腎功能檢查的方法評價(jià)

腎功能檢查的方法評價(jià)一、概述腎病常用實(shí)驗(yàn)室檢查尿液檢查腎活檢病理檢查腎功能檢查腎小球?yàn)V過功能腎小管功能第2頁,共27頁，2024年2月25日，星期天腎小球功能檢查內(nèi)生肌酐清除率血清肌酐測定血清尿素測定GFR測定血β2-微球蛋白測定腎小球功能檢查第3頁,共27頁，2024年2月25日，星期天腎小管功能檢查近端腎小管功能檢測：尿

2、α1微球蛋白腎小管功能遠(yuǎn)端腎小管功能檢測晝夜尿比密尿滲量自由水清除值（CH2O）尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶

（NAG）第4頁,共27頁，2024年2月25日，星期天測定血液中非蛋白氮成份是衡量腎功能的重要指標(biāo)。血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低分子量含氮化合物的總稱，主要是尿素，約占50%左右，其它尚有尿酸（UA）、肌酐（Cr）、氨基酸(aa)、核苷酸、肽類及氨等。它們由蛋白分解而來，主要由腎臟排出。第5頁,共27頁，2024年2月25日，星期天方法過去是測定NPN（非蛋白氮，non-proteinnitrogen）的量，操作繁瑣、結(jié)果分析復(fù)雜?，F(xiàn)在是測定尿素、

Cr等腎功指標(biāo)。第6頁,共27頁，2024年2月25日，星期天二、血清尿素（Urea）的測定1、早期的生化方法測定尿素是用氮定量的方法，故臨床上仍習(xí)慣將尿素測定稱為尿素氮測定。每60克尿素含氮28克,1mmol/LBUN=1/2mmol/LUrea。2、尿素來源：是體內(nèi)氨基酸分解的終產(chǎn)物之一，由氨基酸生成NH3和CO2,主要在肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)的代謝過程而逐步合成，經(jīng)血液運(yùn)輸至腎、由尿液排出體外。全血值較血清值低，臨床上常測血清標(biāo)本。3、單位：WHO推薦用mmol/L

Urea表示濃度。第7頁,共27頁，2024年2月25日，星期天血清尿素（Urea）測定的方法直接法---二乙酰一肟法：WHO推薦的常規(guī)方法間接法---尿素酶法（參考方法）決定性方法---ID-MS第8頁,共27頁，2024年2月25日，星期天（一）二乙酰一肟法1、原理：尿素與二乙酰一肟在強(qiáng)酸溶液，經(jīng)加熱生成紅色二嗪衍生物，稱為Fearon氏反應(yīng)，在540nm比色。二乙酰一肟+H2O+H+

雙乙酰+羥胺

雙乙酰+尿素+H+

紅色二嗪衍生物+2H2O加熱加熱第9頁,共27頁，2024年2月25日，星期天2、注意事項(xiàng)①羥胺是干擾物質(zhì)，要用氧化劑除去，如過硫酸鹽、砷酸、過氯酸、氯胺T以及一些陽離子?，F(xiàn)在磷酸即做酸介質(zhì)又作氧化劑。②加入氨基硫脲和Fe3+

（有氧化作用可以消除羥胺的干擾）或Cd2+（鎘離子）可增加呈色的穩(wěn)定性，提高反應(yīng)靈敏度。③在呈色反應(yīng)時(shí)，A要逐漸降低，30分鐘內(nèi)降低6%，1h降低12%，2h降低15%，所以宜在30分鐘內(nèi)比色。第10頁,共27頁，2024年2月25日，星期天3、評價(jià)

優(yōu)點(diǎn)①WHO推薦的常規(guī)方法，簡便快速精確②550nm波長比色最靈敏，且可摒除蛋白干擾，故標(biāo)本無需作去蛋白處理③線性范圍寬，達(dá)140mol/L④干擾因素少：黃疸、溶血、BIL一般無影響⑤特異性較好：少量鳥氨酸循環(huán)的中間產(chǎn)物（瓜氨酸）等要干擾反應(yīng)，但含量甚微，可認(rèn)為無影響第11頁,共27頁，2024年2月25日，星期天缺點(diǎn)①特異性不如酶法②強(qiáng)酸有刺激性、腐蝕性③反應(yīng)期間有臭味第12頁,共27頁，2024年2月25日，星期天（二）尿素酶法（脲酶法）1、原理：先用尿素酶特異性地水解尿素，生成氨和CO2，再用一些方法來定量。尿素+H2O

2NH3+CO2進(jìn)一步可用以下方法定量：①②③④尿素酶第13頁,共27頁，2024年2月25日，星期天①Berthelot氏反應(yīng)（尿素酶-靛酚顯色法、酚-次氯酸顯色法、脲酶－波氏比色法）：原理：

NH4++NaClO+2酚吲哚酚+5NaCl+5H2O吲哚酚：藍(lán)色解離型（630nm）催化劑：亞硝基鐵氰化鈉評價(jià)：簡便，專一性好靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，批內(nèi)CV2.7-3.9%，血清用量少（10μl即可），最終稀釋度大，故不需要去蛋白。參考值：2.86-8.2mmol/LOH-第14頁,共27頁，2024年2月25日，星期天②尿素酶-納氏試劑顯色法碳酸銨+納氏試劑+8NaOH→2[Hg2ONH2]I棕黃色沉淀+8KI+6NaI+NaCO3+6H2O③尿素酶-谷氨酸脫氫酶法:α-酮戊二酸+NH4++NAD(P)H+H+反應(yīng)要消耗NAD(P)H，340nm測A的減少，用終點(diǎn)法或速率法。④電化學(xué)方法尿素由非離子化狀態(tài)→NH4+，可用自動化電導(dǎo)儀測定導(dǎo)電率變化；或用NH4+ISE來測定電位變化。谷氨酸脫氫酶NAD(P)++H2O+谷氨酸第15頁,共27頁，2024年2月25日，星期天2、評價(jià)優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確性好要求：①尿素酶是蛋白，故酸、堿、重金屬均會破壞或影響其活性。②pH、溫度、時(shí)間要嚴(yán)格掌握③防止環(huán)境中的NH3污染。(①②為酶促反應(yīng)的特點(diǎn))第16頁,共27頁，2024年2月25日，星期天三、肌酐(Cr)的測定肌酐是肌酸的代謝產(chǎn)物，由腎臟排出。血液中也有少量的肌酐，一般與BUN同時(shí)測定，用以了解腎功，兩者比值(血清BUNmg/dl:血清Crmg/ml)在正常情況下為12~20，計(jì)算比值可粗略判斷腎性或腎外因素所致的氮質(zhì)血癥，還可測血與尿中肌酐，以計(jì)算腎小球?yàn)V過率。方法：決定法方法ID-MS、離子交換層析法，

參考方法：HPLC

常規(guī)方法：去蛋白苦味酸顯色(Jaffe反應(yīng))法、不去蛋白Jaffe擬一級動力學(xué)法(速率法)酶法第17頁,共27頁，2024年2月25日，星期天(一)、苦味酸法(Jaffe氏反應(yīng))1、原理：Jaffe于1886年報(bào)告的。肌酐與苦味酸在堿性介質(zhì)中生成橙紅色(510nm)的苦味酸肌酐復(fù)合物。2、消除假肌酐干擾的方法：

假肌酐：血漿中的葡萄糖、VitC、丙酮酸、蛋白質(zhì)、乙酰乙酸、丙酮等均能與堿性苦味酸作用，生成紅色化合物。在Jaffe氏反應(yīng)中，約占總量的1/4，RBC內(nèi)更高，故測定肌酐時(shí)一般用血漿或血清標(biāo)本。消除假干擾的方法：①②③④⑤第18頁,共27頁，2024年2月25日，星期天①制備無蛋白血濾液或在反應(yīng)體系中加入十二烷基硫酸鈉(SDS)，與蛋白形成不與苦味酸起反應(yīng)的復(fù)合物，加入硼砂與葡萄糖、VitC形成非反應(yīng)的復(fù)合物。②二次比色法：特異性高，可用血清直接測定。Jaffe氏反應(yīng)后先進(jìn)行第一次比色，測得真假肌酐的總A，再在反應(yīng)體系中加入肌酐酶或6N的醋酸，以分解真肌酐，再進(jìn)行一次比色測假肌酐，二次A值之差即為真肌酐的A值第19頁,共27頁，2024年2月25日，星期天③用硅酸鋁土或陽離子交換樹脂等吸附真肌酐，再洗脫、Jaffe氏反應(yīng)。方法繁雜、準(zhǔn)確度受影響。④用控制pH值的方法來消除干擾：在pH12時(shí)，假肌酐的干擾很小。在pH10時(shí)，作一個(gè)血清蛋白，減去空白和蛋白干擾糾正常數(shù)⑤速率法：特異、快速，用于自動化分析儀在Jaffe氏反應(yīng)中，乙酰乙酸在最初20秒與苦味酸形成復(fù)合物較快，在20~80秒間則主要是真肌酐起起反應(yīng)，80秒以后是其他干擾物。于是測定反應(yīng)后20~60秒間A第20頁,共27頁，2024年2月25日，星期天(二)、酶法評價(jià)：特異性高、快速、操作簡便。但酶試劑來源較困難、操作中溫度、pH值、保溫時(shí)間均要控制。方法：①部分酶法:Jaffe氏反應(yīng)后肌酐酶二次比色法、肌酐酶法②全酶法：第21頁,共27頁，2024年2月25日，星期天1、肌酐亞氨基水解酶(肌酐酶)法肌酐+H2O

NH4++N-甲基乙內(nèi)酰脲再對NH4+進(jìn)行定量，方法如下：①NH4+離子選擇電極法②用指示劑(溴酚藍(lán))與銨染色定量③偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶法：

α-酮戊二酸+NH4++NAD(P)H+H+

NAD(P)++H2O+谷氨酸(340nm測定A值變化)注：以上方法測NH4+要防止內(nèi)源性氨、環(huán)境氨的污染肌酐酶谷氨酸脫氫酶第22頁,共27頁，2024年2月25日，星期天2、肌酐酰氨基水解酶法(全酶法)谷氨酸脫氫酶肌酸肌酐+H2O評價(jià)：特異性高、可用終點(diǎn)法或速率法肌酸激酶磷酸肌酸ATPADP丙酮酸激酶丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸NAD(P)H+H+NAD+LDH測定340nmA值的變化第23頁,共27頁，2024年2月25日，星期天3、HPLC：參考方法應(yīng)用離子對技術(shù)，反向柱，于200nm波長定量評價(jià)：高度特異性，但要一定的技術(shù)條件第24頁,共27頁，2024年2月25日，星期天內(nèi)生肌酐清除率測定(Ccr)外源性肌酐肌酐內(nèi)生性肌酐

大部分從腎小球?yàn)V過，不被腎小管重吸收，排泌量很少，其清除率基本代表GFR。第25頁,共27頁，2024年2月25