜作為檢測該藥品殘留溶劑的溶劑，應改換其它介質(zhì)重新實驗重復性---主要是日間重復性，至少應提供3天以上的數(shù)據(jù)最低檢測限和最低定量限線性---范圍不必很寬，關鍵是要提供限度附近的線性數(shù)據(jù)第50頁,共74頁，2024年2月25日，星期天示例：建立藥品質(zhì)量標準中鹽酸頭孢他美酯殘留溶劑檢查方法的研究收集樣品：7個企業(yè)，19批樣品需建立一個包括7個企業(yè)樣品的統(tǒng)一的殘留溶劑測定方法第51頁,共74頁，2024年2月25日，星期天1、確定藥品中所涉及的殘留溶劑的種類初篩0.1g/mL非極性色譜系統(tǒng)SPB-1極性色譜系統(tǒng)HP-INNOWAX程序升溫計算揮發(fā)性成分RART程序升溫計算揮發(fā)性成分RART比較比較確定殘留種類確定殘留種類初篩結(jié)果：7個企業(yè)的鹽酸頭孢他美酯中均可能含有異丙醇與知識庫中數(shù)據(jù)與知識庫中數(shù)據(jù)第52頁,共74頁，2024年2月25日，星期天證明

以初篩結(jié)果作為檢測對象（異丙醇）采用等溫色譜系統(tǒng)：SPB-1，40℃

供試品中色譜峰的保留時間與異丙醇對照品的保留時間比較----與對照品保留時間一致標準加入法：

樣品溶液對照品+樣品溶液證明供試品中的色譜峰為異丙醇第53頁,共74頁，2024年2月25日，星期天確證

氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用測定結(jié)果1.待測溶劑2.異丙醇進一步確證此物質(zhì)為異丙醇第54頁,共74頁，2024年2月25日，星期天在等溫色譜系統(tǒng)中進一步判斷產(chǎn)品中可能使用過的其它溶劑及其它可能存在的干擾在40℃等溫條件下，將7個企業(yè)的樣品濃度由0.1g/ml提高到0.5g/ml，進一步考察樣品中可能存在的其它微量殘留溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個企業(yè)的樣品中可能殘留有石油醚；經(jīng)與石油醚對照品比較，確定TR在8～17min間的一組色譜峰確實為石油醚

1.異丙醇2.DMSO引入的雜質(zhì)峰

石油醚對照品樣品第55頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

結(jié)合企業(yè)提供的工藝信息確定藥品質(zhì)量標準中應控制的殘留溶劑生產(chǎn)廠申報生產(chǎn)工藝中用到的溶劑實際檢測出的殘留溶劑A甲苯、二氯甲烷異丙醇B甲苯、二氯甲烷異丙醇、石油醚C乙醇、丙酮異丙醇D乙酸乙酯異丙醇E二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯異丙醇、石油醚F二氯甲烷異丙醇、石油醚G異丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲醇異丙醇第56頁,共74頁，2024年2月25日，星期天2、建立鹽酸頭孢他美酯殘留溶劑檢測方法

根據(jù)“知識庫”建立初步的測定方法色譜柱系統(tǒng)：SPB-1----可完全分離

HP-INNOWAX---保留值較小，分離效果不好溶解介質(zhì)：鹽酸頭孢他美酯不溶于水，且酸堿性溶液會使酯鍵水解，故選擇有機溶劑，DMF與待測殘留溶劑甲苯保留值相近，所以選擇DMSO作為溶劑內(nèi)標：首先選用丁酮，但發(fā)現(xiàn)丁酮與供試品有較強的相互作用，不宜作為內(nèi)標；而正丙醇在SPB-1色譜柱上與待測的諸溶劑能較好分離，且不與供試品發(fā)生相互作用，故作為內(nèi)標。甲苯在色譜系統(tǒng)中的保留值與其它溶劑相差較大，故增加甲基異丁基酮作為測定甲苯的內(nèi)標第57頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

干擾因素的排除鹽酸頭孢他美酯的結(jié)構(gòu)中有甲氧基，在較高的頂空溫度下會熱降解產(chǎn)生甲醇，故頂空溫度一般不宜超過70℃分別在60℃，80℃，100℃的頂空條件下分析樣品，比較測定結(jié)果。除甲醇外，頂空過程中未出現(xiàn)其它熱降解產(chǎn)物的干擾為防止樣品在頂空過程中熱降解產(chǎn)生甲醇，確定頂空溫度為60℃第58頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

計算機輔助優(yōu)化選擇出最優(yōu)的程序升溫方法：柱溫:40℃，保持15min；再以10℃/min的升溫速率上升到120℃，保持3min

1.甲醇2.乙醇3.丙酮4.異丙醇5.二氯甲烷6.內(nèi)標正丙醇7.乙酸乙酯8.內(nèi)標甲基異丁基酮9.甲苯10.DMSO第59頁,共74頁，2024年2月25日，星期天3殘留溶劑檢測方法的驗證線性最低檢測限重復性回收率第60頁,共74頁，2024年2月25日，星期天4.總結(jié)

1.建立殘留溶劑檢測方法：建立藥品質(zhì)量標準殘留溶劑檢查方法不同于對樣品中的殘留溶劑進行檢測。后者只要檢測出樣品中實際存在的殘留溶劑即可，但前者應適用于對所用企業(yè)、不同時期的同品種產(chǎn)品的測定。因此，所有工藝中用到的有機溶劑，不管其是否在質(zhì)量標準中被控制，應均不干擾測定。此外，排除各種可能的干擾作用，特別是熱降解干擾是建立殘留溶劑檢測方法的關鍵。而準確性（回收率實驗）和重復性則是殘留溶劑檢測方法驗證實驗的關鍵指標。第61頁,共74頁，2024年2月25日，星期天

2.由于企業(yè)在生產(chǎn)過程中可以不斷改進其生產(chǎn)工藝，雖然在建立藥品質(zhì)量標準殘留溶劑檢查方法時已經(jīng)盡可能地考慮了不同生產(chǎn)工藝的影響，但在實際檢測中仍有可能檢測到質(zhì)量標準中未規(guī)定的殘留溶劑，根據(jù)2010年版《中華人民共和國藥典》的有關規(guī)定，如果檢出的溶劑超出了2010年版《中華人民共和國藥典》附錄中規(guī)定的限度，該樣品仍為不符合規(guī)定第62頁,共7