WS-T 834-2024 剛地弓形蟲試驗臨床應(yīng)用

WSWS/T834—2024ClinicalapplicationoftestsforToxoplasmaWS/T834—2024I——將安全預(yù)防措施更改為生物安全（見4，2013年版的6年版的4.1），在直接鏡檢中增加了概述（見6.2.1.1）、體液標(biāo)本（見6.2檢測指標(biāo)（見6.3.2）和抗體檢測方法（見6.3.3），刪除了剛地弓形蟲IgG抗體檢測2013年版的4.2.4）和剛地弓形蟲IgE抗體方法的選擇中增加概述（見6.4.1）、初篩實驗室（見6.4.2）和確證實驗室7.2)、實驗室內(nèi)結(jié)果可比性（見7.3）和實驗室加了概述（見8.1），將確定抗體狀況更改為特殊人群發(fā)生感染的風(fēng)險評估（見8.2，見2013將新生兒感染的診斷更改為先天性感染的診斷（見8.5，見2013年——在附錄A中新增檢驗程序性能驗證（見A.2刪除了試驗選擇（見2013年版的A.2）、假陽性WS/T834—20241剛地弓形蟲試驗臨床應(yīng)用GB/T38576人類血液樣本采集與GB/T38735人類尿液樣本采集與WS/T573感染性疾病免疫測定程序及結(jié)果報告WS/T661靜脈血液標(biāo)本采集指南CNAS-CL02-A001醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則的應(yīng)用CNAS-GL037臨床化學(xué)定量檢驗程序性能驗CNAS-GL038臨床免疫學(xué)定性檢驗程序性能驗3.1剛地弓形蟲Toxoplasmagondii3.2身有核細胞內(nèi),形成包囊后可長期寄生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)或橫紋肌內(nèi),免疫功能正常情況下可不出現(xiàn)明顯WS/T834—202423.3免疫功能低下者或缺陷者易發(fā)病，為機會性人4生物安全險較高的直接鏡檢和組織培養(yǎng)等操作過程中，存在感染相關(guān)人員的風(fēng)險，應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)學(xué)實驗室安通?？稍?20℃以下冷凍保存180天。凍存標(biāo)本如需多次使用，能分裝的應(yīng)分裝，避免多次凍融。不同5.2直接鏡檢標(biāo)本和組織活檢標(biāo)本（腦組織、淋巴結(jié)、肺組織、骨髓、肝臟組織、脾臟組織等）。骨髓標(biāo)本應(yīng)使用EDTA5.3組織培養(yǎng)標(biāo)本5.4核酸檢測標(biāo)本W(wǎng)S/T834—202435.5血清學(xué)檢測標(biāo)本6.1概述6.2病原學(xué)檢查將染液覆蓋涂片、印片或是切片表面，染色1min～3min，滴加WS/T834—20244血清或體液中的循環(huán)抗原比特異性抗體出現(xiàn)早，是篩查病原體存在的重要依據(jù)，可使用ELISA雙抗附錄A。目前國內(nèi)尚無通過國家藥品監(jiān)督管理局注冊的弓形蟲抗原檢測試劑盒。如果實驗室自行研制檢為確定是否感染，可應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)如聚合靈敏度起著至關(guān)重要的作用。目前國內(nèi)尚無通過國家藥品監(jiān)督管理局注冊的弓形蟲PCR試劑盒為靶基因，引物和探針相結(jié)合使用不僅可提高檢測的特異性和靈敏度，而且無需進行PCR擴增后的產(chǎn)物6.3抗體檢測WS/T834—20245血清學(xué)檢測弓形蟲抗體是目前臨床實驗室診斷弓形蟲感染的主要方法。IgM、IgG、IgA、IgE和IgG親和力檢測均有助于弓形蟲感染和弓形蟲病的診斷，檢測方法主要包括ELISA、化學(xué)發(fā)光免疫分析及免IgM：感染后第1周即可在血清中檢測到，被認(rèn)為是急性弓形蟲病早期敏感的診斷指標(biāo)期感染。定量IgG抗體4倍以上滴度或濃度增高可提示近期活動親和力檢測是區(qū)分既往和近期感染的另一指標(biāo)。高IgG親和力提示感染至少發(fā)生在3個月～5個月之前，CLIA是目前弓形蟲IgG和IgM抗體測定的主流方法，其精密度、靈敏度和特異性均高于ELISA，可以WS/T834—20246ICT可定性檢測弓形蟲IgG和IgM抗體。將特異性抗原固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)6.4檢驗方法的選擇為弓形蟲病診斷較難，應(yīng)將IgG、IgM和IgG親和力檢測結(jié)果提示可能近期感染的患者標(biāo)本送至弓形蟲病目前國內(nèi)尚無官方認(rèn)可的弓形蟲病確證實驗室，此處確證實驗室特指除開展弓形蟲抗體IgG、IgM和IgG親和力檢測外，還同時開展弓形蟲病原學(xué)檢查的實驗室。該類實驗室通常至少應(yīng)開展弓形蟲血清7.1概述樣品可以獲取，因此本部分主要規(guī)定弓形蟲7.2室內(nèi)質(zhì)控實驗室應(yīng)常規(guī)開展弓形蟲檢測項目的室內(nèi)質(zhì)控。每檢測日或分析批使用陰性、弱陽性和/或陽性外7.3實驗室內(nèi)結(jié)果可比性77.4實驗室間結(jié)果比對結(jié)果不一致時應(yīng)分析不一致的原因，必要時，采取有效的糾正措施。應(yīng)保留參加能力驗證/8.2特殊人群發(fā)生感染的風(fēng)險評估篩查血清中的弓形蟲IgG抗體，選擇ELISA或CLIA等靈敏度高的試驗即可。IgG抗體陰性一般提示未——育齡婦女妊娠前：免疫力正常的婦女弓形蟲IgG抗體陽性提示有免疫力，將感染垂直傳播給胎——首次HIV陽性確診后：弓形蟲IgG抗體陽性且CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100/μL,提示存在需要治療——器官移植供者捐贈前：供者弓形蟲IgG抗體陽性提示受者存在器官移植發(fā)生弓8.3急性獲得性感染的診斷WS/T834—20248---±不確定：重新采集標(biāo)本檢測IgM；如果結(jié)果仍是±,應(yīng)3周內(nèi)重新采集標(biāo)本檢測。-+±-不確定：重新采集標(biāo)本檢測IgG；如果結(jié)果仍是±,應(yīng)3周內(nèi)重新采集標(biāo)本檢測?！馈馈?+-+±不確定：重新采集標(biāo)本檢測IgM；如果結(jié)果仍是±,應(yīng)3周內(nèi)重新采集標(biāo)本檢測。++8.4妊娠及孕前感染診斷所有孕婦應(yīng)盡早（妊娠前3個月最為理想）進行弓形體抗體IgG和IgM的篩查試驗。妊娠期感染診斷和采取及時的治療十分重要。疑似母體感染孕婦應(yīng)轉(zhuǎn)至有胎兒醫(yī)學(xué)的產(chǎn)前診斷機構(gòu)進行診治。妊娠后第1次檢測弓形體抗體IgG和IgM，如果在妊娠的較早階段（4周～12周）IgG抗體陽性、IgM8.5先天性感染的診斷WS/T834—20249或10天后復(fù)測弓形蟲IgA仍為陽性，提示先天性弓形蟲感染?？梢芍袠猩窠?jīng)系統(tǒng)感染時，采集腦脊液進8.6眼部感染的診斷呈升高趨勢，因此弓形蟲IgM抗體陰性不能排除眼部弓8.7免疫功能低下者感染的診斷組織、胎盤等部位中的蟲體進行直接鏡檢、分離培養(yǎng)或核酸檢測來確所有艾滋病病毒感染者確診后應(yīng)立即檢測弓形蟲IgG抗體以發(fā)現(xiàn)潛伏感染。大多數(shù)弓形蟲腦炎的艾WS/T834—2024A.1試劑盒目前屬于體外診斷試劑第三類產(chǎn)品的弓形蟲抗體IgG、IgM和IgG親和力測定試劑盒A.2檢驗程序性能驗證WS/T834—2024B.1.1B1基因序列（基因序列號AF1gaattcgttcgacagaaagggagcaagagttgggactaaatcgaagctgagatgctcaaagtcgaccgcgagatagaagggctgactcgaaccagatgtgctaaaggcgtcattgctgttctgtcctatcgcaacggagttcttcccagacgtggatggttccgcctccttcgtccgtcgtaatatcaggccttctgttctgttcgctgtctgtctagggcacccttactgcaagagagaggtcatatcgtcccatgaagtcgaccacctgtttcctctcttcactgtcacgtacgacatcgcattcaagggaagagatctctcgttcgtgtattcgagacaagagaggtccgcccccacaagacggctgaagaatgcaacattcttgtgctgcctcctctcatgccagaagaagggtacgtgttgcatcataacaagagctgtatttcccgctggcaaatacaggtgaaatgtacctccagaactagtatcgtgcggcaatgtgccacctcgcctcttgggagaaaaagaggaagagacgctgccgctgttttgcaaatgaaaagtttcgcagtacaccaggagttggattttgtagagcgtctctcttcaagcagcgtattgtcgagtagatcagaaaggaactgccatgagtataagaaaaaaatgtgggaatgaaagagacgctaatgtgtttgcataggttgcagtcactgacgagctcccctctaaaagtgaaattcatgagtatctgtgcaactttggtgtattcgcagattggtcgcctgcaatcgatagttgaccacgaacgcaacaggagaagaagatcgtgaaagaatacgagaagaggtacacagagatagaagtcgctgcggagacagcgaagactgcggaactcccgtcgcaccagcagcagaggagtgccgggcaagaaaatgagatgcctagaggagacacagcgtgttatgaacaaatcgtttcgcgaagaggagggaacatattatatacagaagaagaacaagagacgtgccgcatgtcgctaagccatcggaagggataaatggcacagtatcacattacagttccgttgattcgtctgatggtgacgaaaggggaagaatagttgtcgcaccaaaactggttattttgaagaagacgagagatggagtgaaccaccaaaaatcggagaaaatcgatggtgtcacgttttttgtcagacttcttccagcaacttctgcctttgttcttttagcctcaatagcaggatgacgcctccctcctatctttcagccaacccagcaaacaactctctgtagagtaacaaagagaaggcaaaacgcgccatcacgaacactcgcagagatgatacagagacgtgtcatcaggtggtcgcttaattttctgtatatagcatttttagaatgcacctttcggacctcaacaaccgtgcaaaaggatcgccacctggtcaagcgtcaaaacgaactatctgtatatctctcaaggaggactggcaacctggtgtcgacaacagaacagctgcagtccggaagccatgaggcactccaacgggcgagtagcacctgaggagatacaaactgctaaacggtccgggtgaaacaatagagagtagtcgccgctactgcccagttgtcatgccatcgacgtagacccagaaatgaggcgagaaattaatattgttagtaaagcattctccggtcgagaggctaaaccacaaaagtgcaaaccatgcgcagccatcagcttaacaaaagcagttggtgatggttgcctcgtctgaaaatggattacttcatcaacgagcccaccacgcagaatcatgctttcccagtgctaaagcgtttctaaagtagccgcggaatgctaaggggatcgcctacgtagcacatgttgtgcctcaccccccagctcgtgcgctcattctcctttcgtgcgcg探針序列5'-CAACAACTGCTCTAGCG-3'（5'端標(biāo)記熒光發(fā)光基團如6-carboxyfluorescein，3'端標(biāo)記熒光WS/T834—2024ctgcagggaggaagacgaaagttgtttttttatttttttttctttttgtttttctgatttttgttttttttgatgcgtctgtcgggatgagaccgcggagccgaagtgcgttttctttttttgacttttttttgttttttcacaggcaagctcgcctgtgctttttcctggagggtggaaaaagagacaccggaatgcgatccagacgagacgacgctttcctcgtggtgatggcggagagaattgaagagtggagaagagggcgagggagacagagtcggaggcttggacgaagggaggaggaggggtaggagaggaatccagatgcactgtgtctgcaB.2.2AF146527靶序列擴增反應(yīng)體系（正向引物序列5'-GCTCCTCCAGCCGTCTTG-3'，反向引物序列5'-TCCTCACCCTCGCCTTCAT-3'，TaqMan探針序列5'-AGGAGAGATATCAGGACTGTA-3'（5'端標(biāo)記熒光發(fā)光基團如6-carboxyfluores