細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件

細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗

解讀5/9/20241細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件主要內(nèi)容1.細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本在采集、運送中的注意事項2.抗菌藥物藥敏感試驗中藥物選擇的規(guī)則3.幾個問題的解讀5/9/20242細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的選擇和采集要求1.避免來自寄生菌的污染，應(yīng)當(dāng)保證每份標(biāo)本代表感染過程。健康宿主在感染的許多部位也可出現(xiàn)的正常菌叢，主要來自皮膚和呼吸道，它若過早、過度生長，會掩蓋真正的病原菌，干擾培養(yǎng)結(jié)果解釋。5/9/20243細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)2.選擇正確的解剖部位、合適時間、合乎規(guī)程的技術(shù)。3.活組織或針筒抽取是厭氧菌培養(yǎng)首選采集標(biāo)本方法，但絕不可冷凍，寧可在室溫中保存。4.采集足夠量標(biāo)本，標(biāo)本不足可能產(chǎn)生假陰性結(jié)果。5/9/20244細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的運送要求1、常規(guī)性細(xì)菌學(xué)檢驗，要及時送到細(xì)菌室，延遲運送影響病原菌檢出。2、如疑似對低溫敏感的淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌感染標(biāo)本應(yīng)立即處理。如：腦脊液、生殖道、眼睛、內(nèi)耳標(biāo)本，并且絕不可以冷藏。5/9/20245細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)血液培養(yǎng)血培養(yǎng)的臨床指征患者出現(xiàn)以下一種或同時具備幾種臨床表現(xiàn)時可作為血培養(yǎng)的重要指征：①發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）②寒戰(zhàn)；③白細(xì)胞增多（>10.0×109/L，特別是有“核左移”時）；④粒細(xì)胞減少（<1.0×109/L）；⑤血小板減少；5/9/20246細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件

⑥皮膚、黏膜出血，常見于溶血性鏈球菌感染的菌血癥；⑦肝脾腫大；關(guān)節(jié)疼痛；C反應(yīng)蛋白、內(nèi)毒素、降鈣素原升高等。老年菌血癥患者可能不發(fā)熱或體溫不低，如伴有身體不適、肌痛或卒中，可能是感染性心內(nèi)膜炎的重要指征。5/9/20247細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件血培養(yǎng)的次數(shù)：

美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）建議：懷疑菌血癥的成人患者：采集2~3套血培養(yǎng)標(biāo)本,只做單一的血培養(yǎng)是不允許的，結(jié)果很難解釋。嬰幼兒患者：采集兩次血培養(yǎng)標(biāo)本（不同部位）采血培養(yǎng)2~5天內(nèi)，無需重復(fù)采集，因為治療后的2~5天內(nèi)感染菌不會馬上消失。研究證明：血培養(yǎng)只做一套的陽性檢出率為65%，做2套和3套檢出率分別為80%和95%。5/9/20248細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件采血量：成人患者建議5-10ml/瓶。嬰幼兒患者建議每瓶不少于2ml（采血量不超過總血量的1%）。5/9/20249細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件重新審視血培養(yǎng)5/9/202410細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件不同部位感染敗血癥發(fā)生率5/9/202411細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件實驗室類型: 美國私立大醫(yī)院微生物實驗室

醫(yī)院病床數(shù): 800beds

微生物標(biāo)本量: 600個標(biāo)本/天

血培養(yǎng)標(biāo)本量: 150瓶/天

血培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)采樣: 3套瓶/24小時

陽性結(jié)果: 10-30株需氧或兼性厭氧菌/天,2株厭氧菌/月

BacT/ALERT3D240 7臺5/9/202412細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件

實驗室類型: 美國大型獨立實驗室

標(biāo)本來源: 14家中型醫(yī)院和一些小診所

微生物標(biāo)本量: 8000個標(biāo)本/天

血培養(yǎng)標(biāo)本量: 1400瓶/天

陽性結(jié)果: 75-100個陽性結(jié)果/天

BacT/ALERT3D240 30臺(5列,每列6臺)5/9/202413細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件1370瓶/2011年7月26日美國，亞特蘭大，埃默里大學(xué)附屬一院，1100床位平均400人次/天美國，亞特蘭大，埃默里大學(xué)附屬二院，900床位5/9/202414細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件2024/5/9Dr.HUBijie15JohnHopinksHospital香港大學(xué)瑪麗醫(yī)院每天接受血培養(yǎng)標(biāo)本300－400份！5/9/202415細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件同樣規(guī)模醫(yī)院的血培養(yǎng)數(shù)國內(nèi)多數(shù)三甲綜合醫(yī)院30~50瓶/天臺灣大學(xué)附設(shè)醫(yī)院300瓶左右/天香港瑪麗醫(yī)院300—400瓶/天5/9/202416細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件中國某三甲醫(yī)院

微生物送檢標(biāo)本分布（3200床位）

（40,000標(biāo)本/年）5/9/202417細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件血培養(yǎng)儀

血培養(yǎng)瓶血培養(yǎng)瓶應(yīng)室溫放置，不要放入冰箱冷藏。5/9/202418細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件5/9/202419細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件VITEK2細(xì)菌鑒定儀5/9/202420細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件生物安全柜5/9/202421細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件二氧化碳培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱5/9/202422細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)

血培養(yǎng)的皮膚消毒程序血培養(yǎng)抽血時要嚴(yán)格執(zhí)行以下3步法：（1）75%乙醇擦拭靜脈部位待30S以上；（2）1%—2%碘酊作用30S或10%碘伏60S，從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上；（3）75%乙醇脫碘，對碘過敏的患者，用75%乙醇消毒60S，待乙醇揮發(fā)干燥后采血。血培養(yǎng)瓶口應(yīng)以75%酒精的消毒劑處理。

5/9/202423細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)腦脊液1、CSF采集后，置于無菌試管中，培養(yǎng)標(biāo)本絕不能冷藏，每種檢驗需要最小量：細(xì)菌培養(yǎng)≧1ml，真菌≧2ml，抗酸桿≧2ml。2、CSF的收集：第一管做細(xì)菌培養(yǎng)，第二管做生化或免疫學(xué)檢查，第三管做常規(guī)檢查。5/9/202424細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)尿液1、最好留取早晨清潔中段尿清晨起床后用肥皂水清洗會陰部，女性用手分開大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿10—20ml直接排入專用的無菌管中，立即送檢。5/9/202425細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)2、滯留導(dǎo)管采集尿標(biāo)本用75%酒精消毒導(dǎo)管口，用針筒抽取5—10ml尿，置于無菌容器中送實驗室，滯留導(dǎo)管會使膀胱帶有細(xì)菌，盡可能不采用。尿標(biāo)本采集后，常規(guī)是2h內(nèi)送交細(xì)菌室，4℃冷藏的尿標(biāo)本，不超過24h。5/9/202426細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)下呼吸道標(biāo)本

標(biāo)本的來源有多種：痰、支氣管肺泡灌洗液、肺穿刺液等。尤其是痰標(biāo)本，采集痰標(biāo)本前，先要檢查口腔和咽部是否有感染灶（如口腔念珠菌?。?，以免對標(biāo)本造成污染。讓病人先用洗必泰漱口液漱口，然后生理鹽水反復(fù)漱口后，取深部痰。5/9/202427細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)糞便標(biāo)本1.常規(guī)性培養(yǎng)：直接留置糞便標(biāo)本于清潔、干燥廣口容器中送檢。2.直腸拭子：無菌拭子插入肛門2-4cm，在肛門括約肌處柔和地旋轉(zhuǎn)拭子，可在拭子上明顯見到糞便，立即送到細(xì)菌室，患者不能自行采集；

除嬰兒患者外，不推薦用拭子做常規(guī)性病原菌培養(yǎng)。5/9/202428細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)眼、耳、鼻、喉標(biāo)本耳、鼻、咽部的細(xì)菌感染病原菌一般來源于口腔?？谇恢屑扔行柩蹙灿袇捬蹙势渲車M織器官的感染不僅考慮是需氧菌，也須檢查厭氧菌；采集耳、鼻、咽拭子時易被正常菌群污染，應(yīng)在采集標(biāo)本時注意。5/9/202429細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)

眼結(jié)膜標(biāo)本：預(yù)先沾濕拭子，在結(jié)膜上滾動采集標(biāo)本。標(biāo)本在15min內(nèi)送到細(xì)菌室。眼角膜標(biāo)本：用刮勺在潰瘍或創(chuàng)傷邊緣刮取碎屑，直接接種在培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)和涂片?？谇谎什繕?biāo)本：先用一個拭子擦去潰瘍或創(chuàng)面淺表分泌物，第二個拭子采集潰瘍邊緣或底部，常規(guī)培養(yǎng)1h內(nèi)送到細(xì)菌室。5/9/202430細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)患有外耳炎患者：需要深部耳拭子，因為淺表拭子可能遺漏鏈球菌引起的蜂窩織炎。鼻標(biāo)本：用一根無菌拭子，伸進(jìn)一側(cè)鼻孔約2.5cm，與鼻黏膜接觸，輕輕地旋轉(zhuǎn)拭子，蘸取黏膜上分泌物，緩慢抽出，直接送檢。5/9/202431細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)膿液及創(chuàng)傷分泌物標(biāo)本開放膿腫：用無菌鹽水或75%酒精擦去表面滲出物，用拭子深入潰瘍基底部或邊緣部，采集二個拭子*，分別做培養(yǎng)和革蘭染色。閉鎖膿腫：用注射器抽取膿液，刺入無菌橡皮塞中送檢。5/9/202432細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)無菌體液

無菌體液是指除血液、骨髓和腦脊液外的羊膜液、后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑膜液。留取標(biāo)本時，為防止無菌體液凝固，在無菌容器內(nèi)預(yù)先加入滅菌肝素0.5mg（可抗凝5ml標(biāo)本），再注入各種穿刺液，輕輕混合。（非膿性的無菌體液、腦脊液，最好用血培養(yǎng)瓶增菌培養(yǎng)）5/9/202433細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)生殖系統(tǒng)標(biāo)本

陰道、子宮頸陷凹、子宮內(nèi)膜、生殖道創(chuàng)傷、前庭大腺、羊水膜及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。

淋病奈瑟菌檢查時，不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深取樣送檢，要避免受陰道分泌物污染拭子。5/9/202434細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件細(xì)菌培養(yǎng)

目前，我院細(xì)菌室常規(guī)培養(yǎng)均為有氧培養(yǎng)，可以做的有：普通細(xì)菌培養(yǎng)、臨床常見真菌的培養(yǎng)、支原體培養(yǎng)。*由于以上原因，對培養(yǎng)結(jié)果，要結(jié)合臨床情況進(jìn)行解釋。*5/9/202435細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

我國微生物實驗室常規(guī)試驗的藥物，普遍采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）制定的藥敏試驗指南。藥物的選擇考慮了臨床有效性、耐藥的流行情況、藥品的價格、美國食品和藥物管理局（FDA）的意見、當(dāng)前大多數(shù)人的意見，加上特定刊物文獻(xiàn)描述。*5/9/202436細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件

青霉素敏感的葡萄球菌對其它青霉素類、頭孢類和FDA批準(zhǔn)可用于葡萄球菌感染的碳青霉烯類均敏感。

青霉素耐藥，苯唑西林敏感的菌株對不耐β-內(nèi)酰氨酶的青霉素耐藥，但對耐β-內(nèi)酰氨酶的青霉素、加有β-內(nèi)酰氨酶抑制劑的青霉素、相關(guān)的頭孢類和碳青霉烯類敏感。5/9/202437細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件

苯唑西林耐藥的葡萄球菌對現(xiàn)今所有的β-內(nèi)酰氨類抗生素耐藥。因此，針對金黃色葡萄球菌，對β-內(nèi)酰氨類耐藥情況只需對青霉素和苯唑西林做藥敏。5/9/202438細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗抗菌藥物敏感試驗方法：1、測量含藥紙片周圍抑菌圈直徑大小的K—B紙片瓊脂擴(kuò)散法；2、測量藥物最小抑菌濃度（MIC）的瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。5/9/202439細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

MIC值代表的是某株細(xì)菌實際的對某種藥物的敏感程度，它的作用就是我們可以通過MIC值來計算使治療取得成功的給藥量。對于確定的某個部位的感染而言，如果分離菌的MIC值較低，我們使用較低的藥量即可達(dá)到治療效果，而如果測定出來的MIC值過高，則意味著我們需要使用更多藥量才能達(dá)到治療效果。5/9/202440細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

MIC對于制訂給藥頻率也是至關(guān)重要的，如果MIC測定值低，那么就意味著相同給藥量的情況下，維持有效濃度的時間就越長，給藥頻率就可以適當(dāng)降低；而如果MIC測定值高，那么為了維持血藥濃度在有效濃度以上，我們就必須縮短給藥間隔，增加給藥頻率，或者增加每次的給藥量以提高血藥濃度。5/9/202441細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗MIC在真菌感染臨床治療中的指導(dǎo)意義在臨床應(yīng)用中，按日劑量與MIC的比值大于50的劑量用于嚴(yán)重真菌感染，日劑量與MIC值比值為25的劑量用于一般真菌感染。5/9/202442細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件體外藥敏試驗的局限性1、CLSI藥敏標(biāo)準(zhǔn)制定中的局限性

CLSI的藥敏標(biāo)準(zhǔn)都是按血藥濃度為基礎(chǔ)制定的。目前CLSI還沒有對局部感染的藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)。面對局部感染時，按CLSI的指南制定的標(biāo)準(zhǔn)來判斷敏感性，體外藥敏結(jié)果和體內(nèi)療效可能不一致。5/9/202443細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件體外藥敏試驗的局限性

2、體外藥敏試驗不能反應(yīng)病原菌和藥物在體內(nèi)的動態(tài)變化。

不同的患者感染的病原菌不同、病原菌的數(shù)量不同、藥物與血漿蛋白結(jié)合率不同等，這些因素都會影響藥物在體內(nèi)的抗菌活性。5/9/202444細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件體外藥敏試驗的局限性3、未找到真正的感染菌

有菌部位標(biāo)本，如痰、咽試子、尿液等，在培養(yǎng)出細(xì)菌時都面臨判斷該細(xì)菌是致病菌、定植菌或污染菌的問題，而這些標(biāo)本的采集很難不污染攜帶菌?？上攵?，用定植菌或污染菌的藥敏結(jié)果去治療感染菌，是不可能獲得一致結(jié)果的。5/9/202445細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗多重耐藥菌的監(jiān)測：1、衛(wèi)生部文件；*2、多重耐藥菌的管理制度；*5/9/202446細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗臨床上重要的多重耐藥菌株示例

1.

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）：即對甲氧西林（現(xiàn)在多用苯唑西林）耐藥的金黃色葡萄球菌。它對青霉素類抗生素，包括青霉素類、頭孢類、以及含有β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合藥物如阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦等產(chǎn)生抵抗力。5/9/202447細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件MRSA萬古耐藥VRSA5/9/202448細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

MRSA的治療：由于醫(yī)院獲得性MRSA的分離率高，幾乎都是多重耐藥，對疑似重度MRSA感染患者，首先經(jīng)驗性選擇抗MRSA藥物治療，再根據(jù)藥敏結(jié)果調(diào)整到相應(yīng)敏感的藥物。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染防治專家共識。*5/9/202449細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗2.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）：細(xì)菌在持續(xù)的各種β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的選擇壓力下,被誘導(dǎo)產(chǎn)生活躍的及不斷變異的β-內(nèi)酰胺酶,擴(kuò)展了其耐受第三、四代頭孢菌素,以及氨曲南等單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的能力,這些新的β-內(nèi)酰胺酶被稱為ESBLs。5/9/202450細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件ESBLs多重耐藥5/9/202451細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

ESBLs的治療：

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌感染防治專家共識*5/9/202452細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗3、耐萬古霉素的腸球菌（VRE）

腸球菌在使用糖肽類抗菌藥物（萬古霉素）治療過程中，其自身代謝和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使細(xì)菌對糖肽類（萬古霉素）抗菌藥物敏感性下降，甚至出現(xiàn)敏感性完全喪失，即為臨床的VRE感染。

5/9/202453細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件VRE5/9/202454細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件抗菌藥物敏感試驗

VRE可分為VanA、VanB、VanC、VanD、VanE和VanG不同表型和基因型，不同分型決定了對萬古霉素和替考拉寧的不同耐藥性。vanA基因，特征為對萬古霉素和替考拉寧高度耐藥；vanB基因，特征為萬古霉素呈現(xiàn)不同程度耐藥，而對替考拉寧敏感。VRE耐藥基因可轉(zhuǎn)移給金黃色葡萄球菌等其他陽性菌。耐萬古霉素腸球菌感染防治專家共識：*5/9/202455細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件幾個問題的解讀1、涂片鏡檢結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不吻合？涂片鏡檢是報告所有可見的細(xì)菌，而培養(yǎng)的目的是檢出致病菌。一些細(xì)菌需要在特殊的環(huán)境或培養(yǎng)基上才能生長。5/9/202456細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件幾個問題的解讀

2、取的明顯就是膿液標(biāo)本，為何鑒定報告為無菌生長？我們做的是普通的有氧培養(yǎng)，膿液中可能為厭氧菌或L-型細(xì)菌感染?？赡芗?xì)菌被大量的中性粒細(xì)胞吞噬。5/9/202457細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件幾個問題的解讀3、今天的培養(yǎng)結(jié)果怎么與前天的不一樣？

取材是否規(guī)范。如痰標(biāo)本，口咽部的定植細(xì)菌比較多，選用優(yōu)勢菌做鑒定和藥敏試驗，就可能導(dǎo)致兩次不一樣。5/9/202458細(xì)菌培養(yǎng)與藥敏試驗解讀課件幾個問題的解讀4、是否能將所用的藥都做藥敏試驗?沒有可能：不是所用藥物都可以做藥敏試驗（需要藥物在體外穩(wěn)定，需要有操作標(biāo)準(zhǔn)和解釋標(biāo)準(zhǔn)）沒有必