關(guān)于膽紅素的若干問題

關(guān)于膽紅素的若干問題宋克征（總工程師）寧波美康生物科技有限公司學(xué)術(shù)講座5/8/20241關(guān)于膽紅素的若干問題珠蛋白COFe2+膽綠素還原酶NADPH+H+NADP+Hb血紅素膽綠素膽紅素血紅素加氧酶系一、來源單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)）（一）膽紅素的代謝5/8/20242關(guān)于膽紅素的若干問題膽紅素線狀結(jié)構(gòu)膽紅素的X線衍射結(jié)構(gòu)二、結(jié)構(gòu)與性能5/8/20243關(guān)于膽紅素的若干問題三、膽紅素在血液中的運轉(zhuǎn)白蛋白與膽紅素結(jié)合的意義（1）可以進(jìn)入血液循環(huán)。（2）可以阻止膽紅素透過細(xì)胞膜，進(jìn)入血腦屏障。5/8/20244關(guān)于膽紅素的若干問題四、與膽紅素競爭白蛋白的因素pH環(huán)境和鈣離子某些陰離子藥物：磺胺類抗菌素、巴比妥和水楊酸鹽游離脂肪酸等白蛋白的分子濃度5/8/20245關(guān)于膽紅素的若干問題五、膽紅素在肝細(xì)胞內(nèi)的代謝膽紅素葡萄糖醛酸一酯膽紅素葡萄糖醛酸二酯（結(jié)合膽紅素）攝取結(jié)合排入膽汁血液白蛋白－膽紅素（間）白蛋白膽紅素（間）連接蛋白－膽紅素連接蛋白2UDP葡萄糖醛酸2UDP葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）連接蛋白肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素5/8/20246關(guān)于膽紅素的若干問題雙葡萄糖醛酸酯占85-90％單葡萄糖醛酸酯占10-15％六、結(jié)合膽紅素的結(jié)構(gòu)5/8/20247關(guān)于膽紅素的若干問題七、膽紅素在腸道的運轉(zhuǎn)進(jìn)入新一輪的膽紅素代謝5/8/20248關(guān)于膽紅素的若干問題（二）黃疸黃疸的分類（1）

溶血性黃疸，肝前性黃疸（2）肝細(xì)胞黃疸，肝性黃疸（3）阻塞性黃疸，肝后性黃疸（4）體質(zhì)性黃疸，慢性先天性黃疸5/8/20249關(guān)于膽紅素的若干問題（三）δ膽紅素一、δ膽紅素的結(jié)構(gòu)和性能二、δ膽紅素存在的意義5/8/202410關(guān)于膽紅素的若干問題一、δ膽紅素的結(jié)構(gòu)和性能δ膽紅素的半衰期為17-23天δ膽紅素不被肝細(xì)胞攝取，不能通過腎小球85%δ膽紅素與重氮試劑呈直接反應(yīng)δ膽紅素具有良好的穩(wěn)定性δ膽紅素有一個新名稱——膽蛋白非酯型酯型5/8/202411關(guān)于膽紅素的若干問題二、δ膽紅素存在的意義膽紅素多了一個成分。

TBIL=Bu＋mBc+dBc＋Bδδ膽紅素的發(fā)現(xiàn)讓人們認(rèn)識到臨床好轉(zhuǎn)但黃疸不退的真實原因。δ膽紅素的出現(xiàn)讓人們懂得了用測Bc代替直接膽紅素的測定，這樣可以更加直接地了解真實病情。計算Bδ/TBIL有助于判斷恢復(fù)期肝病的預(yù)后。δ膽紅素在正常人以及高Bu病人（新生兒黃疸）中缺乏。δ膽紅素僅在那些脂型高膽紅素血癥的病人血清中被檢測到。5/8/202412關(guān)于膽紅素的若干問題（四）新生兒膽紅素一、新生兒的生理性黃疸50-60%足月產(chǎn)的嬰兒和大于80%的早產(chǎn)兒于出生后2-3天出現(xiàn)黃疸，4-5天出現(xiàn)高峰。一般足月兒兩周內(nèi)消退，早產(chǎn)兒3-4周消退。生理性黃疸的上限：足月兒<205.2μmol/L早產(chǎn)兒<257μmol/L二、病理性黃疸的特點1.生后24小時內(nèi)出現(xiàn)2.重癥黃疸>205-265μmol/L3.持續(xù)時間長4.可以退而再現(xiàn)5/8/202413關(guān)于膽紅素的若干問題三、核黃疸的風(fēng)險下面列出的數(shù)據(jù)供我們檢驗新生兒膽紅素的時候作為警戒性的參考足月新生兒膽紅素>308-362μmol/L

早產(chǎn)病弱兒膽紅素>137-205μmol/L

有可能出現(xiàn)新生兒的核黃疸。提示盡快進(jìn)入藍(lán)光治療。光療十分有效，膽紅素會迅速下降。用420-470nm波長，每日可下降51.3-85.5μmol/L。光療的機理在藍(lán)光照射下，體內(nèi)的膽紅素很快會從ZZ構(gòu)型轉(zhuǎn)化為EE構(gòu)型，使膽紅素的極性增加，能溶于水，從而有害的毒性膽紅素（Bu）會大量從尿和膽汁中排出體外。5/8/202414關(guān)于膽紅素的若干問題（五）膽紅素的檢測一、SFDA對膽紅素測定的新要求標(biāo)準(zhǔn)化：企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)，逐級升高。量值溯源：通過一條比較鏈，使檢測的結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)值與國家標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來。檢測系統(tǒng)：完成一個項目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序等的組合，量值溯源要求采用整個檢測系統(tǒng)?；w效應(yīng)5/8/202415關(guān)于膽紅素的若干問題基體效應(yīng)分析樣品中，除分析物以外的所有其他物質(zhì)和組分，稱為該分析物的基體，亦稱“介質(zhì)”或“基質(zhì)”。檢測系統(tǒng)檢測樣品中的分析物時，處于分析物周圍的所有非分析物對分析物參與反應(yīng)的影響，稱基體效應(yīng)。對定標(biāo)和質(zhì)控的基體效應(yīng)應(yīng)予以特別關(guān)注。對基體效應(yīng)大小的估計強調(diào)采用回收實驗。5/8/202416關(guān)于膽紅素的若干問題二、測準(zhǔn)膽紅素的基本方法方法不復(fù)雜，測準(zhǔn)很困難！膽紅素的特性——不穩(wěn)定存在三怕：怕熱、怕光、怕氧化羅氏公司對膽紅素不穩(wěn)定的估計cfas校正液使用說明書對膽紅素可用的穩(wěn)定時間的規(guī)定TBILDBIL15-25℃

6小時3小時2-8℃

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2周2周（只許融凍一次）5/8/202417關(guān)于膽紅素的若干問題正常值質(zhì)控異常值質(zhì)控

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2周2周（只許融凍一次）

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2周2周（只許融凍一次）5/8/202418關(guān)于膽紅素的若干問題3.基本方法的設(shè)計必須充分考慮、周到地照顧到以上關(guān)于穩(wěn)定時限的規(guī)定。安排好定標(biāo)和質(zhì)控的兩個環(huán)節(jié)，是能否測準(zhǔn)的根本關(guān)鍵。在實際的操作中，思想上要有“動”的觀念，去觀察分析結(jié)果而作相應(yīng)的修正，如果觀察不仔細(xì)，很容易脫靶，使結(jié)果超出允許范圍。5/8/202419關(guān)于膽紅素的若干問題三、化學(xué)氧化法測膽紅素的實踐按檢測系統(tǒng)規(guī)定做好準(zhǔn)備，實施舉例如下：儀器：Hitachi7060試劑：美康化學(xué)氧化法測總直膽紅素雙試劑校準(zhǔn)品：以羅氏cfas為模板，美康公司自產(chǎn)T/D兩項混合校正液（凍干品）質(zhì)控品：以羅氏高低二水平質(zhì)控為模板，美康公司自產(chǎn)T/D兩項混合質(zhì)控液（凍干品）操作參數(shù)5/8/202420關(guān)于膽紅素的若干問題5.操作參數(shù)方法：兩點終點法；反應(yīng)總時間，10分鐘；光徑，1.0cm；波長，546nm/450nm（主）；樣品:R1:R2為8:240:60(μL)步驟：樣品＋R1孵育5分鐘，測空白吸光度A1，

加入R2反應(yīng)5分鐘，測最后吸光度A2。計算：5/8/202421關(guān)于膽紅素的若干問題6.注意貫徹“動”的觀念，具體操作嚴(yán)格做到定標(biāo)與質(zhì)控使用中嚴(yán)格遵守規(guī)定的時限要求，還要做到同步操作。以上規(guī)定，可隨不同牌號的儀器，做適當(dāng)?shù)男薷?，但不能改動比例。結(jié)果評判：試劑空白吸光度<0.01

準(zhǔn)確度：優(yōu)等，靶值±10％以內(nèi)及格，質(zhì)控進(jìn)入允許范圍線性范圍：TBIL>684μmol/LDBIL>342μmol/L

r2≥0.995幾點體會5/8/202422關(guān)于膽紅素的若干問題d.幾點體會對臨床的肝細(xì)胞黃疸、阻塞型黃疸樣品直膽/總膽≥50%有時DBIL結(jié)果出現(xiàn)零值。這是正?，F(xiàn)象，答案應(yīng)在膽紅素代謝中去找。權(quán)威雜志上